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強心甾類固醇信號通路及與相關(guān)疾病關(guān)系的研究進展*

婁美玉1綜述 丁國華1陳文莉2，#審校

強心甾類固醇(CTS)是一類能與鈉-鉀-ATP酶(Na+-K+-ATPase，NKA)特異性結(jié)合的化學(xué)物質(zhì)。CTS可以抑制NKA活性，在泵功能上影響細胞的濃度梯度分布。近年來研究發(fā)現(xiàn)，CTS還可以通過與NKA結(jié)合，激活信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，進而調(diào)節(jié)細胞生長、分化、凋亡和纖維化，對婦女妊娠以及在高血壓、腫瘤、心腎等疾病中發(fā)揮作用。

強心甾類固醇；鈉-鉀-ATP酶；細胞生長；信號轉(zhuǎn)導(dǎo)

強心甾類固醇(Cardiotonic Steroids,CTS)是一類能與鈉-鉀-ATP酶(Na+-K+-ATPase，NKA)特異性結(jié)合的類固醇激素，既往認為其包括來源于植物的地高辛、哇巴因等和來源于動物的布發(fā)林和海蟾蜍毒素(Marinobufagin，MBG)等兩大類，近年來發(fā)現(xiàn)人體內(nèi)亦存在CTS如哇巴因和MBG等。NKA廣泛存在于真核細胞膜，除其經(jīng)典的泵功能，即參與Na+和K+的跨膜轉(zhuǎn)運外，還具有信號轉(zhuǎn)導(dǎo)功能。CTS作為NKA抑制劑，可抑制NKA活性，即在泵功能上影響細胞的濃度梯度分布。起初臨床主要應(yīng)用CTS治療心力衰竭和心律失常。隨著進一步研究，近來發(fā)現(xiàn)CTS還能通過與NKA結(jié)合，激活信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，進而調(diào)節(jié)細胞生長、分化、凋亡和纖維化，對婦女妊娠，以及在腫瘤、心腎疾病、高血壓等疾病中發(fā)揮作用[1]。本文主要綜述CTS相關(guān)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和CTS與相關(guān)疾病的研究進展。

1 CTS及其受體

人體內(nèi)CTS為內(nèi)源性CTS，由腎上腺皮質(zhì)、胎盤及下丘腦產(chǎn)生和分泌，膽固醇是其產(chǎn)生的主要前體物質(zhì)。CTS的產(chǎn)生和分泌受多種生理和病理因素

的調(diào)節(jié)，比如鹽攝入增加、妊娠，血管緊張素II、促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)刺激等。CTS存在于腦、心、肝、腎等組織及腦脊液、血漿與尿液中，紅細胞內(nèi)亦存在。血漿中主要以游離形式和與蛋白質(zhì)結(jié)合形式存在，尿液中主要以游離形式和葡萄糖醛酸結(jié)合形式存在；游離狀態(tài)CTS在體內(nèi)具有生物學(xué)活性，主要通過與其受體NKA結(jié)合，激活信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，改變NKA的α亞基的表達量及其活性，進而調(diào)節(jié)血壓、水鹽代謝、心肌收縮以及細胞生長。CTS對NKA的敏感性不同，主要與NKA各亞基(4個α亞基和3個β亞基以及γ亞基)功能有關(guān)，α亞基可在人體組織中特異表達，其與β亞基的組合可能影響這種敏感性。

2 CTS相關(guān)信號通路

2.1 NKA/Src復(fù)合體

該復(fù)合物中的Src家族是膜相關(guān)非受體酪氨酸蛋白激酶。Tian等[2]的體外實驗表明NKA的α1亞基和Src之間至少有兩個位點，即α1亞基的CD2和CD3分別與Src的SH2和SH3結(jié)合。該結(jié)合物的NKAα亞基可與CTS結(jié)合，釋放Src的激酶結(jié)構(gòu)域，使Src得以活化，進而激活下游信號。在此過程中，NKA/Src復(fù)合物成為一種"二元"受體，當受到CTS作用后可間接影響下游蛋白的磷酸化過程，從而介導(dǎo)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。

2.2 蛋白激酶B/哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(Proteinn Kinase B/Mammalian Target of Rapamycin，PKB/Akt/mTOR)信號通路

