龐 倩，王 瑩，王 康，張文文，吉 挺

(揚(yáng)州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，江蘇揚(yáng)州 225009)

不同移蟲(chóng)日齡蜂王卵巢中hexamerin110、hexamerin70b的差異表達(dá)分析

龐 倩，王 瑩，王 康，張文文，吉 挺*

(揚(yáng)州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，江蘇揚(yáng)州 225009)

為探究不同移蟲(chóng)日齡的西方蜜蜂蜂王卵巢中hexamerin110、hexamerin70b的表達(dá)及其調(diào)控機(jī)理，以β-actin為內(nèi)參基因，運(yùn)用qRT-PCR技術(shù)檢測(cè)不同移蟲(chóng)日齡蜂王卵巢中hexamerin110、hexamerin70b mRNA的表達(dá)水平，用Western blot方法檢測(cè)hexamerin110、hexamerin70b蛋白的表達(dá)。結(jié)果顯示，hexamerin110、hexamerin70無(wú)論是在mRNA水平還是蛋白水平，隨著移蟲(chóng)日齡的增加，其表達(dá)量均呈降低的趨勢(shì)。1日齡移蟲(chóng)培育的蜂王卵巢hexamerin110基因表達(dá)量顯著高于其他組(P<0.05)，1日齡移蟲(chóng)培育的蜂王卵巢的hexamerin70b基因的表達(dá)量極顯著高于其他組(P<0.01)。Hexamerin110、hexamerin70b在1日齡移蟲(chóng)發(fā)育的蜂王卵巢中的表達(dá)水平最高，推測(cè)其可能與蜂王生殖發(fā)育以及級(jí)型分化有關(guān)。

移蟲(chóng)日齡；卵巢；hexamerin110；hexamerin70b；級(jí)型分化

蜜蜂是以群體為單位的社會(huì)性昆蟲(chóng)，包括蜂王、雄蜂以及工蜂。蜂王和工蜂都是由受精卵發(fā)育而來(lái)的雌性蜂，兩者的遺傳組成完全一致，但它們?cè)谕獠啃螒B(tài)、生理結(jié)構(gòu)和行為上都存在巨大的差異。蜂王個(gè)體大、壽命長(zhǎng)并且繁殖力極強(qiáng)，而工蜂個(gè)體小、壽命極短，沒(méi)有繁殖能力(Hartfelder and Engels, 1998；Page and Peng, 2001)，這種現(xiàn)象稱(chēng)為蜜蜂的級(jí)型分化，是現(xiàn)今蜜蜂研究的熱點(diǎn)問(wèn)題。研究發(fā)現(xiàn)幼蟲(chóng)攝取的食物會(huì)影響其級(jí)型分化，決定其發(fā)育成具有繁殖力的蜂王或無(wú)繁殖性能的工蜂(陳璇和胡福良，2011；石元元，2011)。

昆蟲(chóng)儲(chǔ)存蛋白(hexamerin)在昆蟲(chóng)的變態(tài)發(fā)育過(guò)程中具有至關(guān)重要的作用，其通常在幼蟲(chóng)的脂肪體內(nèi)合成，在血淋巴內(nèi)儲(chǔ)存，化蛹時(shí)重新進(jìn)入脂肪體，在昆蟲(chóng)變態(tài)發(fā)育期間被利用(Burmester and Scheller, 1999)。一直以來(lái)，hexamerin都被當(dāng)作是非進(jìn)食期昆蟲(chóng)生長(zhǎng)發(fā)育的氨基酸來(lái)源，然而，研究發(fā)現(xiàn)hexamerin家族的蛋白除了與變態(tài)、蛹的生長(zhǎng)發(fā)育有關(guān)，可能還與級(jí)型分化有關(guān)(Martinsetal., 2008)。

