壽升蕓，魏駿駿，何曉芬，吳媛媛，方劍喬，蔣永亮

(浙江中醫(yī)藥大學(xué)第三臨床醫(yī)學(xué)院，杭州 310053)

低頻電針對(duì)2型糖尿病神經(jīng)痛大鼠DRG P2X3受體的抑制作用

壽升蕓，魏駿駿，何曉芬，吳媛媛，方劍喬*，蔣永亮*

(浙江中醫(yī)藥大學(xué)第三臨床醫(yī)學(xué)院，杭州 310053)

目的 觀察低頻電針(electroacupuncture，EA)對(duì)2型糖尿病神經(jīng)痛(diabetic neuropathic pain，DNP)模型大鼠的痛閾以及L5背根神經(jīng)節(jié)(dorsal root ganglion，DRG)的P2X3受體表達(dá)的影響。方法 實(shí)驗(yàn)一：將50只SD大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組8只和造模組42只。造模組給予高脂高糖飲食聯(lián)合小劑量鏈脲佐菌素(streptozotocin，STZ，35 mg/kg)腹腔注射建立大鼠DNP模型，對(duì)照組以常規(guī)飼料喂養(yǎng)并給予相同劑量的檸檬酸緩沖液注射。造模組中模型成功的大鼠進(jìn)一步分為模型組(DNP group)與低頻電針治療組(DNP + EA group)。電針治療選用雙側(cè)“足三里”、“昆侖”穴，頻率2 Hz，強(qiáng)度1 mA治療15 min，后2 mA 治療15 min，每日1次，共治療7次。觀察大鼠高脂高糖飼養(yǎng)0、5 周的胰島素敏感指數(shù)(insulin sensitivity index，ISI)及0、5、7 周空腹血糖(fasting plasma glucose，F(xiàn)PG)水平變化；采用動(dòng)態(tài)足底觸覺儀檢測(cè)大鼠高脂高糖飼養(yǎng)0、5、7 周及電針3、5、7 d 6個(gè)時(shí)間點(diǎn)雙后足縮腿閾(paw withdrawal thresholds，PWTs)的變化；采用免疫熒光法測(cè)定L5 DRG P2X3受體表達(dá)。實(shí)驗(yàn)二：將DNP造模成功的大鼠分為電針組(EA + Vehicle group)和P2X3激動(dòng)劑組(EA + αβ-meATP group)。電針干預(yù)同上。EA + αβ-meATP group于每次電針干預(yù)前在大鼠足趾下注射αβ-meATP(0.6 μmol/L，100 μL)。EA + vehicle group大鼠注射等劑量的PBS緩沖液，其余干預(yù)相同。檢測(cè)機(jī)械痛閾。結(jié)果 ①與對(duì)照組大鼠比較，模型組大鼠高脂高糖飼養(yǎng)5 周后ISI均明顯降低(P< 0.01)，高脂高糖飼養(yǎng)7 周后 FPG明顯升高(P< 0.01)，說(shuō)明成功建立2型糖尿病模型(造模成功率為69.04%)；②PWTs：與對(duì)照組比較，模型組大鼠雙側(cè)PWTs明顯降低(P< 0.01)，說(shuō)明2型DNP造模成功；與模型組比較，低頻電針治療組大鼠在治療后各時(shí)點(diǎn)均出現(xiàn)雙側(cè)PWTs的顯著增加(P< 0.01)；而與電針組比較，P2X3激動(dòng)劑組雙側(cè)PWTs均明顯降低(P< 0.01)。③免疫熒光法檢測(cè)結(jié)果顯示：與對(duì)照組比較，模型組大鼠L5 DRG P2X3陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)明顯增加(P< 0.01)；與模型組比較，低頻電針治療組大鼠L5 DRG P2X3陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)均明顯減少(P< 0.01)。結(jié)論 低頻電針能通過(guò)下調(diào)L5 DRG P2X3受體有效改善2型DNP。

2型糖尿病，神經(jīng)痛；電針；P2X3

據(jù)WHO統(tǒng)計(jì)，目前全球共有3.47億人疾患糖尿病[1]，糖尿病是繼腫瘤、心腦血管疾病之后第三位威脅人類健康的慢性非傳染性疾病。而糖尿病神經(jīng)病理痛(diabetic neuropathic pain，DNP)作為糖尿病最常見的并發(fā)癥之一，其發(fā)病率高達(dá)32.7%[2]，主要表現(xiàn)為自發(fā)性燒灼樣疼痛、痛覺過(guò)敏和痛覺超敏，嚴(yán)重影響了患者的生存質(zhì)量。目前臨床上DNP的藥物治療效果不穩(wěn)定且毒、副作用明顯。因此，尋找能有效控制DNP且毒副作用少的方法，并闡明其機(jī)理，是糖尿病并發(fā)癥防治中的一個(gè)重要問(wèn)題。