研究[3]表明，CTS通過NKA/Src/Akt/mTOR信號通路，可誘導(dǎo)心肌細胞表現(xiàn)不同的功能效應(yīng)。當NKA表達正常時，mTOR抑制Caspase9磷酸化，抑制凋亡的發(fā)生，同時誘導(dǎo)核糖體蛋白S6激酶(Ribosomal Protein S6 Kinase，S6K)、Bcl-2/Bcl-XL相關(guān)死亡啟動因子(BAD)信號分子磷酸化，維持細胞存活；而當NKA表達下降時，mTOR對Caspase9磷酸化的抑制作用下調(diào)，對S6K、BAD信號分子磷酸化作用降低，引起心肌細胞凋亡。諸多研究證實，磷脂酰肌醇3激酶(Phosphatidylinositol 3 Kinase,PI3K/Akt)信號通路參與心肌肥厚，PI3K分為PI3Kα和PI3Kγ，前者一般引起生理性心肌肥厚，并可能預(yù)防病理性心肌肥厚，后者引起病理性心肌肥厚。Li等[4]的研究表明，哇巴因可通過PI3Kα/Akt通路引起心肌肥厚。Wu等[5]對缺乏PI3Kα轉(zhuǎn)基因小鼠和對照小鼠各自離體細胞進行實驗，觀察到僅對照小鼠心肌細胞有PI3Kα/Akt活化，心肌細胞生長，而缺乏PI3Kα轉(zhuǎn)基因小鼠并無該信號通路的活化，亦無心肌細胞生長，證實PI3Kα/Akt信號通路參與了心肌肥厚。該研究還發(fā)現(xiàn)不同濃度哇巴因均可激活相同NKAα2亞基(NKAα2)，但結(jié)果不一樣，低濃度哇巴因活化NKAα2引起生理性肥厚且阻止病理性心肌肥厚發(fā)生，高濃度哇巴因活化NKAα2引起病理性心肌肥厚和細胞死亡。

2.3 Src活化EGFR觸發(fā)的MAPK信號通路

Haas等[6]觀察到被哇巴因活化的Src可以磷酸化表皮生長因子受體(Epidermal Growth Factor Receptor，EGFR)第1 172位的酪氨酸，并激活絲裂原激活的蛋白激酶(Mitogen Activated Protein Kinases，p42/44MAPK)，募集SH2包含蛋白(Shc)、生長因子受體結(jié)合蛋白2(Grb2)以及單體GTP結(jié)合蛋白(Ras)等調(diào)節(jié)蛋白至細胞膜，進而活化Ras/Raf/絲裂原激活蛋白激酶的激酶(Mitogen Activated Protein Kinase，MEK)/細胞外信號調(diào)節(jié)激酶(Extracellular Signal Regulated Kinase，ERK)級聯(lián)反應(yīng)，發(fā)揮相關(guān)生物學(xué)作用。該作者還分別使用非特異性酪氨酸激酶抑制劑HerbinycinA和Src激酶抑制劑PP2處理大鼠血管平滑肌A7r5細胞系和等位缺失Src家族基因的SYF細胞系，發(fā)現(xiàn)哇巴因不能誘導(dǎo)上述信號蛋白活化；而在轉(zhuǎn)染c-Src的SYF細胞系，哇巴因可以劑量依賴性地激活EGFR和p42/44MAPK。Tian等[2]使用哇巴因作用于豬腎小管上皮細胞豬腎小管上皮細胞(LLC-PK1)細胞的NKA，激活Src激酶與EGFR耦聯(lián)，繼而引起瞬時和隨后持續(xù)的ERK1/2激活，最終影響核內(nèi)基因轉(zhuǎn)錄。Nguyen等[7]的研究還顯示哇巴因可刺激常染色體顯性遺傳性多囊腎病(Autosomal Dominant Polycystic Kidney Disease，ADPKD)患者囊壁上皮細胞增殖，促進囊液的分泌，在ADPKD的病程中發(fā)揮一定作用；后續(xù)的研究[8]表明這一效應(yīng)是通過哇巴因結(jié)合NKA，活化EGFR/Src/MEK/ERK信號通路實現(xiàn)的。因而抑制哇巴因依賴NKA信號通路可延遲ADPKD進展。

2.4 活性氧和細胞內(nèi)游離Ca2+NKA通過活化EGFR、Ras等， 使線粒體產(chǎn)生活性氧增多， 活性氧可以引起NKAα亞基的結(jié)構(gòu)改變，從而放大NKA信號[9]。細胞內(nèi)游離Ca2+在NKA信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中

發(fā)揮著重要的作用。NKA介導(dǎo)的MAPK信號途徑中可激活L型Ca2+通道蛋白磷酸化，導(dǎo)致Ca2+內(nèi)流，細胞內(nèi)游離[Ca2+]升高，又通過Ca2+/鈣調(diào)蛋白依賴的蛋白激酶作用于MEK，促進MAPK通道的活化，產(chǎn)生信號擴大作用。此外，NKA還可以通過激活磷脂酶C-γ進而激活蛋白激酶C，調(diào)節(jié)細胞內(nèi)游離[Ca2+]，激活核因子κB。

