王立文，沈曉潔，林 彬

(無錫衛(wèi)生高等職業(yè)技術學校護理系，江蘇無錫 214028)

非小細胞肺癌中l(wèi)ncRNA MVIH與吉西他濱耐藥的相關性研究*

王立文，沈曉潔，林 彬△

(無錫衛(wèi)生高等職業(yè)技術學校護理系，江蘇無錫 214028)

目的 探討非小細胞肺癌(NSCLC)組織中長鏈非編碼RNA MVIH(lncRNA MVIH)與吉西他濱耐藥的相關性。方法 將56例NSCLC患者分為觀察組(n=30)和對照組(n=26)，觀察組給予吉西他濱/順鉑(GP)治療方案；對照組給予紫杉醇/順鉑(TP)治療方案，兩組患者均以21 d為1個治療周期；2個周期后進行療效評價。提取獲得標本的RNA，對lncRNA MVIH的表達進行熒光定量分析。結果 觀察組30例患者中化療敏感13例，化療耐藥10例；耐藥組lncRNA MVIH的表達水平為3.61±0.50，顯著高于敏感組(2.08±0.27)，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。對照組26例患者中化療敏感9例，化療耐藥9例；耐藥組lncRNA MVIH表達水平為2.94±0.31，敏感組為2.77±0.34，兩組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。結論 NSCLC組織中l(wèi)ncRNA MVIH水平與吉西他濱耐藥有關，提示lncRNA MVIH可作為預測吉西他濱耐藥的標志物。

癌，非小細胞肺 ；吉西他濱；抗藥性，腫瘤，長鏈非編碼RNA

非小細胞肺癌(non small cell lung cancer，NSCLC)是肺癌中最常見的類型，約占肺癌患者的75%～80%[1]?；熓荖SCLC綜合治療的基礎，但療效仍不理想，患者的5年生存率僅15%左右[2]。吉西他濱是NSCLC化療的常用藥物，以吉西他濱為基礎的聯合化療能有效提高晚期肺癌患者的生存率[3]，但吉西他濱的耐藥性限制了其臨床療效，且目前缺乏有效的指標來預測肺癌患者對吉西他濱的耐藥性。近年來研究證實，基因的異常表達決定了機體對藥物治療的反應，這也是腫瘤個體化治療的理論基礎。長鏈非編碼RNA(long non-coding RNA，lncRNA)在基因表達調控方面具有非常重要的作用，并在腫瘤的形成、增殖、侵襲和轉移等方面發(fā)揮了調控作用。最近研究發(fā)現，一種與肝癌微血管浸潤相關的lncRNA(lncRNA associated with microvascular invasion in HCC，lncRNA MVIH)在多種癌細胞中表達異常升高[4-5]，且在NSCLC癌組織中表達異常升高[6]，但是其臨床意義尚未完全闡明。本研究旨在分析NSCLC患者癌組織中l(wèi)ncRNA MVIH的表達，并探討其與吉西他濱化療耐藥的相關性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇某醫(yī)院于2011年12月至2015年12月收治的NSCLC患者56例，其中男37例，女19例；年齡32～74歲，平均(52.30±7.90)歲。均有客觀可評價病灶，全身功能狀態(tài)(ECOG)評分小于或等于 2分。56例NSCLC患者中鱗狀細胞癌18例，腺癌38例；TNM分期(1997年UICC的肺癌分期標準)：Ⅲb期37例，Ⅳ期19例；腫瘤患者卡氏(Karnofsky，KPS)評分：≥80分50例，<80分6例；吸煙23例；飲酒29例；低分化26例，中分化28例，高分化2例。本研究經醫(yī)院倫理委員會批準，所有患者均簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 治療方法 將56例患者分為2組，觀察組(n=30)：接受吉西他濱/順鉑(GP)方案治療，吉西他濱1 000 mg/m2，第1、8天靜脈滴注；順鉑25 mg/m2，第1～3天靜脈滴注；21 d為1個治療周期。對照組(n=26)：接受紫杉醇/順鉑(TP)方案治療，紫杉醇150 mg/m2，第1天靜脈滴注；順鉑25 mg/m2，第1～3天靜脈注；21 d為1個周期。兩組患者均于2個周期后評價療效。

1.2.2 療效評定 按照世界衛(wèi)生組織規(guī)定的實體瘤近期療效評價標準，分為完全緩解(complete response，CR) 、部分緩解(partial response，PR)、疾病穩(wěn)定(stable disease，SD)和疾病進展(progressive disease，PD)。其中，有效率(response rate，RR)為CR+PR例數/總例數×100%，以RR被認為是對吉西他濱敏感，反之則被認為耐藥。