電針(electroacupuncture，EA)能減輕神經(jīng)病理痛，且低頻電針的鎮(zhèn)痛效果優(yōu)于高頻電針的現(xiàn)象[3]。研究表明背根神經(jīng)節(jié)(dorsal root ganglion，DRG)P2X3受體水平表達(dá)上調(diào)在大鼠DNP發(fā)生中起著重要的作用[4]。電針可能通過(guò)下調(diào)DRG P2X3受體的功能與表達(dá)減輕坐骨神經(jīng)慢性壓榨性損傷(chronic constriction injury，CCI)誘導(dǎo)的神經(jīng)病理痛[5]。但關(guān)于電針治療DNP是否也與調(diào)節(jié)DRG P2X3受體有關(guān)尚不明確，其作用機(jī)理有待闡述。因此，本實(shí)驗(yàn)擬通過(guò)觀察低頻電針對(duì)2型DNP模型大鼠的痛閾干預(yù)以及對(duì)L5背根神經(jīng)節(jié)(dorsal root ganglion，DRG)的P2X3受體表達(dá)的影響，探討電針治療DNP的可能機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

選用SPF級(jí)雄性SD大鼠50只，體重(150±10)g，購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心【SCXK(滬)2008-0016】，由浙江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中心飼養(yǎng)[SYXK(浙)2013-184]。飼養(yǎng)期間正常大鼠給予嚙齒類動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料(由實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)，造模大鼠給予高脂高糖飼料，均自由飲水，晝夜明暗周期：12 h/12 h。

1.2 造模與分組

將50只SD大鼠用完全隨機(jī)分組法分為對(duì)照組(n=8)與造模組(n=42)。對(duì)照組以普通飼料喂養(yǎng)。造模組以高脂高糖飼料(72.5%普通飼料 + 10%豬油 + 10%蔗糖 + 2%膽固醇 + 0.5%膽酸鈉 + 5%蛋黃粉)喂養(yǎng)5周誘發(fā)胰島素抵抗。于實(shí)驗(yàn)開始前即0周、高脂高糖喂養(yǎng)5周后測(cè)大鼠空腹血糖(fasting plasma glucose，F(xiàn)PG)，并取血測(cè)空腹胰島素(fasting plasma insulin，F(xiàn)INS)評(píng)估胰島素敏感性，胰島素敏感指數(shù)(insulin sensitive index，ISI)下降的大鼠繼以小劑量鏈脲佐菌素(streptozotocin，STZ，35 mg/kg)腹腔注射1次，對(duì)照組僅給予相同劑量的檸檬酸緩沖液注射。于7 周分別測(cè)FPG和大鼠痛閾，血糖穩(wěn)定且11.1 mmol/L，同時(shí)痛閾下降15%者入選實(shí)驗(yàn)，表示大鼠糖尿病神經(jīng)病理痛模型(diabetic neuropathic pain，DNP)制備成功。造模成功的大鼠將進(jìn)一步隨機(jī)分為模型組(DNP group，n=8)和低頻電針治療組(DNP + EA group，n=9)。其余未達(dá)到此標(biāo)準(zhǔn)者予以剔除。

1.3 電針干預(yù)

低頻電針治療組：大鼠固定后，電針治療取雙側(cè)“足三里”、“昆侖”穴(參照華興邦大鼠穴位圖譜)，采用0.25 mm × 13 mm毫針，進(jìn)針后連接韓氏穴位暨神經(jīng)刺激儀，頻率2 Hz，強(qiáng)度先1 mA治療15 min，后2 mA 治療15 min，共30 min。電針治療于高脂高糖飼養(yǎng)第7周，每天1次，共治療7次。對(duì)照組、模型組僅給予同低頻電針治療組相同的固定。

1.4 空腹血糖的測(cè)定

分別于高脂高糖飼養(yǎng)0、5、7 周這3個(gè)時(shí)間點(diǎn)將大鼠于前天晚上8點(diǎn)禁食不禁水，進(jìn)行剪尾取血，采用羅氏卓越型血糖儀(Roche ACCU-CHEK Performa)測(cè)定空腹血糖值(FPG，mmol/L)。