卵巢作為雌性蜜蜂生殖系統(tǒng)的重要功能組織，其大小和發(fā)育程度代表著蜂王的繁殖能力，其發(fā)育受到移蟲(chóng)日齡的影響，沈芳(2015)研究發(fā)現(xiàn)不同移蟲(chóng)日齡所培育的蜂王在生長(zhǎng)發(fā)育和繁殖性能方面存在顯著差異。而不同移蟲(chóng)日齡培育的蜂王卵巢中hexamerin的表達(dá)是否有差異尚不清楚，國(guó)內(nèi)關(guān)于hexamerin對(duì)蜜蜂級(jí)型分化的影響的研究也比較少。有研究在發(fā)育中的卵巢和睪丸中檢測(cè)到hexamerin110和hexamerin70b的轉(zhuǎn)錄本(Martinsetal., 2010)。因此，為了揭示不同移蟲(chóng)日齡對(duì)蜜蜂hexamerin的影響，本研究以hexamerin110、hexamerin70b為研究對(duì)象，利用qRT-PCR方法以及Western blot方法比較不同移蟲(chóng)日齡蜂王卵巢內(nèi)hexamerin110 、hexamerin70b在mRNA及蛋白水平的表達(dá)，探究不同移蟲(chóng)日齡對(duì)其的影響，為hexamerin110、hexamerin70b對(duì)蜜蜂級(jí)型分化的調(diào)控提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)蜂群

處女王(西方蜜蜂)出房后8 d人工注射單只雄蜂的精液，獲得單雄授精的蜂王，組織單雄授精蜂王進(jìn)行產(chǎn)卵。單雄受精蜂王及組織蜂群工作均在吉林蜜蜂研究所實(shí)驗(yàn)蜂場(chǎng)進(jìn)行。

1.1.2 主要試劑

Trizol購(gòu)自Invitrogen公司；氯仿，異丙醇，75%乙醇，DEPC水，F(xiàn)astQuant RT Kit(with gDNase)FastQuant cDNA第一鏈合成試劑盒(KR106)購(gòu)自北京天根生化科技有限公司；熒光定量PCR試劑盒(cw0956)購(gòu)自北京康為世紀(jì)生物科技有限公司；RIPA裂解液、BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒購(gòu)自碧云天公司；β-actin小鼠單克隆抗體購(gòu)自上海艾博抗貿(mào)易有限公司；辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記山羊抗兔IgG、hexamerin110單克隆抗體、hexamerin70b單克隆抗體購(gòu)自艾比瑪特生物醫(yī)藥(上海)有限公司；ECL顯色試劑盒、硝酸纖維素膜購(gòu)自伯樂(lè)生命醫(yī)學(xué)產(chǎn)品(上海)有限公司；低分子量蛋白Marker購(gòu)自Thermo Scientific公司。

1.1.3 主要儀器

高靈敏蛋白印跡成像和多色熒光定量分析系統(tǒng)，ABI7500熒光定量PCR儀，臺(tái)式冷凍離心機(jī)，酶標(biāo)儀，普通PCR儀，均質(zhì)器。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 蜂王的培育

滅菌后的空巢脾，放入限王產(chǎn)卵器中，經(jīng)工蜂清理24 h后，控制蜂王產(chǎn)卵6 h，將空脾轉(zhuǎn)移到繼箱中孵育。98 h后移取巢脾上的幼蟲(chóng)為1日齡幼蟲(chóng)，122 h后移取巢脾上的幼蟲(chóng)為2日齡，146 h后移取巢脾上的幼蟲(chóng)為3日齡。培育至蜂王出房的前一天，全部轉(zhuǎn)移到昆蟲(chóng)培養(yǎng)箱等待蜂王出房。

1.2.2 引物設(shè)計(jì)與合成

根據(jù)Genebank中hexamerin110的序列(NM_001101023.1)、hexamerin70b的序列(NM_001011600.1)，按照熒光定量引物設(shè)計(jì)原則，設(shè)計(jì)引物，hexamerin110上游：5′-AACGTGCCAGGC GCAGTTGT-3′，下游：5′-TTCACCAGCATGGAGGT TCTGGA-3′；hexamerin70b上游：5′-TGCCG CCAATGTACGAGGTG-3′，下游：5′-GCTCGGGCAC GTTGTGTTTG-3′，以β-actin作為內(nèi)參基因，上游：5′-TCCTGCTATGTATGTCGC-3′，下游：5′-AGT TGCCATTTCCTGTTC-3′，引物由上海生工生物工程有限公司合成。