1.2.3 病理檢測 (1)組織收集保存：收集患者外科手術切除的肺癌組織及癌旁的正常組織(癌旁的正常組織離癌緣5 cm以上)，取下后放入預先裝有RNAlater(美國Ambion公司)溶液的試管中，于-4 ℃冰箱中過夜后放入-80 ℃冰箱中保存。(2)lncRNA的提取和定量：將標本從冰箱取出后靜置于室溫下解凍，在超凈工作臺中取出組織放入離心管稱質量，控制組織質量在0.05～0.10 g。加入1 mL Trizol試劑(美國Invitrogen公司)并使用Handy pestle在冰盒上進行充分研磨。按說明書操作，提取總RNA后，利用Quant Script RT試劑盒(中國天根公司)進行逆轉錄，根據文獻[6]報道的引物設計序列，利用熒光定量PCR試劑盒(美國Invitrogen公司)和實時熒光定量儀ABI7900HT(美國ABI公司)對lncRNA MVIH的表達進行熒光定量，采用2-△△CT值表示相對表達量。

2 結 果

2.1 lncRNA MVIH表達水平與臨床病理因素的相關性 為了解不同病理類型、分化程度及臨床分期的NSCLC組織中l(wèi)ncRNA MVIH的表達，采用熒光定量PCR的方法，對肺癌組織中l(wèi)ncRNA MVIH水平的表達進行檢測。lncRNA MVIH表達水平與NSCLC患者的年齡、性別、KPS評分、臨床分期、腫瘤分化程度等均無明顯相關性(P>0.05)，見表1。

2.2 NSCLC組織中l(wèi)ncRNA MVIH的表達與GP、TP方案耐藥的關系 觀察組30例NSCLC患者中化療敏感13例，化療耐藥者10例，耐藥患者lncRNA MVIH的表達水平為3.61±0.50，明顯高于敏感患者(2.08±0.27)，二者比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。對照組26例NSCLC患者中化療敏感9例，化療耐藥患者9例，耐藥組lncRNA MVIH表達水平為2.94±0.31，與敏感患者(2.77±0.34)比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見表2。

表1 lncRNA MVIH表達與NSCLC患者臨床病理特征的關系

表2 兩組患者lncRNA MVIH表達水平比較

a：P<0.01，b：P<0.05，與PD比較。

3 討 論

吉西他濱屬于細胞周期特異性抗代謝類藥物，主要作用于DNA合成期的腫瘤細胞，具有抗瘤譜廣、毒副反應輕等特點，1996年美國FDA正式批準其作為NSCLC的一線化療藥物[7]。但臨床研究發(fā)現吉西他濱治療晚期NSCLC的有效率僅為25%左右，聯合用藥的療效也在50%左右[8]。這與腫瘤細胞對吉西他濱的耐藥密切相關。吉西他濱在細胞內的代謝過程復雜，多種相關蛋白和因子均有參與，因而其耐藥性的產生也是多因素共同作用的結果。隨著生物信息學和新測序技術普及和快速發(fā)展，對于肺癌耐藥的研究逐漸也從蛋白質拓展到RNA、DNA 水平擴展。

lncRNA是一類由于缺乏開放顯著閱讀框架導致缺乏蛋白編碼能力的非編碼RNA，lncRNA主要通過表觀遺傳學轉錄及轉錄后水平調控基因的表達和翻譯，從而參與腫瘤生物學功能。lncRNA與人類腫瘤發(fā)生、發(fā)展關系密切，如lncRNA HOTAIR在肝癌等多種腫瘤細胞中的表達均出現顯著升高，并且其表達水平的高低與患者的治療及預后相關[9]。隨著高通量測序技術的發(fā)展，研究者篩選得到了大量的與腫瘤生物特性相關的lncRNA，表明 lncRNA在腫瘤耐藥中發(fā)揮了重要作用[10]。如lncRNA HOTTIP能夠通過調控HOXA13的表達而促進胰腺癌細胞侵襲和獲得性耐藥[11]；lncRNA HOTAIR通過抑制p21蛋白合成而增強腺癌細胞的順鉑耐藥性[12]。lncRNA MVIH最早是在肝癌組織檢測發(fā)現；隨后在多種癌細胞中均檢測到MVIH的異常表達升高[13]。有研究指出NSCLC癌組織中MVIH表達顯著增高，并且其表達水平與淋巴結轉移呈正相關[6]。細胞實驗表明，構建并轉染特異性siRNA干擾lncRNA MVIH的表達后，能夠顯著抑制骨肉瘤細胞的增殖和侵襲[14]。上述研究表明，高表達MVIH可能作為NSCLC不良預后的生物學標志。