1.5 胰島素測(cè)定

分別于高脂高糖飼養(yǎng)0 周、5 周這兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)，將大鼠禁食不禁水12 h 后，眼眶取血約2 mL，室溫靜止約30 min，于4℃、3500 r/min離心10 min，取上清液血清，采用雙抗體夾心ELISA 法測(cè)定胰島素濃度，根據(jù)不同濃度標(biāo)準(zhǔn)血清的A450值作標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算待測(cè)標(biāo)本血清胰島素濃度。胰島素敏感性指數(shù)的計(jì)算：胰島素敏感性指數(shù)(insulin sensitivity index，ISI)=1 /(空腹血糖 × 空腹胰島素)=1 /(FPG×FINS)，此值為非正態(tài)分布，故計(jì)算時(shí)取其自然對(duì)數(shù)。

1.6 機(jī)械痛閾測(cè)定

分別于高脂高糖飼養(yǎng)0、5、7 周及電針治療3、5、7 d這6個(gè)時(shí)間點(diǎn)，采用動(dòng)態(tài)足底觸覺儀檢測(cè)大鼠雙側(cè)足跖縮腿閾(paw withdrawal thresholds，PWT)，取雙側(cè)平均值作為大鼠機(jī)械痛覺異常的指標(biāo)，即機(jī)械痛閾。測(cè)量前，將大鼠置于塑料盒內(nèi)適應(yīng)環(huán)境10 min。待大鼠安靜后(停止梳理毛發(fā)和探索性活動(dòng))，將連于機(jī)械泵上的類Von Frey絲的金屬絲(0.5 mm)置于大鼠后足中央，避開足墊；啟動(dòng)機(jī)械泵，金屬絲即以恒定速度自動(dòng)上臺(tái)，對(duì)大鼠足底施加機(jī)械刺激。刺激力量從0 g開始以2.5 g/s遞增(Ramp=20 sec)，直至大鼠產(chǎn)生縮腿反應(yīng)；最大刺激力量為50 g，以免大鼠足爪受損；連續(xù)測(cè)量5次，去最大、最小值，取3次平均值，每次間隔5 min。

1.7 免疫熒光方法檢測(cè)L5 DRG P2X3 陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)情況

(1) 樣本采集

大鼠用10%(0.35 mL / 100 g)水合氯醛腹腔麻醉，開胸暴露心臟，生理鹽水(4 ℃預(yù)冷)經(jīng)左心室、升主動(dòng)脈快速灌注，直至流出液為澄清液體，再緩慢推注4%多聚甲醛150 mL，隨后用500 mL 4%多聚甲醛溶液先快后慢滴注，快速取出大鼠L5 DRG，4%多聚甲醛溶液中后固定3 h，15%、30%蔗糖溶液梯度脫水，液氮速凍，-80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

(2) 免疫熒光單標(biāo)法檢測(cè)大鼠L5 DRG 的P2X3 陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)情況

L5 DRG進(jìn)行冰凍切片(14 μm)，將切片貼于涂有多聚賴氨酸的載玻片上，PBS洗10 min × 3次；滴加10%山羊血清37 ℃孵育1 h以封閉非特異性位點(diǎn)；加兔抗大鼠P2X3抗體(1∶2000)4℃孵育過(guò)夜；PBS洗10 min × 3次，滴加Alexa Fluor? 488山羊抗兔 IgG (H + L) 37℃孵育(避光)1 h(1∶800)，PBS洗10 min × 5次(避光)，擦干玻片后滴加抗熒光猝滅劑封片，熒光顯微鏡下觀察并拍片。

1.8 檢測(cè)P2X3 激動(dòng)劑 αβ-meATP對(duì)低頻電針鎮(zhèn)痛作用的影響

該部分為驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步驗(yàn)證低頻電針對(duì)DNP的鎮(zhèn)痛作用是否與下調(diào)DRG P2X3受體有關(guān)。動(dòng)物來(lái)源以及造模方法同上。將模型成功的12只DNP大鼠隨機(jī)分為電針組(EA + vehicle group，n=6)和P2X3激動(dòng)劑組(EA + αβ-meATP group，n=6)。電針干預(yù)同上。EA + αβ-meATP 組于每次EA治療前于大鼠足趾下注射αβ-meATP(0.6 μmol/L，100 μL)。EA + Vehicle組注射等劑量的PBS緩沖液，其余干預(yù)同前。檢測(cè)機(jī)械痛閾。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 大鼠STZ注射前不同時(shí)間點(diǎn)胰島素敏感指數(shù)變化

