孫磊

哈藥集團(tuán)世一堂飲片有限責(zé)任公司 150000

大黃藥材的成分檢測(cè)方法研究

孫磊

哈藥集團(tuán)世一堂飲片有限責(zé)任公司 150000

大黃是一種多年生的植物的統(tǒng)稱，不僅可以當(dāng)作藥材來使用，還可以當(dāng)做食材來食用，為了保證大黃藥品的純度更高，藥品行業(yè)的技術(shù)人員借助現(xiàn)代科技技術(shù)，研究出了多種測(cè)定大黃藥材的成分的方法，本文借助相關(guān)的理論資料以及數(shù)據(jù)對(duì)幾種測(cè)定大黃成分的方法進(jìn)行研究，希望可以提升大黃的藥用價(jià)值。

大黃藥材；成分檢測(cè)；研究方法

大黃是一種比較常用的中藥材，其藥用歷史已經(jīng)達(dá)到 2000多年，即使是在現(xiàn)代社會(huì)，其使用仍舊比較普遍，大黃也被稱為“將軍”“火參”“牛舌大黃”。大黃的藥用價(jià)值雖然很高，但其分布范圍也比較廣泛，包括四川、西藏、甘肅等地。雖然大黃的種類有很多，多達(dá) 45個(gè)品種，但是能夠當(dāng)成藥材使用的僅有 3種，唐古特大黃、掌葉大黃以及藥用大黃。大黃炮制品的種類也比較多，根據(jù)中國藥典的記載，可以了解到大黃炭、熟大黃、酒大黃以及大黃，不同的大黃炮制品的炮制方法也存在差異。我國當(dāng)前檢測(cè)大黃成分的方法主要有以下幾種：

1.PLC檢測(cè)法

以甲醇-1.0%冰醋酸為流動(dòng)相，430nm 下檢測(cè)，圖譜中共標(biāo)定了 23 個(gè)共有峰，12個(gè)不同產(chǎn)地、不同采收時(shí)間樣品之間的相似度在 90%以上，可作為大黃藥材的具有專屬性的指紋圖譜。采用微乳電動(dòng)毛細(xì)管色譜法(MEEKC)建立不同來源掌葉大黃的指紋圖譜,使用未涂層石英毛細(xì)管柱，緩沖液為 SDS、正丁醇、正辛烷及硼砂溶液，并通過添加 10%的乙腈組成的 O/W 型微乳體系,分離電壓 18 k V,檢測(cè)波長 280 nm。結(jié)果通過聚類分析和相似度分析處理, 將 14 個(gè)掌葉大黃樣品初步分為三類:道地藥材,市售一般品和次品。后確立大黃指紋圖譜共有模式的方法，篩選出建立指紋圖譜共有模式的 10 批大黃的藥材。以 HPLC 法研究掌葉大黃不同炮制品水提取物的指紋圖譜，利用灰關(guān)聯(lián)度分析方法研究其止血譜效關(guān)系。說明大黃經(jīng)炮制后，其鞣質(zhì)類成分與蒽醌類成分含量的相對(duì)變化情況對(duì)大黃的止血藥效有較大影響。以乙腈-水-1%冰醋酸為流動(dòng)相,梯度洗脫;254 nm 下探討能全面地反映大黃中所含化學(xué)成分的指紋圖譜的最適進(jìn)樣量。確定此條件下大黃指紋圖譜的最佳進(jìn)樣量為61.35μg。

2 薄層掃描色譜法

采用超臨界流體萃取薄層色譜掃描法測(cè)定大黃中大黃素的含量，超臨界流體萃取提取物比較純凈，可直接進(jìn)行點(diǎn)樣分析，展開效果好。采用薄層層析法對(duì)黃中游離型和結(jié)合型蒽醌類成分進(jìn)行分離，并用薄層掃描法測(cè)定其含量。在硅膠G薄層上用正己烷-乙酸乙酷-甲酸(15:5:0.25)展開劑對(duì)生大黃、熟大黃及其配方顆粒中的大黃素，并使用雙波長薄層掃描儀測(cè)定其含量。為研究大黃中蒽醌衍生物含量變化規(guī)律，采用薄層掃描法測(cè)定其含量。

3 毛細(xì)管電泳法

這種檢測(cè)大黃成分的方法，可以對(duì)大黃中的大黃素、蘆薈大黃素等成分進(jìn)行檢測(cè)，不少研究者都通過這種方法，成功地對(duì)大黃中的毒性成分進(jìn)行了檢測(cè)，通過這個(gè)方法將幾種毒性成分分離出來，此方法操作過程相對(duì)簡(jiǎn)單，具有較好的重現(xiàn)性以及極高的分辨率，不僅能夠由于大黃成分檢測(cè)中，還可以用于檢測(cè)中藥中的多糖組成。

4 紫外線分光光度法

用紫外譜線組法測(cè)試 4 種大黃炮制品在不同極性溶劑中的紫外譜線圖譜,根據(jù)它們的紫外譜線圖譜峰位置的差異,對(duì)其加以區(qū)分鑒別。在改進(jìn)了大黃藥材中總蒽醌的含量測(cè)定方法，方法為1，8-二羥基蒽醌與堿顯色后，2h 內(nèi)隔時(shí)掃描光譜圖;對(duì)照品和樣品同樣處理后繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。采用甲醇冷浸法提取，比色法測(cè)定大黃中蒽酮的含量。用雙波長分光光度法測(cè)定大黃中大黃酚的含量。通過測(cè)定了 Tween80(NH4):s 氏液固萃取體系萃取大黃中大黃素的含量。還有研究人員用 UV 法測(cè)定大黃提取物中總蒽醌含量。通過建立了PH 梯度法萃取大黃中游離蔥醒，并用比色法分別進(jìn)行含量測(cè)定。

