王德明

（四川大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，四川成都610000）

丹參素提取工藝研究

王德明

（四川大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，四川成都610000）

采用水煎煮法提取丹參素，通過大孔樹脂吸附雜質(zhì)、醇析除糖得到較純的丹參素溶液。然后考察不同回流時間丹參素溶出量的變化情況，同時對丹參素穩(wěn)定性影響因素進(jìn)行研究。結(jié)果表明，丹參素溶出量隨回流時間的增加而呈上升趨勢，9h后增加緩慢。浸出液經(jīng)大孔樹脂吸附、醇析除糖處理，可有效去除雜質(zhì)使丹參素的含量提高。丹參素水溶液常溫下表現(xiàn)出一定的不穩(wěn)定性，且隨純度、濃度的提高而降低。及時將其凍干，避光、低溫保存則較為穩(wěn)定。通過水提醇沉的方法，對回流時間、丹參素穩(wěn)定性、丹參素純化方法等方面進(jìn)行考察，為提取和純化丹參素探索一條較為簡單的工藝流程。

丹參素；提??；純化；穩(wěn)定性

丹參（Salvia miltiorrhiza）為唇形科植物丹參的干燥根及根莖，丹參始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品，是我國的傳統(tǒng)中藥和常用中藥。丹參素（Salvianic acid A）為丹參藥材水溶性成分，近代藥理研究表明，丹參素具有多種生理生物活性。

丹參素，又名B-（3，4-二羥基苯基）乳酸，D（+）B-（3，4-Dihydroxyphenyl）lacticacid丹參酸甲。丹參素是一種不穩(wěn)定游離酸，具有酚酸的性質(zhì)，可溶于水及常見的有機(jī)溶劑如甲醇、乙醇、丙醇、乙醚和乙酸乙酯等。丹參素具有羧基和2個酚羥基，是一種多酚酸，由于酚羥基極易被氧化的特性，丹參素以酸的形式在常溫條件下暴露于空氣中極易被氧化，穩(wěn)定性差，不易保存。

經(jīng)報道，丹參素具有多種藥理藥效：縮小心肌梗死范圍和減輕病程的作用，同時對心肌缺血/再灌注損傷具有保護(hù)作用；抑制血小板的聚集，并明顯增加血小板膜的流動性，提示其對冠心病有效；阻止鈣離子內(nèi)流，顯著抑制大鼠腹腔巨噬細(xì)胞產(chǎn)生前列腺素E2（DGE2）及血栓丸B2（TXB2）；抑制細(xì)胞內(nèi)源性膽固醇的合成，還具有抗脂質(zhì)蛋白氧化作用，降低血膽固醇，因此具有保護(hù)血管屏障，防止脂質(zhì)沉積及動脈粥樣硬化（AS）的作用。

目前，許多科研工作取得了一定的進(jìn)展，許多研究已充分證明了丹參素具有各種藥理作用。但是，目前提取較純的丹參素且能使其穩(wěn)定存在的方法還不夠完善?；谛?、成本多方面的考慮，各種方法的開發(fā)、比較、分析，總結(jié)出一種能得到較純且能穩(wěn)定保存的丹參素提取方法，仍是研究工作的重點(diǎn)之一。

1 試驗(yàn)部分

1.1 材料試劑

1.1.1 藥材

丹參藥材。

1.1.2 試劑

蒸餾水、無水乙醇、濃鹽酸、0.5mol/L NaOH溶液、0.5mol/L HCl溶液、乙腈和磷酸等。

1.2 儀器

日立L-2000高效液相色譜儀、FZ-102微型植物粉碎機(jī)、SCOUT SC6010型1/100000電子天平、GL-21M高速冷凍離心機(jī)、臺式離心機(jī)、KQ3200超聲波清洗器、電子可調(diào)電爐、電熱恒溫干燥箱、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（BUCHI R-210）、天平、臺秤、燒杯和玻璃棒等。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 丹參的前處理

