段輝輝，王 瑞

?基礎(chǔ)研究?

燒傷創(chuàng)面治療中透明質(zhì)酸鈉對(duì)磺胺嘧啶銀藥物毒性影響的研究

段輝輝，王 瑞

(西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院整形美容頜面外科 陜西 西安 710061)

目的：將透明質(zhì)酸鈉與磺胺嘧啶銀制成混合劑，用于對(duì)大鼠燒傷創(chuàng)面模型的治療，對(duì)照分析，進(jìn)而評(píng)估聯(lián)合用藥的安全性。方法：采用大鼠制作燒傷動(dòng)物模型，隨機(jī)均等分為實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組。對(duì)照組燒傷創(chuàng)面外涂磺胺嘧啶銀，實(shí)驗(yàn)組大鼠創(chuàng)面外涂混合制劑（磺胺嘧啶銀和透明質(zhì)酸鈉），采用暴露療法，每天處理創(chuàng)面，周期21d，分別于涂藥后的3d、5d、7d、10d、14d、21d分批處理老鼠，每批每組各5只，斷頭采血，進(jìn)行肝腎功能測(cè)定，記錄、分析所得數(shù)據(jù)，計(jì)量資料組間對(duì)比，使用SPSS統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果：混合制劑組第3、5、7、10、14、21d所提取的血漿中肌酐、尿素氮、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶濃度與磺胺嘧啶銀組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)論：透明質(zhì)酸鈉與磺胺嘧啶銀在創(chuàng)面的聯(lián)合應(yīng)用，且并未出現(xiàn)明顯肝腎功能損害表現(xiàn)。

燒傷創(chuàng)面；新型制劑；磺胺嘧啶銀；透明質(zhì)酸鈉；藥理學(xué)

磺胺嘧啶銀(Silver sulfadiazine 簡(jiǎn)寫為SD-Ag)，化學(xué)式C10H9O2N4Sag，屬于國(guó)內(nèi)外燒傷創(chuàng)面治療的一線藥物[1]，同時(shí)具有銀離子和磺胺的抗菌作用。磺胺類藥物種類繁多，例如磺胺嘧啶鋅、磺胺嘧啶銀、磺胺嘧啶銅等，在各種燒創(chuàng)傷創(chuàng)面、皮膚黏膜感染創(chuàng)面的治療中，療效顯著[2-5]，抗菌活性廣譜而強(qiáng)大，臨床治療中，對(duì)于腦膜炎球菌，肺炎球菌，淋球菌，溶血性鏈球菌等感染引起的疾病均有效，體外實(shí)驗(yàn)證明對(duì)沙眼衣原體、瘧原蟲、弓形蟲等也有效[6]?；前粪奏ぴ诮Y(jié)構(gòu)上近似對(duì)氨基苯甲酸，可對(duì)二氫葉酸合成酶產(chǎn)生競(jìng)爭(zhēng)性抑制，從而導(dǎo)致細(xì)菌合成葉酸障礙，進(jìn)而影響DNA和RNA的合成代謝，抑制細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖[7]。此外，隨著各個(gè)學(xué)科的交叉學(xué)習(xí)及研究，更多的學(xué)者把磺胺嘧啶銀成功推廣應(yīng)用在其他領(lǐng)域，例如糖尿病足、潰瘍、褥瘡、唇炎等[8-9]，均取得良好效果，未發(fā)現(xiàn)明顯毒副作用。有另有報(bào)道稱，將磺胺嘧啶銀用于治療大皰性表皮壞死松解型藥疹[10]、宮頸上皮內(nèi)瘤變[11]，取得一定療效?；前粪奏ゃy應(yīng)用于治療燒傷創(chuàng)面時(shí)仍有一定的毒副作用，包括對(duì)外周血細(xì)胞及肝腎功能的影響，曾有體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)，磺胺嘧啶銀會(huì)對(duì)大鼠及人的骨髓細(xì)胞產(chǎn)生抑制作用[12]。透明質(zhì)酸（Hyaluronic acid，HA），（βl-4）D-葡萄糖醛酸和（β-l-3）N-乙酰基-D-氨基葡萄糖交聯(lián)形成的粘多糖，結(jié)構(gòu)獨(dú)特，人體內(nèi)組織細(xì)胞及間質(zhì)的重要組分之一。人體內(nèi)含量巨大，皮膚軟組織、關(guān)節(jié)液、玻璃體等組織中均大量存在[13-15]，是最主要的組織細(xì)胞形成、構(gòu)建、生長(zhǎng)發(fā)育的基質(zhì)成分，改善皮膚的營(yíng)養(yǎng)，調(diào)控分解代謝，調(diào)節(jié)皮膚組織的成熟、老化過(guò)程，減少皺紋，維持其飽滿、光滑的質(zhì)感，保持水分[16]。在生物醫(yī)藥領(lǐng)域，透明質(zhì)酸被大量合成及廣泛應(yīng)用，多用于眼科手術(shù)[17]、外科手術(shù)術(shù)中術(shù)后預(yù)防粘連[18]、關(guān)節(jié)炎的治療、藥物緩釋劑等方面，療效顯著，經(jīng)濟(jì)效益前景樂觀。透明質(zhì)酸鈉（SH）即透明質(zhì)酸的鈉鹽，實(shí)驗(yàn)證明二者作用基本等同。有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，在治療燒傷創(chuàng)面時(shí)，將透明質(zhì)酸鈉與磺胺嘧啶銀聯(lián)合應(yīng)用，既可以發(fā)揮自身保濕、抗菌、促進(jìn)愈合、減輕瘢痕等作用，又能提高磺胺嘧啶銀的藥物療效及穩(wěn)定性，從而起到協(xié)同作用，加速了創(chuàng)面的愈合速度，并提高愈合質(zhì)量[19]。本實(shí)驗(yàn)旨在研究當(dāng)二者聯(lián)合使用在治療燒傷創(chuàng)面時(shí)，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物肝腎功能是否出現(xiàn)明顯損害，以評(píng)估透明質(zhì)酸鈉對(duì)磺胺嘧啶銀藥物毒性的影響，進(jìn)而評(píng)估其聯(lián)合使用的安全性，指導(dǎo)新藥的研發(fā)。