3 CTS與相關(guān)疾病

3.1 腫瘤

研究[10, 11]顯示CTS可選擇性抑制腫瘤細胞增殖或促進腫瘤細胞凋亡，而正常細胞不受影響，其作用機理主要是CTS通過與NKA特異性結(jié)合后，激活一系列信號通路級聯(lián)反應(yīng)，引起細胞周期改變、細胞內(nèi)外離子重新分布，影響細胞增殖和凋亡相關(guān)因子表達，介導(dǎo)腫瘤細胞凋亡，抑制腫瘤細胞增殖。較高濃度的CTS可明顯抗腫瘤活性,但其對心臟有毒性作用，已成為其投入抗癌臨床應(yīng)用的最大障礙。新近出現(xiàn)的半人工合成CTS類似物UNBS1450,不僅抗腫瘤能力強于天然CTS衍生物如洋地黃毒苷、布發(fā)林等,而且心臟毒性更小[12]。進一步研究CTS與細胞增殖和凋亡相關(guān)的作用機制,進一步對CTS衍生物進行化學(xué)修飾與篩選,對研制出具有特異性，抗腫瘤活性更強，且心臟毒性更低的CTS類抗腫瘤藥物大有裨益，也為今后治療腫瘤提供更多選擇。

3.2 心臟疾病

大多數(shù)資料顯示，充血性心力衰竭(Congestive Heart Failure，CHF)患者血漿CTS濃度均明顯升高，但也有CTS呈現(xiàn)下降趨勢的報道，出現(xiàn)這種完全相反的結(jié)果可能與患者心衰病史長短有關(guān)。洋地黃制劑治療心衰的機制復(fù)雜，比較公認的是由于CTS與NKA的α亞基結(jié)合后影響了細胞Na+和K+的轉(zhuǎn)運，造成細胞內(nèi)[Na+]升高，進而促進細胞內(nèi)的Na+與細胞外的Ca2+交換，使細胞內(nèi)[Ca2+]升高，肌漿網(wǎng)攝取Ca2+增多，而發(fā)揮治療房顫、心衰等作用。

CTS與心臟重構(gòu)和血流動力學(xué)有關(guān)。研究[13]發(fā)現(xiàn)，左心功能不全(射血分數(shù)<21%)、心臟重塑、實驗性尿毒癥心肌病患者CTS明顯升高，且與左心室質(zhì)量指數(shù)呈正相關(guān)。另有研究[14]表明，CTS對實驗性腎衰竭和實驗性尿毒癥心肌病及5/6腎切除大鼠，可促進其心臟纖維化；給予正常腎功能動物注入MBG也可誘導(dǎo)心臟纖維化；當注入抗MBG抗體或行腎上腺切除術(shù)大鼠的循環(huán)MBG水平降低，或通過增加Fli-1(心、腎等纖維化中膠原合成的負調(diào)控因子)表達和減少氧化應(yīng)激等，可能減少心肌肥厚和纖維化。有研究[3]比較了野生型和NKAα1基因敲除小鼠在注入MBG后的心功能，結(jié)果顯示，基因敲除小鼠注入MBG后可出現(xiàn)心肌細胞凋亡增加和左心室擴張，而在野生型小鼠中未見到該現(xiàn)象。表明NKA減少可使MBG誘導(dǎo)心肌細胞凋亡和心力衰竭。鹽皮質(zhì)激素受體(MR)拮抗劑螺內(nèi)酯等能減輕MBG注入誘導(dǎo)的心臟重塑、纖維化和心力衰竭[13]，其效應(yīng)不僅由于MR拮抗，可能與CTS/NKA的競爭有關(guān)。

研究[15]發(fā)現(xiàn)心臟手術(shù)前內(nèi)源性哇巴因(Endogenous Ouabain,EO)高水平患者易發(fā)生亞臨床腎損害，并極有可能因麻醉或手術(shù)而加重，增加心臟手術(shù)后急性腎損傷(Acute Kidney Injury，AKI)的發(fā)生率。因此認為EO是檢測心臟手術(shù)后AKI的標志物。近年還發(fā)現(xiàn)，術(shù)前和術(shù)后EO可作為心力衰竭的標志物，甚至可預(yù)測術(shù)后心血管事件風(fēng)險[16]。提示臨床對上述患者需監(jiān)測血清CTS濃度，尤其對使用洋地黃制劑病人進行血藥濃度監(jiān)測時，應(yīng)結(jié)合血清CTS濃度加以綜合判斷。