將丹參藥材剪斷成1～ 2cm的小段，置于電熱恒溫干燥箱中，70～80℃烘干4～6h。取出、冷卻至室溫，用粉粹機(jī)粉碎。

1.3.2 丹參素的溶出

稱取一定量的丹參粉末，加11倍量冷水，攪拌，電爐加熱煎煮，回流11h。將丹參水煎煮溶出液用紗布過濾，除去丹參殘渣，再用臺式離心機(jī)將其離心，保留浸出液。

1.3.3 丹參素的純化

將丹參水浸出液用大孔樹脂充分吸附，乙醇醇析除去糖類物質(zhì)，收集溶液，濃縮回收乙醇，并檢測濃縮液中丹參素的變化情況。

1.3.4 丹參素?zé)岱€(wěn)定性考察

分別取出丹參水浸出液、大孔樹脂處理后的丹參素水溶液、大孔樹脂吸附并醇沉除糖濃縮后的丹參素溶液為考查樣品，用HPLC定時檢測3種樣品中丹參素的衰減、變化情況。

1.3.5 丹參素對堿的穩(wěn)定性考察

在常溫下，向丹參素水溶液中逐滴加入0.5mol/L NaOH溶液，攪拌均勻，用HPLC檢測丹參素的含量隨堿的加入量變化情況。

1.3.6 丹參素含量測定

檢測儀器為日立（L-2000）高效液相色譜儀。

2 結(jié)果與討論

試驗(yàn)所選用的丹參藥材用剪刀剪短成1～2cm的小段，取一定量的丹參藥材于電熱恒溫干燥箱（70～80℃）烘至全干，粉碎，選用丹參的混合粉末。

2.1 丹參素的溶出

準(zhǔn)確稱取丹參粉末100.0g，置于3 000mL圓底三頸燒瓶中，加11倍量冷水（1 100mL），攪拌，電爐加熱煎煮，冷凝回流11h，定時取樣，并做好對應(yīng)標(biāo)記（0、0.5、1、2、3h……），分別用臺式離心機(jī)（1萬rpm/min），離心10min，取上清液備用。

檢測不同煎煮時間的丹參浸出液樣品，記錄各樣品丹參素的峰面積，與對照品比較，利用校正因子法計算不同回流時間丹參素的溶出含量，觀察其變化趨勢，以確定丹參素提取的較適宜煎煮時間。具體情況見圖1。

圖1 丹參素溶出量隨煎煮時間變化趨勢圖

由圖1可以看出，煎煮時間越長，丹參素溶出量越大，但在9～11h時含量增加緩慢，而且提取時間過長會增加提取成本。故綜合考慮，本試驗(yàn)建議提取煎煮時間以10h為宜。

2.2 丹參素純化條件優(yōu)化

用處理好的D101大孔樹脂吸附丹參水浸出液，攪拌，充分吸附2h，同樣方法處理3次，除去除糖外的部分大分子雜質(zhì)，再用5倍量無水乙醇處理，出現(xiàn)白色絮狀沉淀，離心除去沉淀（丹參多糖），濃縮回收乙醇，經(jīng)HPLC分別檢測丹參水浸出液（A）、樹脂吸附后的丹參素溶液（B）和醇沉除糖后的濃縮液（C），結(jié)果如圖2、3、4所示。

圖2 A樣品HPLC檢測圖

圖3 B樣品HPLC檢測圖

圖4 C樣品HPLC檢測圖

對比圖2與圖3可以看出，丹參水浸出液經(jīng)大孔樹脂處理后，丹參素減少了一部分，但是其雜質(zhì)峰明顯減少，丹參素純度得到了一定的提高；而圖3與圖4比較，醇析除糖后的丹參素溶液，其丹參素純度又得到了進(jìn)一步提高。因此，用大孔樹脂處理、醇析除糖的方法可以得到較純的丹參素。通過圖2、3、4的對比可以看出，若需要進(jìn)一步提高丹參素溶液純度，可以考慮重復(fù)上述操作。