與對(duì)照組比較，造模組大鼠ISI均降低(P< 0.01)。見表1。

2.2 大鼠STZ注射前后不同時(shí)間點(diǎn)空腹血糖變化

與對(duì)照組比較，STZ注射3 d及STZ注射2周后造模組大鼠FPG均升高(P< 0.01)。見表2。

2.3 低頻電針對(duì)DNP大鼠痛閾的影響

與對(duì)照組比較，造模后模型組大鼠PWT降低(P< 0.01)；與模型組比較，低頻電針治療組大鼠 PWT升高(P< 0.01)。見圖1。

表1 大鼠STZ注射前ISI變化

注：與對(duì)照組比較：**P< 0.01。(下表同)。

Note.**P< 0.01, versus the normal group.(The same as in the following tables)

表2 大鼠STZ注射前FPG變化

注：與對(duì)照組比較：**P < 0.01；與模型組比較：##P < 0.01。圖1 低頻電針對(duì)DNP大鼠PWT的影響Note：**P < 0.01, versus the normal group; ##P < 0.01, versus the DNP group.Fig.1 Effects of 2 Hz electroacupuncture on bilateral paw withdrawal thresholds of the DNP rats.

2.4 大鼠L5 DRG P2X3受體陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)情況

如圖2所示，與對(duì)照組比較，模型組大鼠L5 DRG中P2X3受體表達(dá)增多(P< 0.01)；與模型組比較，低頻電針治療組大鼠 L5 DRG中P2X3受體表達(dá)減少(P< 0.01)。

2.5 P2X3受體激動(dòng)劑αβ-meATP對(duì)低頻電針鎮(zhèn)痛作用的影響

與電針組比較，P2X3激動(dòng)劑組大鼠雙側(cè)PWT降低(P< 0.01)。見圖3。

3 討論

糖尿病是嚴(yán)重危害人類健康的慢性疾病之一，目前全球糖尿病患者超過(guò)7億，而2型糖尿病占了90%[6]。2型糖尿病后期常出現(xiàn)神經(jīng)病變、眼部病變、腎臟病變以及心血管病變等，這些并發(fā)癥比糖尿病本身更進(jìn)一步危害著人類的健康。神經(jīng)病理痛是2型糖尿病常見并發(fā)癥，因其頑固、難治而越來(lái)越受到人們的關(guān)注。目前臨床一線用藥抗驚厥藥、三環(huán)類抗抑郁藥療效不穩(wěn)定且存在嚴(yán)重毒副作用，長(zhǎng)期應(yīng)用受到限制；傳統(tǒng)的非甾體類、嗎啡類鎮(zhèn)痛藥物常常難以湊效[7]。針刺是控制慢性疼痛的主要手段之一[8]，在治療DNP方面有良好的應(yīng)用前景，電針作為針刺的主要手段已開始用于治療DNP[9, 10]，但由于臨床系統(tǒng)觀察較少、作用機(jī)理不明確，目前DNP治療在針灸臨床所占比例不高，有必要開展針灸治療DNP的機(jī)制研究，促進(jìn)針灸更好地治療DNP。本實(shí)驗(yàn)首次開展低頻電針對(duì)DNP大鼠的DRG P2X3受體干預(yù)作用研究。

注：與對(duì)照組比較：**P < 0.01；與模型組比較：##P < 0.01。圖2 大鼠L5 DRG P2X3受體陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá)Note.**P < 0.01, versus the normal group;##P < 0.01, versus the DNP group.Fig.2 P2 X3 receptor positive expression cells in L5 DRG of the DNP rats

注：與電針組比較：△△P < 0.01。圖3 P2X3受體激動(dòng)劑對(duì)電針干預(yù)DNP大鼠PWT的影響Note.△△P < 0.01, versus the EA + vehicle group.Fig.3 Effect of P2X3 agonist on the analgesic effect of electroacupuncture on bilateral paw withdrawal thresholds of the DNP rats