3.3 腎臟疾病

CTS主要由腎臟排泄，腎臟排泄障礙可致血清CTS濃度明顯增高，原發(fā)性腎臟損害患者腎功能正常，但血清CTS水平亦明顯升高[17]。有研究證實由腎動脈硬化導(dǎo)致的腎缺血可引起MBG水平增加；在腎動脈狹窄處行支架植入術(shù)，其MBG濃度降低[18]。隨著終末期腎病(End Stage Renal Disease，ESRD)的出現(xiàn)，血清EO大幅升高，所致左心室肥厚和心血管事件也明顯增加[19]。由于血液透析、腹膜透析均不能有效清除EO，維持性透析患者中CTS濃度仍升高[20]。腎臟疾病患者往往伴有高血壓，原發(fā)性高血壓患者CTS增高；伴或不伴高血壓的慢性腎臟病患者循環(huán)CTS水平并無明顯差別[21]。CTS除參與心臟肥厚和纖維化外，也參與腎臟肥厚和纖維化。Fedorova等[22]的研究將MBG注入實驗對象，既誘導(dǎo)了腎臟I型膠原蛋白的增加，也上調(diào)了促纖維轉(zhuǎn)錄因子Snail(一種上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子)水平。而對5/6腎切除后CTS濃度升高大鼠注入抗MBG抗體，既可提高肌酐清除率和降低蛋白尿，也可減少其腎纖維化[23]。所幸的是，EO致AKI效應(yīng)可以為哇巴因受體阻斷劑rostafuroxin(PST2238)所阻斷[24]，其作用機理為PST2238可阻斷哇巴因與NKA的結(jié)合且不抑制NKA的離子泵功能。在5/6腎切除大鼠中CTS濃度升高，注入抗MBG抗體[23]，可提高肌酐清除率和降低蛋白尿。

在動物實驗中觀察到哇巴因可能參與AKI。臨床上，心臟手術(shù)病人的誘導(dǎo)麻醉期間EO是逐漸上升的，而術(shù)后AKI的發(fā)生率可隨EO的增加而增加，因而術(shù)前循環(huán)EO水平可強烈預(yù)測AKI的發(fā)生或作為AKI臨床風(fēng)險評分因子[25]。PST2238目前已處于臨床研究階段，希望其能為減少或預(yù)防AKI作出貢獻。

3.4 高血壓病

多種類型的高血壓病患者和高血壓動物模型的血漿CTS濃度均明顯升高，兩者呈正相關(guān)，且CTS升高可以加重高血壓[26]。CTS升壓效應(yīng)與血管直接相關(guān)，也與中樞神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)[27]。如CTS可提高血管平滑肌對某些縮血管物質(zhì)的敏感性[28]，通過抑制細胞膜NKA活性，增加Na+/Ca2+交換，升高血管平滑肌細胞內(nèi)[Ca2+]，提高血管收縮力等使血壓升高[29]。CTS的持續(xù)增加，還可通過活化血管平滑肌細胞信號通路，上調(diào)關(guān)鍵離子轉(zhuǎn)運蛋白如鈉鈣交換蛋白(Sodium Calcium Exchanger type 1，NCX1)、肌漿網(wǎng)系Ca2+-ATP 酶(Sarcoplasmic Reticulum Calcium ATPase，SERCA)和瞬時受體電位離子通道蛋白6(Transient Potential Receptor Canonical Protein 6，TRPC6)來維持高血壓。CNS相關(guān)信號通路在鹽敏感性高血壓、容量依賴性高血壓、腎素依賴性高血壓甚至心衰時均可被激活，進而使血漿EO濃度升高，引起高血壓[30, 31]。但該效應(yīng)可以被醛固酮合成拮抗劑和MR拮抗劑所阻斷[32]。采用CTS有關(guān)抗體可以降低血壓。有研究[33]顯示給予患惡性高血壓子癇妊娠婦女靜注地高辛抗體可使血壓下降；給予高鹽誘導(dǎo)的高血壓大鼠模型單克隆抗MBG抗體可以降低血壓，采用限鹽飲食可降低高血壓患者尿MBG排泄，同時降低血壓和改善動脈硬化[34]，能選擇性代替哇巴因與NKA結(jié)合的哇巴因拮抗劑PST2238，亦可降低高血壓模型動物的血壓。但毒毛花苷G種內(nèi)收蛋白對高血壓中鈉的特殊干預(yù)研究(OASIS-HT)臨床試驗證實PST2238并不能降低原發(fā)性高血壓[35]。

4 小結(jié)