1.2.3 qRT-PCR

實(shí)驗(yàn)分為3組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)取2頭西方蜜蜂蜂王的雙側(cè)卵巢，混池，將卵巢組織樣品勻漿后按試劑說(shuō)明書(shū)操作，用Trizol提取卵巢總RNA，根據(jù)各樣品總RNA濃度，對(duì)RNA樣品進(jìn)行稀釋?zhuān)蛊浣K濃度為200 ng/μL，然后按照FastQuant RT Kit(with gDNase)FastQuant cDNA第一鏈合成試劑盒(KR106)操作程序進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄。根據(jù)熒光定量PCR試劑盒(cw0956)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，所有步驟均在冰上進(jìn)行，qRT-PCR反應(yīng)體系為20 μL體系：2×UltraSYBR Mixture(With ROX)10 μL，上游引物1 μL，下游引物1 μL，DNA模板2 μL，RNase-Free Water 6 μL，PCR擴(kuò)增程序?yàn)?5℃10 min；95℃15 s，60℃1 min，共40個(gè)循環(huán)，PCR反應(yīng)在ABI7500熒光定量PCR儀上進(jìn)行，最后用2-ΔΔCt的方法計(jì)算基因的表達(dá)量。

1.2.4 Western Blot檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)分為3組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)取2頭西方蜜蜂蜂王的雙側(cè)卵巢，混池，加入裂解液后，勻漿、超聲破碎、離心，用BCA法測(cè)定蛋白濃度后，將蛋白在沸水中水浴煮沸5 min，使蛋白變性，用10%的聚丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白后，將蛋白轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上，封閉液封閉，TBST沖洗后，分別與一抗、二抗雜交，ECL法于暗室中顯色，運(yùn)用高靈敏蛋白印跡成像和多色熒光定量分析系統(tǒng)觀察Western blot結(jié)果。

1.2.5 蛋白結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)

利用ProtParam tool軟件分析蛋白質(zhì)序列的理化性質(zhì)，利用SOPMA軟件預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu)，利用Tmpred對(duì)蛋白質(zhì)跨膜區(qū)進(jìn)行分析。

1.2.6 數(shù)據(jù)分析和處理

利用SPSS 17.0軟件對(duì)不同移蟲(chóng)日齡蜂王卵巢內(nèi)hexamerin110、hexamerin70b基因的表達(dá)量進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，用ANOVA的LSD法進(jìn)行顯著性分析，以0.05為顯著性水平。

2 結(jié)果與分析

2.1 qRT-PCR的結(jié)果

2.1.1 不同移蟲(chóng)日齡蜂王卵巢中hexamerin110基因的表達(dá)

從圖1可以看出，隨著移蟲(chóng)日齡的增加，hexamerin110基因的表達(dá)量呈現(xiàn)降低趨勢(shì)，1日齡移蟲(chóng)培育的蜂王卵巢的hexamerin110基因的表達(dá)量最高，顯著高于2日齡和3日齡移蟲(chóng)所培育的蜂王卵巢的hexamerin110基因的表達(dá)量(P<0.05)，2日齡和3日齡移蟲(chóng)培育的蜂王卵巢的hexamerin110基因的表達(dá)量相近，差異不顯著(P>0.05)。

圖1 不同移蟲(chóng)日齡hexamerin110基因的表達(dá)量Fig. 1 Expression level of hexamerin110 of different grafted instar注：相同字母代表差異不顯著，不同字母代表差異顯著(P<0.05)。Note: The same letters represent no significant difference, the different letters represent significant difference (P<0.05).

2.1.2 不同移蟲(chóng)日齡蜂王卵巢中hexamerin70b基因的表達(dá)

圖2 不同移蟲(chóng)日齡的hexamerin70b基因表達(dá)量Fig.2 Expression level of hexamerin70b of different grafted instar注：相同字母代表差異不顯著，不同字母代表差異顯著(P<0.05)。Note: The same letters represent no significant difference, the different letters represent significant difference (P<0.05).

從圖2可以看出，隨著移蟲(chóng)日齡的增加，hexamerin70b基因的表達(dá)量呈現(xiàn)降低趨勢(shì)，1日齡移蟲(chóng)培育的蜂王卵巢的hexamerin70b基因的表達(dá)量最高，而且極顯著高于2日齡和3日齡移蟲(chóng)培育的蜂王卵巢的hexamerin70b基因的表達(dá)量(P<0.01)，2日齡和3日齡移蟲(chóng)培育的蜂王卵巢的hexamerin70b基因的表達(dá)量相近，差異不顯著(P>0.05)。

2.2 Western Blot的結(jié)果

如圖3所示，Western Blot的結(jié)果表明，隨著移蟲(chóng)日齡的增加，1日齡、2日齡、3日齡移蟲(chóng)所培育的蜂王卵巢中hexamerin110、hexamerin70b蛋白的表達(dá)水平均呈現(xiàn)降低趨勢(shì)。