2 型糖尿病的發(fā)病機(jī)理主要為胰島素抵抗與胰島功能受損，而胰島素抵抗則為其始動(dòng)因素[11]。本實(shí)驗(yàn)采用的高脂高糖飼養(yǎng)聯(lián)合小劑量STZ注射造模法是目前最符合人類2型糖尿病臨床特征的方法，具有方法簡(jiǎn)單、成本低廉、模型穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)，適合糖尿病本身及其多種并發(fā)癥的研究[12,13]。該方法通過(guò)高糖高脂飲食誘導(dǎo)大鼠胰島素抵抗，聯(lián)合注射低劑量STZ損傷胰島功能，進(jìn)而引起血糖升高，模擬了2型糖尿病的臨床發(fā)病過(guò)程[14-16]。已有研究表明[17]高脂高糖飼養(yǎng)聯(lián)合小劑量STZ注射成功制備2型糖尿病后2周可誘發(fā)神經(jīng)病理痛，從而制備DNP模型。而本實(shí)驗(yàn)中高脂高糖飼養(yǎng)大鼠5周后，造模組大鼠胰島素敏感指數(shù)明顯下降，說(shuō)明誘發(fā)了胰島素抵抗，再予以腹腔注射STZ(35 mg/kg)后，空腹血糖明顯上升，成功建立2型糖尿病模型。STZ注射2周后，造模組大鼠出現(xiàn)機(jī)械痛閾明顯下降，表明2型糖尿病誘發(fā)了神經(jīng)病理痛，與以往建立的DNP模型相似[17]。對(duì)DNP大鼠進(jìn)行電針治療，結(jié)果顯示低頻電針治療后，低頻電針治療組大鼠的機(jī)械痛閾值明顯高于模型組(P< 0.01)，說(shuō)明低頻電針能夠明顯改善DNP。

DNP與周圍感覺神經(jīng)興奮性增強(qiáng)有關(guān)，涉及多種離子通道、受體在背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元上的表達(dá)、功能上調(diào)[4,18-19]。嘌呤受體P2X家族是當(dāng)前生物醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域的一個(gè)熱點(diǎn)，激活后可使Ca2+、Na+、K+通過(guò)，其中P2X3受體高選擇性地表達(dá)于感受傷害性信息的中小DRG神經(jīng)元上[20, 21]，參與多種神經(jīng)病理痛過(guò)程[5, 22-25]。研究顯示，在鏈脲佐菌素(streptozotocin，STZ)誘導(dǎo)的大鼠DNP模型中，P2X3受體介導(dǎo)的DRG神經(jīng)元快反應(yīng)電流增強(qiáng)，細(xì)胞膜P2X3受體表達(dá)上調(diào)[4]，而P2X3受體拮抗劑PPADS、TNP-ATP均能抑制DNP大鼠痛敏反應(yīng)[4, 22]；用siRNA干擾P2X3受體基因表達(dá)也能減輕P2X3受體激動(dòng)劑αβ-meATP引起的大鼠痛敏反應(yīng)[26]。在本實(shí)驗(yàn)中，我們也發(fā)現(xiàn)DNP模型大鼠DRG P2X3受體表達(dá)明顯高于對(duì)照組。這些結(jié)果表明DRG神經(jīng)元P2X3受體在DNP中起著重要作用。

Tu等[5]在CCI誘導(dǎo)的神經(jīng)病理痛模型中發(fā)現(xiàn)電針能夠提高模型大鼠的機(jī)械痛閾和熱痛閾，并減少DRG P2X3受體的表達(dá)，減弱P2X3受體激動(dòng)劑誘發(fā)的電流改變，表明電針能通過(guò)抑制DRG P2X3受體的功能和表達(dá)參與CCI神經(jīng)病理痛的鎮(zhèn)痛過(guò)程。但目前尚不清楚電針干預(yù)DNP是否存在同樣的機(jī)制。在本研究中，我們發(fā)現(xiàn)2 Hz 電針在降低DNP大鼠痛閾的同時(shí)，可進(jìn)一步降低模型大鼠DRG P2X3受體的表達(dá)水平，且2 Hz 電針對(duì)DNP大鼠的鎮(zhèn)痛作用能被P2X3受體激動(dòng)劑αβ-meATP拮抗，以上結(jié)果表明低頻電針對(duì)DNP的干預(yù)作用與其抑制DRG 神經(jīng)元P2X3受體的表達(dá)有關(guān)。

本研究通過(guò)觀察低頻電針對(duì)DNP大鼠的干預(yù)作用和對(duì)DRG P2X3受體的調(diào)控效應(yīng)，并進(jìn)行P2X3受體激動(dòng)劑的驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)低頻電針對(duì)DNP具有良好的治療作用，與其下調(diào)DRG P2X3受體密切相關(guān)。本研究闡釋了電針治療DNP的部分機(jī)制，同時(shí)也為電針治療DNP提供了科學(xué)依據(jù)。