CTS除了通過抑制NKA活性，在泵功能上影響細胞的濃度梯度分布，還可以通過其信號轉(zhuǎn)導(dǎo)功能，調(diào)節(jié)血壓，調(diào)節(jié)細胞生長、分化、凋亡和纖維化，對婦女妊娠，以及在腫瘤、高血壓、心腎等疾病中發(fā)揮作用。進一步研究CTS及其有關(guān)抗體，有助于找到治療高血壓病、腫瘤、心腎等疾病的新的有效方法。另外，術(shù)前或術(shù)后EO可作為心力衰竭及預(yù)測AKI標志物，以及預(yù)測術(shù)后心血管事件風(fēng)險或作為AKI臨床風(fēng)險評分因子。

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本文作者簡介：

婁美玉(1990-)，女，土家族，碩士研究生，研究方向為狼瘡性腎炎

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《微循環(huán)學(xué)雜志》 2017年稿約

中國唯一一本有關(guān)微循環(huán)基礎(chǔ)、臨床及相關(guān)研究的專業(yè)學(xué)術(shù)期刊——《微循環(huán)學(xué)雜志》系中華人民共和國科技部中國科技核心期刊(科技論文統(tǒng)計源期刊)，由國家教育部主管，武漢大學(xué)人民醫(yī)院和中國病理生理學(xué)會微循環(huán)專業(yè)委員會主辦,國內(nèi)外公開發(fā)行(CN 42-1321/R，ISSN 1005-1740)，2015年影響因子0.690(中國科學(xué)文獻計量評估研究中心)，名列全國基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)-綜合類期刊前茅。《微循環(huán)學(xué)雜志》立足我國微循環(huán)科研前沿，深入報道該學(xué)科基礎(chǔ)與臨床新進展，薈萃國內(nèi)外多學(xué)科最新醫(yī)研成果，是集醫(yī)研導(dǎo)向、信息交流、學(xué)術(shù)爭鳴、醫(yī)學(xué)教育為一體的新形態(tài)學(xué)術(shù)刊物。

1 征稿對象

廣大從事微循環(huán)、血液流變學(xué)基礎(chǔ)、臨床及相關(guān)研究的科研人員，醫(yī)療、教學(xué)人員，檢驗、病理、藥劑人員，在讀博士后、博士、碩士研究生以及生物醫(yī)學(xué)工程、醫(yī)學(xué)影像、數(shù)理醫(yī)學(xué)統(tǒng)計、醫(yī)療儀器研發(fā)等醫(yī)研同仁。

2 征稿內(nèi)容

2.1 有關(guān)國內(nèi)外微循環(huán)、血液流變學(xué)基礎(chǔ)、臨床及相關(guān)研究的論著、綜述及編譯和授權(quán)(即獲得版權(quán)許可)的譯著。

2.2 有關(guān)微循環(huán)、血液流變方法學(xué)和技術(shù)學(xué)的研究論著。

2.3 中醫(yī)及中西醫(yī)結(jié)合有關(guān)微循環(huán)、血液流變學(xué)的研究論著。

2.4 關(guān)于微循環(huán)學(xué)、血液流變學(xué)演變、發(fā)展的醫(yī)學(xué)史。

2.5 關(guān)于心、腦血管疾病的基礎(chǔ)與臨床研究論著。

2.6 關(guān)于糖尿病和腫瘤的基礎(chǔ)與臨床研究論著。

2.7 關(guān)于血栓與止血的基礎(chǔ)、臨床及方法學(xué)的研究論著。

2.8 有關(guān)分子生物學(xué)的研究論著。

2.9 國內(nèi)外學(xué)術(shù)、醫(yī)研信息和學(xué)界動態(tài)。

2.10 醫(yī)學(xué)界名人、名家、名科、名院介紹或?qū)ＴL。

2.11 醫(yī)療儀器研發(fā)和臨床應(yīng)用報告。

以上未盡之處，讀者、作者可參閱近兩年雜志或垂詢編輯部。

3 對論著類來稿的要求和注意事項

3.1 來稿請先經(jīng)所在單位進行內(nèi)容審核及保密審核，須附單位介紹信，并聲明未一稿兩投；各級各類基金項目論文需提交基金項目批文復(fù)印件；同時匯寄稿件審理費100元。

3.2 來稿應(yīng)具有科學(xué)性、先進性、實用性和真實性，論點鮮明，層次清楚，數(shù)據(jù)可靠，文字精練通順。全文(包括中、外文摘要、參考文獻、表和圖等)一般不超過8 000字，必須使用全國自然科學(xué)名詞審定委員會公布的科技名詞。簡化字限用國務(wù)院在人民日報1986年10月15日公布的"簡化字總表"，切勿自造異字。標點符號占1格。