圖3 不同移蟲(chóng)日齡hexamerin110蛋白和hexamerin70b蛋白的表達(dá)Fig.3 Expression levels of hexamerin110 and hexamerin70b of different grafted instar

2.3 蛋白結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)結(jié)果

用ProtParam tool軟件分析蛋白質(zhì)序列的理化性質(zhì)，結(jié)果顯示hexamerin110蛋白分子量112.2 kDa，等電點(diǎn)6.43，負(fù)電荷氨基酸殘基總數(shù)64，正電荷氨基酸殘基總數(shù)57，總平均疏水性；hexamerin70b蛋白分子量79.5 kDa，等電點(diǎn)6.72，負(fù)電荷氨基酸殘基總數(shù)70，正電荷氨基酸殘基總數(shù)66，總平均疏水性。利用SOPMA軟件預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu)，結(jié)果表明，hexamerin110含有α螺旋(h)38.89%，延伸鏈(e)17.66%，β轉(zhuǎn)角(t)9.92%，無(wú)規(guī)卷曲(c)33.53%；hexamerin70b含有α螺旋(h)39.39%，延伸鏈(e)23.43%，β轉(zhuǎn)角(t)8.93%，無(wú)規(guī)卷曲(c)28.26%(圖4、圖5)。利用Tmpred對(duì)蛋白質(zhì)跨膜區(qū)進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)hexamerin110可能的8個(gè)跨膜螺旋區(qū)，分別為：29-47，100-122，236-260，383-409，664-684，776-794，900-925，939-961。膜外到膜內(nèi)5個(gè)，分別為：29-47，100-123，664-684，774-792，939-957。發(fā)現(xiàn)hexamerin70b可能的1個(gè)跨膜螺旋區(qū)，為32-52，膜外到膜內(nèi)1個(gè)，為30-52。

圖4 hexamerin110蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)Fig.4 Secondary structure prediction of hexamerin110 protein

圖5 hexamerin70b蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)Fig.5 Secondary structure prediction of hexamerin70b protein

3 結(jié)論與討論

Hexamerin110基因有9個(gè)外顯子，編碼1008個(gè)氨基酸，其編碼的蛋白富含谷氨酰胺，hexamerin110在幼蟲(chóng)血淋巴含量特別高，在結(jié)繭期減少，在成蜂中再一次升高(Bitondietal., 2006)。Hexamerin110除了為變態(tài)和蛹的發(fā)育提供氨基酸，還參與雌性昆蟲(chóng)的產(chǎn)卵(Wheeler and Buck, 1995; Pan and Telfer, 1996; Seoetal., 1998; Wheeleretal., 2000; Pan and Telfer, 2001)，并且在產(chǎn)卵蜂王卵巢中高表達(dá)(Martinsetal., 2010)。qRT-PCR和Western blot的結(jié)果顯示，隨著移蟲(chóng)日齡的增加，hexamerin110的表達(dá)量無(wú)論是在mRNA水平還是蛋白水平，均呈現(xiàn)降低趨勢(shì)，可能是因?yàn)橐葡x(chóng)日齡會(huì)對(duì)蜂王的生長(zhǎng)發(fā)育以及繁殖性能產(chǎn)生影響，隨著移蟲(chóng)日齡的增加，蜂王的卵巢重顯著減輕，卵巢管數(shù)顯著減小(沈芳, 2015)，移蟲(chóng)越晚，人工培育的蜂王的卵巢發(fā)育的越不完全，從而導(dǎo)致與產(chǎn)卵有關(guān)的hexamerin110表達(dá)量的降低。也可能是因?yàn)楦弋a(chǎn)蜂王的卵巢發(fā)育和產(chǎn)卵需要更多的能量與蛋白質(zhì)的供給，從而誘導(dǎo)了與產(chǎn)卵有關(guān)的hexamerin110的高表達(dá)。Bitondi等(2006)發(fā)現(xiàn)工蜂卵巢的發(fā)育程度與hexamerin110基因的表達(dá)水平有關(guān)，卵巢的發(fā)育需要hexamerin110基因的高水平表達(dá)。因此推測(cè)，hexamerin110可能與蜂王的繁殖能力有關(guān)，hexamerin110的高表達(dá)有利于蜂王卵巢的發(fā)育，提高蜂王的繁殖性能。