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Inhibitory effect of low frequency electroacupuncture on the P2X3 receptor in dorsal root ganglion of rats suffering from type II diabetic neuropathic pain

SHOU Sheng-yun, WEI Jun-jun, HE Xiao-fen, WU Yuan-yuan,FANG Jian-qiao*, JIANG Yong-liang*

(The Third Clinical Medical College, Zhejiang Chinese Medical University, Hangzhou 310053, China)

Objective To investigate the effects of low frequency electroacupuncture on the P2X3 receptor expression in dorsal root ganglion (DRG) of rats with type II diabetic neuropathic pain. Methods Part 1：Fifty normal SD rats were randomly divided into normal group (8 rats) and model group (42 rats). The rat model of type II diabetic neuropathic pain was generated by high fat and high sugar diet with a single intraperitoneal injection of streptozotocin (STZ, 35 mg/kg). 2 Hz electroacupuncture was administered at ipsilateral acupoints Zusanli and Kunlun for consecutive 7 days. Insulin sensitivity index (ISI) was measured at 0 w and 5 w, and fasting plasma glucose (FPG) was measured at 0 w, 5 w, and 7 w. Paw withdrawal threshold (PWT) was measured by mechanical pain threshold, and P2X3 receptor was determined by immunofluorescence. Part 2：Twelve rats with diabetic neuropathic pain (DNP) were divided into EA + vehicle group (6 rats) and EA + αβ-meATP group (6 rats). Rats in the two groups received the same EA treatment as Part 1. Rats in the EA + αβ-meATP group were injected with P2X3 receptor agonist αβ-meATP (0.6 μmol/L, 100 μL) into the ventral surface of each hind paw every time before EA treatment. Rats in the EA + vehicle group received the same dose of vehicle (PBS buffer) as a control. Pain threshold of the rats were measured. Results ① Compared with the normal group, the ISI levels of the rats in DNP group was significantly decreased after 5 weeks of the high-fat high-sugar diet (P< 0.01). Two weeks after STZ injection, the fasting plasma glucose levels in the rats receiving STZ were significantly elevated (P< 0.01). The type 2 diabetes model was established with a successful rate of 69.04%. ② PWTs：The PWTs of rats in DNP group were reduced compared with rats in the normal group (P< 0.01), indicating that the type 2 DNP model was successfully established. Compared with the PWTs of DNP-controlled rats, the 2 Hz electroacupuncture significantly increased bilateral PWT of rats subjected to DNP from day 3 after treatment (P< 0.01). P2X3 receptor agonist αβ-meATP greatly reduced bilateral PWT of EA-treated DNP rats compared with that of the EA + vehicle group (P< 0.01). ③The immunofluorescence essay showed that P2X3 receptor expression in bilateral L5 DRGs in the DNP group was significantly increased as compared with that in the normal group (P< 0.01). The increases were inhibited by 2 Hz EA in L5 DRGs compared with the DNP group (P< 0.01). Conclusions 2Hz electroacupuncture can effectively treat the type II diabetic neuropathic pain by decreasing the expression of L5 DRG P2X3 receptors in rats.

Type II diabetic neuropathic pain; Electroacupuncture; P2X3

JIANG Yong-liang， E-mail: jyl2182@126.com； FANG Jian-qiao, E-mail：fangjianqiao7532@163.com

國(guó)家自然科學(xué)基金(編號(hào)：81303039)；教育部高等學(xué)校博士學(xué)科點(diǎn)專項(xiàng)科研基金(編號(hào)：20133322120001)；浙江省博士后基金(編號(hào)：BSH1302083)；國(guó)家中醫(yī)藥管理局重點(diǎn)學(xué)科(針灸學(xué))建設(shè)經(jīng)費(fèi)資助(國(guó)中醫(yī)藥發(fā)[2009]30號(hào))。

壽升蕓(1990-)，女，碩士研究生，專業(yè)：針灸推拿學(xué)。E-mail： 502901943@qq.com

蔣永亮(1981-)，男，副研究員，研究方向：針灸鎮(zhèn)痛與免疫相關(guān)性疾病的研究。E-mail： jyl2182@126.com；方劍喬(1961-)，男，教授，研究方向：針灸鎮(zhèn)痛與免疫相關(guān)性疾病的研究。E-mail： fangjianqiao7532@163.com。

Q95-33

A

1005-4847(2017) 01-0054-06

10.3969/j.issn.1005-4847.2017.01.010

2016-05-03