2.3 丹參素穩(wěn)定性考察

通過考察丹參素樣品在室溫見光條件下的穩(wěn)定性以及丹參素對堿的穩(wěn)定性情況，從而選擇較好的保存方法以及純化過程中應(yīng)注意的問題。

2.3.1 室溫下丹參素的穩(wěn)定性

分別取出丹參水溶出液、樹脂吸附后的丹參素溶液、樹脂吸附并醇沉除糖濃縮后的丹參素溶液各5mL于3只離心瓶中，并依次標(biāo)號為A、B、C，室溫保存。定期使用HPLC檢測A、B、C樣品中丹參素的變化情況，結(jié)果如表1所示。

表1 各樣品中丹參素隨保存時間的變化情況

從表1可以看出，在相同條件下，A、B、C樣品中丹參素含量隨保存時間加長而呈下降趨勢，丹參素在室溫見光條件下不穩(wěn)定。而3種樣品相比而言，A樣中丹參素含量隨保存時間的衰減程度不如B、C種的丹參素衰減明顯。由此可以看出，丹參素水溶液純度越高，其穩(wěn)定性越差。

2.3.2 堿對丹參素的穩(wěn)定性影響

取丹參水溶出液20mL于一小燒杯中，逐滴加入0.5mol/L NaOH溶液，攪拌均勻后用HPLC（DAD 280nm）檢測。丹參素含量隨堿量增加而降低，丹參素對堿不穩(wěn)定。

將醇析沉除糖后的丹參素溶液凍干，密閉、避光、冰箱冷藏保存。

3 結(jié)論

（1）用高溫水提、樹脂處理、醇沉可以得到一定純度的丹參素，是一種簡便易操作、成本相對較低的丹參素提取方法。

（2）通過試驗(yàn)對不同回流時間丹參素溶出量的考察表明，綜合考慮，丹參素較佳提取條件為高溫、煎煮回流10h。

（3）丹參素純化過程中用樹脂可以吸附大量的大分子雜質(zhì)，無水乙醇可以除去丹參多糖，達(dá)到進(jìn)一步純化的目的。

（4）丹參素水溶液在常溫條件下穩(wěn)定性較差，且穩(wěn)定性隨純度、濃度的提高而降低。因此，務(wù)必將純化、濃縮后的丹參素溶液迅速凍干、密封、冷凍保存。

（5）堿會對丹參素產(chǎn)生很大的影響，在純化過程中不宜采取加堿調(diào)pH以去除堿不溶性雜質(zhì)的方法。

（6）丹參素越純越不穩(wěn)定，可以考慮將其轉(zhuǎn)化為鹽，則能較穩(wěn)定保存。

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Study on the Extraction Process of Salvianic Acid A

Wang De-ming
（College of Life Sciences, Sichuan University, Sichuan Chengdu 610000）

Salvianic acid A was extracted by water decocting method, the pure salvianic acid A solution was obtained by adsorption of impurities and alcohol by macroporous resin. Then the changes of the content of salvianic acid A in different reflux time were investigated, at the same time, the factors affecting the stability of salvianic acid A were studied. The results showed that the dissolubility along with the increase of reflux time was on the rise, and increased slowly after 9 h. The leaching solution was treated with macroporous resin and alcohol, which could effectively remove impurities and increase the content of salvianic acid A. With aqueous solution under normal temperature showed certain instability, and reduce with the increase of purity and concentration. The freeze-dried in time, avoid light, low temperature preservation is more stable. Through the method of water extraction and alcohol precipitation, the reflux time, the stability and the purification method of salvianic acid A were investigated, in order to explore a simple process for extraction and purification of salvianic acid A.

Salvianic acid A; Extract; Purify; Stability

TQ461

A

2096-0387（2017）01-0010-03

王德明（1986-），男，四川雅安人，碩士，工程師，研究方向：生物醫(yī)學(xué)工程。