Hexamerin70b基因有7個(gè)外顯子，編碼683個(gè)氨基酸，Cunha等(2005)研究得出hexamerin70b基因的表達(dá)受保幼激素(JH)和蛻皮激素的調(diào)節(jié)，用保幼激素處理或者注射蛻皮激素會(huì)使工蜂hexamerin70b的高表達(dá)期延長(zhǎng)。隨著移蟲(chóng)日齡的增加，hexamerin70b的表達(dá)量無(wú)論是在mRNA水平還是蛋白水平，均呈現(xiàn)降低趨勢(shì)，與隨著移蟲(chóng)日齡的增加，蜂王幼蟲(chóng)的保幼激素和蛻皮激素的含量顯著降低的結(jié)果一致(沈芳, 2015)。Hexamerin70b的表達(dá)之所以會(huì)隨著移蟲(chóng)日齡的增加而降低可能是因?yàn)椴煌葡x(chóng)日齡培育的蜂王取食到的蜂王漿不同，而蜂王漿會(huì)影響成熟幼蟲(chóng)的保幼激素濃度(彭文, 2007；Riddifordetal., 2010)，保幼激素和蛻皮激素能夠調(diào)控hexamerin70b的表達(dá)。Wirtz和Beetsma(1972)的研究表明保幼激素JHⅢ在蜜蜂級(jí)型分化過(guò)程中具有重要的作用。幼蟲(chóng)血淋巴JHⅢ濃度的差異能夠激活幼蟲(chóng)體內(nèi)不同的發(fā)育模式，從而使得幼蟲(chóng)發(fā)育成蜂王和工蜂這兩種完全不同的級(jí)型。同時(shí)，JHⅢ可以促進(jìn)幼蟲(chóng)期卵巢的發(fā)育(Barchuketal., 2007)，并且與蛻皮激素協(xié)同作用，共同調(diào)節(jié)蜜蜂的發(fā)育和變態(tài)過(guò)程。Hexamerin70b可能與保幼激素和蛻皮激素共同調(diào)控蜜蜂的級(jí)型分化。

本研究運(yùn)用qRT-PCR技術(shù)及Western blot方法檢測(cè)了hexamerin110、hexamerin70b在不同移蟲(chóng)日齡培育的西方蜜蜂蜂王卵巢中的表達(dá)，結(jié)果表明其在1日齡培育的蜂王卵巢中的表達(dá)明顯高于2日齡、3日齡的表達(dá)，而2日齡與3日齡之間表達(dá)差異不明顯，說(shuō)明1日齡移蟲(chóng)的蜂王繁殖性能具有更明顯的優(yōu)勢(shì)。

References)

Barchuk AR, Cristino AS, Kucharski R,etal. Molecular determinants of caste differentiation in the highly eusocial honeybeeApismellifera[J].BMCDevelopmentalBiology, 2007, 7(1):70.

Bitondi MMG, Nascimento AM, Cunha AD,etal. Characterization and expression of theHex110 gene encoding a glutamine-richhexamerinin the honey bee,Apismellifera[J].ArchivesofInsectBiochemistryandPhysiology, 2006, 63(2):57-72.

Burmester T, Scheller K. Ligands and receptors:Common theme in insect storage protein transport[J].Naturwissenschaften, 1999, 86:468-474.

Chen X, Hu FL. Molecular determinants of caste differentiation in honey bee[J].JournalofBee, 2011, 4: 1003-1091. [陳璇, 胡福良. 雌性蜜蜂級(jí)型決定的分子機(jī)制[J].蜜蜂雜志, 2011, 4: 1003-1091]

Cunha AD, Nascimento AM, Guidugli KR,etal. Molecular cloning and expression of a hexamerin cDNA from the honey bee,Apismellifera[J].JournalofInsectPhysiology, 2005, 51:1135-1147.

Hartfelder K, Engels W. 2 social insect polymorphism:Hormonal regulation of plasticity in development and reproduction in the honeybee[J].CurrentTopicsinDevelopmentalBiology, 1998, 40: 45-77.

Martins JR, Nunes FMF, Cristino AS,etal. The fourhexameringenes in the honey bee:Structure, molecular evolution and function deduced from expression patterns in queens, workers and drones[J].BMCMolecularBiology, 2010, 11:23.

Martins JR, Nunes FMF, Sim?es ZLP,etal. A honeybee storage protein gene,hex70a, expressed in developing gonads and nutritionally regulated in adult fat body[J].JournalofInsectPhysiology, 2008, 54: 867-877.

Page RE, Peng CYS. Aging and development in social insects with emphasis on the honey bee,ApismelliferaL.[J].ExperimentalGerontology, 2001, 36(4): 695-711.