1 材料和方法

1.1 模型建立：選取SD大鼠60只，體重為200～220g，雌雄各半。隨機(jī)均等分為實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組。常規(guī)適應(yīng)性飼養(yǎng)2d，使用水合氯醛（濃度為5%）腹腔內(nèi)注射麻醉（20mg/kg），再使用手術(shù)刀在大鼠脊柱兩側(cè)行剃毛處理，繼續(xù)飼養(yǎng)12h后開始進(jìn)行試驗(yàn)，首先使用同樣方法對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠進(jìn)行注射麻醉，使用自制燒傷儀（95℃、2.0kPa壓力、持續(xù)時(shí)間約10s），在大鼠背部脫毛區(qū)制作深Ⅱ°燒傷創(chuàng)面，直徑1.5cm，創(chuàng)面數(shù)量為5個(gè)（圖1）。

圖1 大鼠燒傷創(chuàng)面模型

1.2 給藥方法：對(duì)照組中的實(shí)驗(yàn)鼠背部燒傷創(chuàng)面外涂磺胺嘧啶銀（混懸液）治療；實(shí)驗(yàn)組中的大鼠創(chuàng)面外涂磺胺嘧啶銀和透明質(zhì)酸鈉混合制劑（混懸液）治療。創(chuàng)面暴露，無(wú)使用紗布等敷料，每天均行創(chuàng)面處理，適度清創(chuàng)并涂藥一次，實(shí)驗(yàn)周期為連續(xù)21d（創(chuàng)面用藥情況如圖2所示）。

圖2-1 實(shí)驗(yàn)組大鼠燒傷創(chuàng)面模型（涂藥后3d）

圖2-2 對(duì)照組大鼠燒傷創(chuàng)面模型（涂藥后3d）

圖2-3 實(shí)驗(yàn)組大鼠燒傷創(chuàng)面模型（涂藥后10d）

圖2-4 對(duì)照組大鼠燒傷創(chuàng)面模型（涂藥后10d）

圖2-5 實(shí)驗(yàn)組大鼠燒傷創(chuàng)面模型（涂藥后21d）

圖2-6 對(duì)照組大鼠燒傷創(chuàng)面模型（涂藥后21d）

1.3 取材方法：分別于實(shí)驗(yàn)開始3.5.7.10.14.21d取材，斷頭采血。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法：levene檢驗(yàn)方差齊性，計(jì)量資料組間對(duì)行t檢驗(yàn)，P＞0.05提示差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 實(shí)驗(yàn)中在不同時(shí)間點(diǎn)取樣后血液肌酐濃度檢測(cè)結(jié)果對(duì)照?qǐng)D表如下（表1、圖3-1）levene檢驗(yàn)提示方差齊，F(xiàn)=1.19，P=0.22，計(jì)量資料組間對(duì)行t檢驗(yàn)，P=0.15（P＞0.05提示差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義），由此證明實(shí)驗(yàn)組創(chuàng)面外用磺胺嘧啶銀及透明質(zhì)酸鈉后，與對(duì)照組相比，血液中肌酐含量改變不明顯。

2.2 實(shí)驗(yàn)中在不同時(shí)間點(diǎn)取樣后血液尿素氮濃度檢測(cè)結(jié)果對(duì)照?qǐng)D表如下（表2、圖3-2）levene檢驗(yàn)提示方差齊，F(xiàn)=1.36，P=0.32，計(jì)量資料組間對(duì)行t檢驗(yàn)，P=0.21（P＞0.05提示差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義），由此證明實(shí)驗(yàn)組創(chuàng)面外用磺胺嘧啶銀及透明質(zhì)酸鈉后，與對(duì)照組相比，血液中尿素氮含量改變不明顯。