3.3 論文必須通過本刊投稿平臺進行網(wǎng)上投稿，即登錄本刊網(wǎng)址：http://WXHX.chinajournal.net.cn。在首頁中點擊“作者投稿系統(tǒng)”，按系統(tǒng)提示用Word格式完成稿件上傳。單位介紹信、基金項目批文復(fù)印件等可通過郵局寄往編輯部，也可掃描后以圖片格式(JPG)隨論文一并上傳。

3.5 文稿的第1頁上方書寫中文文題、作者。題目一般不宜超過26個漢字，避免用“的觀察”等非特定詞，并盡可能不用代號和縮寫，不用副題。若為基金項目產(chǎn)文，需在題目右上角標注*號，并于該頁頁腳注明基金項目名稱及批準文號。

作者限于主要參與論文的寫作、實驗操作、數(shù)據(jù)采集和處理，并能對文稿內(nèi)容負責、解答有關(guān)問題的責任者。署名一般不超過8人，對本文有貢獻的其他人員，可放在文后致謝。作者的排列順序由供稿者確定。

作者單位用腳注方式書寫在正文第1頁最下方，寫明所有作者的工作單位、城市(或縣)和郵政編碼。

3.6 論著類文稿必須提交中英文結(jié)構(gòu)式摘要、關(guān)鍵詞和中圖分類號。

中文摘要約300字左右，包括目的、方法、結(jié)果、結(jié)論?！罢庇梅筋^括號(【】)括起來，前面空2格，后面空1格寫摘要內(nèi)容。

英文題目、作者、單位及內(nèi)容摘要(Abstract)和關(guān)鍵詞(Keywords)從中文關(guān)鍵詞的下一行開始書寫。英文摘要亦采用結(jié)構(gòu)式，即Objective、Method、Results、Conclusion，與中文摘要對照，約350個實詞。作者姓名用漢語拼音，姓氏字母全部大寫，名的第1個字母大寫，雙名以連字符相連，如馬林林MALin-lin。藥品須附化學(xué)名。

中、英文關(guān)鍵詞3-8個，關(guān)鍵詞之間用分號(；)隔開。關(guān)鍵詞盡量使用MeSH詞匯，或從文題、摘要、正文中選取與本文研究或討論中的中心問題有關(guān)和必要的詞。

所有文稿的正文格式、層次與序號寫法如下：

前言

1 ××××(一級標題，占一行。有正文者另起行，下畫波紋線者用黑體字)

1.1 ××××× (二級標題，占一行，正文另起行)

1.1.1 ×××××：(三級標題，接寫內(nèi)容)

(1) 接寫內(nèi)容

各級序號后空1格接寫標題或內(nèi)容。

3.7 科技名詞，須按全國自然科學(xué)名詞審定委員會最新公布的《生理學(xué)名詞》、《人體解剖學(xué)名詞》、《細胞生物學(xué)名詞》、《醫(yī)學(xué)名詞》、《生物化學(xué)名詞與生物物理學(xué)名詞》等為準。暫未公布的名詞仍以人民衛(wèi)生出版社《英漢醫(yī)學(xué)詞匯》為準。

3.8 計量單位和單位符號，參閱人民軍醫(yī)出版社1992年版中華醫(yī)學(xué)會編輯的《法定計量單位在醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用》和1989年科技文獻出版社出版的《醫(yī)學(xué)法定計量單位換算辭典》。

計量的數(shù)值一般應(yīng)在0.01-1 000范圍內(nèi)，應(yīng)正確使用詞頭。詞頭不得單獨用以表示單位(如μ應(yīng)改為μm)；不得重復(fù)使用(如mμm應(yīng)改為nm)；相乘的組合單位符號，只允許第一個單位用詞頭(如kN·m不宜寫成N·km)；相除的組合單位符號，只允許分子有詞頭；詞頭不宜用于攝氏度和非十進制單位分、時、日等。

物質(zhì)的量及血液學(xué)檢查一律以升(L)為分母，避免用μl、ml、dl、mm3作分母造成混亂，更不宜用非計量單位。單位符號應(yīng)寫在數(shù)值之后，并與數(shù)值間留半個字距。

3.9 表和圖，凡用文字已能說明的問題，盡量不用表和圖。如用表和圖，則文中不要重復(fù)其數(shù)據(jù)，只要摘述其主要發(fā)現(xiàn)。圖題和表頭以及結(jié)果說明中盡量不使用縮寫。

表和圖中盡量用實測數(shù)據(jù)，勿僅用相對比例(%)。

文稿中表、圖力求精簡，設(shè)計正確、合理、易懂。表式為三線表，欄頭左上角不用斜線；表內(nèi)盡可能不用或少用標點符號；上下行數(shù)字居中對齊；表內(nèi)“±”號上下對齊，左右各空1格；表注依次用右上標1)、2)、3)、4)、5)、6)；圖標依次單用*、#、△、▲和重復(fù)組合等。