本研究結果證實，接受GP方案的患者出現化療耐藥，與lncRNA MVIH的表達水平明顯相關，而接受TP方案的患者出現化療耐藥與lncRNA MVIH的表達水平無關，表明lncRNA MVIH的高表達與GP方案中吉西他濱的耐藥性相關，而與順鉑無關，提示lncRNA MVIH可能作為預測吉西他濱療耐藥性的標志物。

[1]Ulivi P,Zoli W,Capelli L,et al.Target therapy in NSCLC patients:Relevant clinical agents and tumour molecular characterisation[J].Mol Clin Oncol,2013,1(4):575-581.

[2]Zhou JG,Tian X,Wang X,et al.Treatment on advanced NSCLC:platinum-based chemotherapy plus erlotinib or platinum-based chemotherapy alone? A systematic review and meta-analysis of randomised controlled trials[J].Med Oncol,2015,32(2):471-480.

[3]任慶，熊銳華，田秀榮，等．吉西他濱聯合順鉑治療晚期膀胱癌的臨床觀察[J]．重慶醫(yī)學，2014，43(34)：4660-4661．

[4]Yuan SX,Yang F,Yang Y,et al.Long noncoding RNA associated with microvascular invasion in hepatocellular carcinoma promotes angiogenesis and serves as a predictor for hepatocellular carcinoma patients′ poor recurrence-free survival after hepatectomy[J].Hepatology,2012,56(6):2231-2241.

[5]Lei B,Xu SP,Liang XS,et al.Long non-coding RNA MVIH is associated with poor prognosis and malignant biological behavior in breast cancer[J].Tumour Biol,2016,37(4):5257-5264.

[6]Nie FQ,Zhu Q,Xu TP,et al.Long non-coding RNA MVIH indicates a poor prognosis for non-small cell lung cancer and promotes cell proliferation and invasion[J].Tumour Biol,2014,35(8):7587-7594.

[7]Thatcher N,Hirsch FR,Luft AV,et al.Necitumumab plus gemcitabine and cisplatin versus gemcitabine and cisplatin alone as first-line therapy in patients with stage Ⅳ squamous non-small-cell lung cancer (SQUIRE):an open-label,randomised,controlled phase 3 trial[J].Lancet Oncol,2015,16(7):763-774.

[8]Le Chevalier T,Scagliotti G,Natale R,et al.Efficacy of gemcitabine plus Platinum chemotherapy compared with other Platinum containing regimens in advanced non-small-cell lung cancer:a meta-analysis of survival outcomes[J].Lung Cancer,2005,47(1):69-80.

[9]Wang KC,Chang HY.Molecular mechanisms of long noncoding RNAs[J].Mol Cell,2011,43(6):904-914.

[10]Tsang WP,Wong TW,Cheung AH,et al.Induction of drug resistance and transformation in human cancer cells by the noncoding RNA CUDR[J].RNA,2007,13(6):890-898.

[11]Li ZH,Zhao XH,Zhou Y,et al.The long non-coding RNA HOTTIP promotes progression and gemcitabine resistance by regulating HOXA13 in pancreatic cancer[J].J Transl Med,2015,13(1):1-16.

[12]Liu Z,Sun M,Lu K,et al.The long noncoding RNA HOTAIR contributes to cisplatin resistance of human lung adenocarcinoma cells via downregualtion of p21(WAF1/CIP1) expression[J].PLoS One,2013,8(10):e77293.

[13]Ayers D.Long non-coding RNAs:novel emergent biomarkers for cancer diagnostics[J].J Cancer Res Treat,2013,1(2):31-35.

[14]Dong Y,Liang G,Yuan B,et al.MALAT1 promotes the proliferation and metastasis of osteosarcoma cells by activating the PI3K/Akt pathway[J].Tumour Biol,2015,36(3):1477-1486.

?驗交流·

10.3969/j.issn.1671-8348.2017.07.026

無錫市醫(yī)院管理中心科研項目(YGZXM14021)。 作者簡介：王立文(1968-)，副教授，碩士研究生，主要從事外科教學和臨床研究?！?/p>

，E-mail:529733809@qq.com。

R730.53

B

1671-8348(2017)07-0946-03

2016-08-13

2016-11-11)