表1 兩組血液標(biāo)本中肌酐濃度隨時(shí)間變化比較 （μmol/L,xˉ±s，n=5）

表2 兩組血液標(biāo)本尿素氮濃度隨時(shí)間變化比較 （mmol/L，xˉ±s，n=5）

表3 兩組血液標(biāo)本丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶濃度隨時(shí)間變化比較 （U/L，xˉ±s，n=5）

圖3-1 血液肌酐濃度對(duì)比圖

圖3-2 血液尿素氮濃度對(duì)比圖

圖3-3 血液丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶濃度對(duì)比圖

2.3 實(shí)驗(yàn)中在不同時(shí)間點(diǎn)取樣后血液丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶濃度檢測(cè)結(jié)果對(duì)照?qǐng)D表如下（表3、圖3-3）levene檢驗(yàn)提示方差齊，F(xiàn)=1.23，P=0.29，計(jì)量資料組間對(duì)行t檢驗(yàn)，P=0.24（P＞0.05提示差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義），由此證明實(shí)驗(yàn)組創(chuàng)面外用磺胺嘧啶銀及透明質(zhì)酸鈉后，與對(duì)照組相比，血液中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶含量改變不明顯。

3 討論

透明質(zhì)酸鈉與磺胺嘧啶銀在燒傷創(chuàng)面治療中聯(lián)合應(yīng)用時(shí)，且并未出現(xiàn)明顯的肝腎功能損害毒副作用增加表現(xiàn)?；前粪奏ゃy和透明質(zhì)酸鈉在臨床治療領(lǐng)域的功效和地位已經(jīng)得到時(shí)間的檢驗(yàn)和肯定?；前粪奏ゃy化合物本身同時(shí)具有銀離子和磺胺嘧啶兩者的作用，最突出的特點(diǎn)即為廣譜抗菌活性，對(duì)多數(shù)細(xì)菌、真菌、綠膿桿菌等有著良好的抗菌作用及很強(qiáng)的抑制作用，當(dāng)在傷口及創(chuàng)面外用磺胺嘧啶銀時(shí)，還可以促進(jìn)創(chuàng)區(qū)干燥、結(jié)痂、愈合。這些特點(diǎn)及優(yōu)勢(shì)在對(duì)燒傷創(chuàng)面治療的應(yīng)用當(dāng)中充分顯現(xiàn)出來(lái)，但在長(zhǎng)期的臨床使用及觀察中發(fā)現(xiàn)，藥物本身還存在一些不足之處。透明質(zhì)酸（HA）由D-葡糖醛酸和N-乙酰葡糖胺組成，含有二糖單元，屬于酸性粘多糖，透明質(zhì)酸因?yàn)槠洫?dú)特分子結(jié)構(gòu)和與生俱來(lái)的物理化學(xué)性質(zhì)故而獨(dú)具特性，生理功能非常重要，是到目前為止，自然界天然形成的最佳保濕物質(zhì)。透明質(zhì)酸以基質(zhì)成分廣泛存在于人體組織中，組織細(xì)胞形成、構(gòu)建、生長(zhǎng)發(fā)育的基質(zhì)成分，人體的各個(gè)部位包括結(jié)締組織、上皮組織、神經(jīng)組織等，均含量豐富。兩者聯(lián)合使用對(duì)動(dòng)物模型創(chuàng)面的愈合功效明顯增強(qiáng)，且并未發(fā)現(xiàn)明顯毒性反應(yīng)增加，但對(duì)于如何得到最佳效果，兩種藥物成分的配比、劑型仍有待進(jìn)一步研究。

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Studies on the Effects of Sodium Hyaluronate on the Pharmacological and Toxicological Effects of Silver Sulfadiazine in Burn Wound Healing

DUAN Hui-hui,WANG Rui
(Department of Plastic and Maxillofacial Surgery,the First Affiliated Hospital to the Medical School,Xi'an Jiaotong University,Xi’an 701161,Shaanxi,China)

Objective To analyze the safety of a combined mixture (hyaluronic acid sodium and silver sulfadiazine ) for the treatment of burn wounds in the rat model.MethodsThe rat models of burn injury were established. Then models were randomly divided into two groups, the experimental group and the control group. The control group was treated with silver sulfadiazine, and the experimental group was treated with the mixture of sulfadiazine silver and sodium hyaluronate for 21 days. Tissue samples were obtained at day3, day5, day7, day10, day14, and day21. The function of the liver and kidney were tested and record. Data were analyzed with SPSS.ResultsThe plasma concentration of creatinine, urea nitrogen and alanine aminotransferasee has no significant difference between the two groups (P＜ 0.05).ConclusionThere was no obvious liver and kidney damage in the combined application of sodium hyaluronate and silver sulfadiazine.

burn wounds; new preparations; silver sulfadiazine; hyaluronic acid sodium; pharmacology

R644

A

1008-6455（2017）02-0065-03

2016-10-16

2016-12-28

編輯/張惠娟

基金名稱：西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院臨床研究資助課題（2013YK37）

王瑞，1979-，男，漢族，陜西西安人，碩士研究生學(xué)歷，主治醫(yī)師，主要從事整形美容燒傷專業(yè)研究；E-mail:wangrui2133@sina.com