統(tǒng)計學(xué)處理結(jié)果應(yīng)盡量提供統(tǒng)計檢驗值，如t值、χ2值、F值等，并用P>0.05、P<0.05、P<0.01三檔表示差異無或有統(tǒng)計學(xué)意義，于表(圖)下注明。

若有手繪圖，請用繪圖墨水在繪圖紙上繪制，設(shè)計要美觀，線條應(yīng)光滑，尺寸為長14cm，寬10cm。

作者須按作圖數(shù)據(jù)繪圖。曲線一般經(jīng)曲線擬合并盡可能“直線化”，如通過對數(shù)、倒數(shù)等轉(zhuǎn)換，直線應(yīng)根據(jù)回歸方程繪圖。作圖數(shù)據(jù)必須附于圖后。

照片必須反差鮮明，清晰易辨。顯微照片內(nèi)應(yīng)畫長度標尺，如1μm。照片像素應(yīng)盡量高。照片下方標明序號、圖題和簡要文字說明。并注意照片的上下方位。

3.10 討論應(yīng)重點闡述本文新的發(fā)現(xiàn)及得出的結(jié)論與觀點，勿作文獻綜述，不要重復(fù)在結(jié)果一節(jié)中已敘述過的內(nèi)容。討論中聯(lián)系本文目的與研究結(jié)果，并可與其它報道的結(jié)果相聯(lián)系。理由充足時，可恰如其分地提出設(shè)想和建議?！氨疚慕Y(jié)果與文獻結(jié)果相符[4]”應(yīng)寫為“本文結(jié)果與文獻結(jié)果[4]相符”。

3.11 參考文獻限作者親自閱讀過的近期主要文獻，按文中首次出現(xiàn)的秩序編號，在右上角用方括號注明，如[1，3-5]。論著一般≥10條。務(wù)請引用公開出版的原文獻，勿引二次文獻和內(nèi)部資料(會議文獻如果沒有正式出版機構(gòu)合法出版，亦視為內(nèi)部資料)、譯文、文摘、轉(zhuǎn)載。未發(fā)表的觀察資料和個人通訊不能列入?yún)⒖嘉墨I。盡量少引教科書。已被采用而尚未刊出的稿件，可列入?yún)⒖嘉墨I，但在刊名后加方括號注明[在印刷中]或[inpress]。作者須親自核對原文作者、題目、刊名、年、卷、期、頁。格式及標點符號均按本刊規(guī)定。

參考文獻作者只有1-3名者全部列出，3名以上者只列出前3名，后加“，等”(中文)、“，他”(日文)、“，etal”(西文)。中外作者均是姓在前，名在后；外文作者名縮寫，不加縮寫點。日本人除雙姓雙名外，姓與名間空1格，日文不可用中國簡化字。作者間用逗號。

西文期刊名縮寫按照ListofJournalsIndexedinIndexMedicus1990和《世界醫(yī)學(xué)藥學(xué)及化學(xué)期刊名稱縮寫手冊》(中國醫(yī)藥科技出版社，1988)。

參考文獻4個字居左頂格，所列文獻頂格寫。序號不加括號，也不加黑點及其它標點符號。中文參考文獻中的句號為黑點。正確的著錄格式如下：

[期刊]作者.文題[J].刊名，年，卷(期)：起頁-止頁.如系增刊，在卷號后加括號注“增刊”或“Suppl”，其起頁前加大寫S。

例：曾昭煒，謝忠明，唐榮福，等 .觀察動物微循環(huán)的實驗方法[J].微循環(huán)學(xué)雜志，2011，21(3)：26-32.

ThibaultH,PiotC,StaatP,etal.Long-termbenefitofpostconditioning[J].Circulation,2008,117(8):1 037-1 044.

[書籍和專著]作者主編.書名[M].卷(冊)次.版次(第1版可省略).出版地：出版社，年：起頁-迄頁.

例：王頻成，吳階平主編.急性腎功能衰竭[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1996：715-728.

或例：胡同增.實驗動物.見：胡同增，張自云主編.實驗外科學(xué)[M].(第2版).北京：人民衛(wèi)生出版社，2000：40-76.

ChienS.Aggregationofredccellsinsuspensions.In:SurgenorDM.eds.Theredbloodcell[M].VolⅡ. 2nded.NewYork,SanFrancisco,London:AcademicPress, 1975：1 075-1 094.