Pan ML, Telfer WH. Methionine-rich hexamerin and arylphorin as precursor reservoirs for reproduction and metamorphosis in female luna moths[J].ArchivesofInsectBiochemistryandPhysiology, 1996, 33:149-162.

Pan ML, Telfer WH. Storage hexamer utilization in two lepidopterans:Differences correlated with the timing of egg formation[J].JournalofInsectScience, 2001, 1:1-9.

Peng WJ. About the royal jelly[J].ApicultureofChina, 2007, 58(12):46. [彭文君. 關(guān)于蜂王漿[J].中國(guó)蜂業(yè), 2007, 58(12):46]

Riddiford LM, Truman JW, Mirth CK,etal. A role for juvenile hormone in the prepupal development ofDrosophilamelanogaster[J].Development, 2010, 137(7): 1117-1126.

Seo SJ, Kang YJ, Cheon HM,etal. Distribution and accumulation of storage protein-1 in ovary ofHyphantriacuneaDrury[J].ArchivesofInsectBiochemistryandPhysiology, 1998, 37:115-128.

Shen F. Research on the Effect of the Instar of the Grafted Larvae on Growth and Development and Ovary Proteomic of Queen[D]. Yangzhou University, 2015. [沈芳. 移蟲(chóng)日齡對(duì)蜂王生長(zhǎng)發(fā)育及蜂王卵巢蛋白質(zhì)組學(xué)的影響[D].揚(yáng)州大學(xué), 2015]

Shi YY. Influence of Nutritional and Spatial Factors in the Development of Females Honeybees (Apismellifera, Apidae)[D]. Jiangxi Agricultural University, 2011. [石元元. 營(yíng)養(yǎng)和空間因素對(duì)雌性蜜蜂發(fā)育的影響[D]. 江西農(nóng)業(yè)大學(xué), 2011]

Wheeler DE, Buck NA. Storage proteins in ants during development and colony founding[J].JournalofInsectPhysiological, 1995, 41:885-894.

Wheeler DE, Tuchinskaya I, Buck NA,etal. Hexameric storage proteins during metamorphosis and egg production in the diamondback moth,Plutellaxylostella(Lepidoptera)[J].JournalofInsectPhysiology, 2000, 46:951-958.

Wirtz P, Beetsma J. Induction of caste differentiation in the honeybee (Apismellifera) by juvenile hormone[J].EntomologiaExperimentalisetApplicata, 1972, (15):517-520.

Analysis on differential expression ofhexamerin110 andhexamerin70b in the ovaries of queens reared from different instar of the grafted larvae

PANG Qian1, WANG Ying, WANG Kang, ZHANG Wen-Wen, JI Ting*

(College of Animal Science and Technology, Yangzhou University, Yangzhou 22500, Jiangsu Province, China)

To explore the expression and molecular regulation mechanism ofhexamerin110 andhexamerin70b in the ovaries of queens reared from different instar of the grafted larvae, mRNA and protein expression ofhexamerin110 andhexamerin70b were assessed by qRT-PCR and Western blot. The results showed that the expression levels of thehexamerin110 andhexamerin70b decreased with the increasing instar of the grafted larvae, the expression levels of thehexamerin110 in ovaries of queens reared from 1 day instar of the grafted larvae were significantly higher than others (P<0.05). Meanwhile, the expression levels of thehexamerin70b in ovaries of queens reared from 1 day instar of the grafted larvae were extremely significantly higher than others (P<0.01). The expression levels of thehexamerin110 andhexamerin70b of 1 day instar of the grafted larvae are the highest, it is speculated thathexamerin110 andhexamerin70b may be associated with queen reproductive development and caste differentiation.

Instar of the grafted larvae; ovary;hexamerin110;hexamerin70b; caste differentiation

國(guó)家自然科學(xué)基金(31502020，31172272)；現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系(CARS-45-SYZ6)

龐倩，女，1994年生，安徽宿州人，碩士研究生，E-mail：18852717155@163.com

*通訊作者Author for correspondence，E-mail：tji@yzu.edu.cn

Received：2016-08-17；接受日期Accepted：2016-09-23

Q963;S89

A

1674-0858(2017)01-0062-06

龐倩，王瑩，王康，等.不同移蟲(chóng)日齡蜂王卵巢中hexamerin110、hexamerin70b的差異表達(dá)分析[J].環(huán)境昆蟲(chóng)學(xué)報(bào)，2017,39(1):62-67.