5 二維紅外線光譜法

用紅外光譜與高木關(guān)野模糊系統(tǒng)相結(jié)合鑒別 52 種大黃樣品。并對(duì)神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)的隱含層個(gè)數(shù)和動(dòng)量因子的影響作了討論。用高木關(guān)野模糊系統(tǒng)得到的結(jié)果比通常用的BP網(wǎng)絡(luò)要好。將向基函數(shù)網(wǎng)絡(luò)與紅外光譜分析技術(shù)相結(jié)合，可用于正品和非正品大黃的分類判別。通過小波變換對(duì)原始數(shù)據(jù)進(jìn)行壓縮，測(cè)定和鑒別了45 個(gè)樣品，正確率達(dá)97.78%。采用紅外光譜法并結(jié)合二維相關(guān)光譜分析技術(shù)，對(duì)藥用西寧大黃和偽品華北大黃進(jìn)行了無損快速鑒別研究。可有效區(qū)分真?zhèn)未簏S。

6 LC-MS

根據(jù)大黃中游離蒽醌的基本結(jié)構(gòu)和取代基的排列組合，建立了系統(tǒng)的分子量篩選表，運(yùn)用 LC-MS 對(duì)大黃水提組分進(jìn)行研究，在 ESI(-)的質(zhì)譜數(shù)據(jù)中以目標(biāo)分子量提取方式快速鑒定了12 種游離蔥醒類化合物。采用 HPLC/μV/MS 對(duì)生大黃和制大黃的小分子化合物進(jìn)行定性鑒定，以比色法測(cè)定生、制大黃中鞣質(zhì)及多糖的含量，考察了炮制過程大黃有效組分的變化。采用液相色譜-串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜聯(lián)方法，建立檢測(cè)中成藥麻仁丸中使用偽品大黃充當(dāng)正品大黃的專屬方法。

7 熒光光譜法

利用三維熒光圖譜解析及活性成分測(cè)定方法研究中藥大黃。建立了測(cè)定唐古特大黃水提液中土大黃普含量的熒光分析方法，擬定了溶液熒光法測(cè)定蘆薈大黃素含量的分析方法。采用熒光光譜分析法對(duì)青海大黃不同濃度水浸液進(jìn)行熒光掃描，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，水浸液濃度與熒光強(qiáng)度呈線性關(guān)系。在大黃水浸液三維熒光等高線光譜中發(fā)現(xiàn)一個(gè)明顯的熒光峰(401.8nm)，可作為大黃定性鑒別的依據(jù)。

在 HPLC 指紋圖譜的基礎(chǔ)上，可進(jìn)一步開展譜效學(xué)研究，可使中藥質(zhì)量與其藥效真正結(jié)合起來，有助于大黃作用機(jī)理。薄層色譜掃描法具有學(xué)習(xí)快，易掌握、便宜、靈活等特點(diǎn)?？梢噪S時(shí)改變展開劑、展開方向，顯色、觀察、檢測(cè)都很方便，且其靈敏度及分辨率較高、樣品處理簡(jiǎn)便、設(shè)備易操作等特點(diǎn)。使薄層色譜掃描法在中藥化學(xué)成分含量研究中占有很重的作用。毛細(xì)管電泳法分離效率高、分析速度快、樣品用量少，適用于藥味較多、化學(xué)成分復(fù)雜的中藥復(fù)方成分的分析。LC-MS 聯(lián)用幾乎可以檢測(cè)所有的所有的化合物，比較容易解決分析熱不穩(wěn)定的化合物難題。

8 結(jié)語

大黃成分的檢測(cè)方法比較多，本文列舉的幾種只是比較常見的檢測(cè)方法，在對(duì)不同的檢測(cè)方法進(jìn)行分析時(shí)，發(fā)現(xiàn)不同的檢測(cè)成分的方法一般既有優(yōu)勢(shì)，同時(shí)也存在劣勢(shì)，HPLC法對(duì)大黃成分測(cè)定時(shí)，準(zhǔn)確度比較高，但是檢測(cè)需要的時(shí)間比較長，雖然紫外光度法的檢測(cè)速度快，但是檢測(cè)的準(zhǔn)確度稍差。大黃的成分中并不都是有價(jià)值的藥用成分其中的大黃素就是一種比較典型的毒性成分，可能會(huì)致癌，當(dāng)患者長期食用大黃，在停藥后，一般會(huì)出現(xiàn)便秘的情況，這也降低了大黃的藥用價(jià)值，為了能夠準(zhǔn)確地檢測(cè)出大黃的各成分的含量，檢測(cè)人員要對(duì)現(xiàn)有的檢測(cè)方法進(jìn)行研究。

[1]許乾麗,茅向軍,宋曉寧,馬瑩,熊慧林,童紅.HPLC法同時(shí)測(cè)定六味安消膠囊中蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚的含量[J].藥物分析雜志.2010(10)

[2]王楊.大黃湯劑蒽醌類成分測(cè)定及其在顱腦損傷中的應(yīng)用[D].中南大學(xué)2010

[3]王哲,許利嘉,何春年,彭勇,肖培根.HPLC測(cè)定不同來源大黃中蒽醌和二蒽酮類成分[J].中草藥.2011(06)

[4]嚴(yán)華,程顯隆,魏鋒,肖新月,林瑞超.土大黃苷檢測(cè)技術(shù)用于大黃及其制劑真?zhèn)舞b別的研究[A].2010年中國藥學(xué)大會(huì)暨第十屆中國藥師周論文集[C].2010

R473.5

A

1672-5018（2017）03-225-01