[學(xué)位論文]作者.篇名[D].出版地：出版者，出版年：起頁-止頁.

例：王湘蕓.視黃醇結(jié)合蛋白4與代謝綜合癥的相關(guān)性研究[D].上海：第二醫(yī)科大學(xué)，2010：15-28.

[專利]專利所有者.專利名稱：專利國別，專利號[P].公告或公開日期.

例：姜錫洲.一種溫熱外敷藥制備方案：中國，881056073[P].1989-07-26.

[電子文獻]主要責任者.電子文獻題名[電子文獻及載體類型標識].電子文獻出處或可獲得地址，發(fā)表年-月-日.

例：王明亮.關(guān)于中國學(xué)術(shù)期刊標準化數(shù)據(jù)庫系統(tǒng)工程的進展[EB/OL].http://www.cajcd.edu.cn/pub/whm.txt/980810-2.html,1998-08-16.

其余類型的文獻著錄方式請參閱《中華人民共和國國家標準GB7714-87》。

4 對其它類型來稿的要求

4.1 綜述需提供提示性中、英文摘要和關(guān)鍵詞。評論、講座類文稿不必書寫英文摘要，但需提供提示性中文摘要及關(guān)鍵詞。其余要求及書寫格式同論著類文稿。參考文獻一般30條左右。

4.2 信息與動態(tài)報道一般不超過1 000字，可附相應(yīng)的圖片1-2幅。

4.3 醫(yī)學(xué)史不限篇幅，但最好設(shè)置獨立章節(jié)(包括題目)以便分期刊出。

4.4 綜述、講座及醫(yī)學(xué)史需作者請專家審校后再投稿。

5 稿件的處理

5.1 編輯部網(wǎng)站平臺收稿后，編號并回執(zhí)。投稿作者請在網(wǎng)上跟蹤稿件處理情況。需退修稿件一般在2個月內(nèi)返回作者修改，作者修稿時間超過1個月者，作新稿處理，重新編號并回執(zhí)；來稿超過6個月未與作者聯(lián)系，可另投它刊。本刊不錄用稿件將盡快通知作者。國家級基金和省部級基金論文實行優(yōu)先審稿及發(fā)表。

5.2 編輯部對來稿有刪改權(quán)。

5.3 錄用稿件需作者按編輯部要求交納刊用版面費。稿件一俟刊登，本刊即擁有其版權(quán)，為保護作者及出版者權(quán)益，任何機構(gòu)及個人，未獲本刊編輯部書面許可，不得以任何形式復(fù)制或轉(zhuǎn)載。獲采用稿件的第一作者會在期刊出版1個月內(nèi)收到當期雜志若干本，不另付稿酬。

5.4 投稿咨詢方式：電話：027-88075389；18064018058。E-mail:micch@sina.com; 308903786@qq.com。地址：湖北省武漢市張之洞路9號(郵政編碼430060)。網(wǎng)址：http://WXHX.chinajournal.net.cn。

Research Progress of Cardiotonic Steroids Signaling Pathway and Diseases

LOU Mei-yu1,DING Guo-hua1,CHEN Wen-li2，#

1Department of Nephrology,Renmin Hospital of Wuhan University,Wuhan 430060,China；2Department of Nephrology,The Central Hospital of Wuhan,Tongji Medical College,Huazhong University of Scinence and Technology,Wuhan 430014, China；#

Cardiotonic steroids(CTS) encompass a group of compounds that share the capacity to bind to the extracellular of Na+-K+-ATPase(NKA).CTS which were first considered important in the regulation of sodium and transport across the plasma membrane can inhibit NKA activity.Recent work found that CTS interacts with different protein kinases that subsequently trigger different signaling transduction cascades by binding with NKA, so it cound take part in the regulation of cell growth, differentiation,apoptosis, and fibrosis, in the process of physiology and pathological of different diseases such as tumor, hypertension，and heart and kidney diseases.

Cardiotonic steroids； Na+-K+-ATPase； Cell growth； Signaling transduction

國家自然科學(xué)基金(81400734)；湖北省自然科學(xué)基金(2015CFB241)

1武漢大學(xué)人民醫(yī)院腎內(nèi)科，武漢 430060；2華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院附屬武漢中心醫(yī)院腎內(nèi)科，武漢 430014；#

，E-mail:whwenli@163.com

本文2016-11-15收到，2017-01-12修回

R969.4

A

1005-1740(2017)01-0075-05

請在文末提交個人簡介。內(nèi)容依次為：姓名(出生年-)，性別，民族，學(xué)位，職稱，研究方向等。通訊作者需提交聯(lián)系方式，如電話、E-mail等。

下一行書寫

和文獻標識碼。