陳虹霞， 王成章,2*， 周 昊，2， 陶 冉， 葉建中

(1.中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院 林產(chǎn)化學(xué)工業(yè)研究所；生物質(zhì)化學(xué)利用國(guó)家工程實(shí)驗(yàn)室；國(guó)家林業(yè)局 林產(chǎn)化學(xué)工程重點(diǎn)開(kāi)放性實(shí)驗(yàn)室；江蘇省 生物質(zhì)能源與材料重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 江蘇 南京 210042；2.中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院 林業(yè)新技術(shù)研究所， 北京 100091)

漆樹(shù)木粉抗氧化活性成分的HPLC-MS分析

CHEN Hongxia

陳虹霞1， 王成章1,2*， 周 昊1，2， 陶 冉1， 葉建中1

(1.中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院 林產(chǎn)化學(xué)工業(yè)研究所；生物質(zhì)化學(xué)利用國(guó)家工程實(shí)驗(yàn)室；國(guó)家林業(yè)局 林產(chǎn)化學(xué)工程重點(diǎn)開(kāi)放性實(shí)驗(yàn)室；江蘇省 生物質(zhì)能源與材料重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 江蘇 南京 210042；2.中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院 林業(yè)新技術(shù)研究所， 北京 100091)

采用有機(jī)溶劑對(duì)漆樹(shù)木粉醇提物進(jìn)行逐級(jí)萃取分離，得到石油醚相、乙酸乙酯相、正丁醇相和水相，通過(guò)比較4個(gè)萃取相對(duì)DPPH自由基(DPPH·)、ABTS自由基(ABTS·)和羥基自由基(OH·)的清除能力，探討了萃取相的抗氧化活性。結(jié)果表明：乙酸乙酯相的萃取得率最高，為60.1%；對(duì)DPPH·、ABTS·和OH·均具有最強(qiáng)的清除作用，其半數(shù)抑制質(zhì)量濃度(IC50)值分別為19.9、 29.74和37.95 mg/L。通過(guò)HPLC-MS裂解規(guī)律分析，從乙酸乙酯相中鑒定出酚酸類和黃酮類2類化合物，其中酚酸類化合物為：對(duì)乙氧基-3-羥基苯甲酸(1)、沒(méi)食子酸(2)、 3,4-二羥基杏仁酸(3)、沒(méi)食子酸十六烷酯(4)、原兒茶酸(5)和沒(méi)食子酸乙酯(7)；黃酮類化合物為：黃顏木素(6)、 3,4′,7-三羥基二氫黃酮醇(9)、漆黃素(13)、硫黃菊素(14)、紫鉚花素(15)和3,7-二羥基黃酮醇- 4′-鼠李糖苷(16)。

漆樹(shù)；木粉；抗氧化；活性成分；液質(zhì)聯(lián)用

漆樹(shù)為漆樹(shù)科漆樹(shù)屬的一種落葉喬木[1]。漆樹(shù)不同部位都具有多種用途，富含生物堿、糖類、萜類、黃酮、單寧、漆酚和漆酶等生物活性物質(zhì)，歷史上一直將其作為傳統(tǒng)的中草藥用于胃腸炎、心臟病、關(guān)節(jié)炎、高血壓、糖尿病、中風(fēng)以及慢性疲勞等疾病的治療[2]。近年來(lái)的研究表明，漆樹(shù)木粉醇提取物(醇提物)具有顯著的抗氧化、抗腫瘤及抗炎作用[3-5]。漆樹(shù)木粉醇提物具有多種不同極性的化合物，包括脂溶性、醇溶性以及水溶性成分。溶劑逐級(jí)萃取法是天然產(chǎn)物分離和純化最常規(guī)的方法，廣泛應(yīng)用于不同極性植物提取物的初步分離。Kim等[5]采用正己烷、乙酸乙酯、正丁醇進(jìn)行逐級(jí)萃取漆樹(shù)醇提物，并從乙酸乙酯萃取物中分離得到多個(gè)黃酮類化合物。HPLC-MS技術(shù)具有高效分離、高靈敏度、高選擇性及快速分析等特點(diǎn)，被認(rèn)為是20世紀(jì)后期最重要的分析手段之一，廣泛應(yīng)用于藥物的分析與檢測(cè)[6-8]。鑒于漆樹(shù)醇提物特殊的藥理活性，因此有必要從化學(xué)組成及結(jié)構(gòu)等方面對(duì)其進(jìn)行詳細(xì)研究。本研究采用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水對(duì)漆樹(shù)木粉醇提物進(jìn)行逐級(jí)萃取分離，對(duì)各萃取組分進(jìn)行了體外清除DPPH自由基、ABTS自由基和羥基自由基的能力測(cè)定，進(jìn)一步采用HPLC-MS鑒定乙酸乙酯相中的抗氧化活性成分，為有效開(kāi)發(fā)和利用漆樹(shù)木粉中的活性物質(zhì)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 實(shí) 驗(yàn)

1.1 原料、試劑與儀器

漆樹(shù)木粉：漆樹(shù)木材2013年8月收集于湖北恩施，樹(shù)齡10年，切片自然晾干，粉碎后備用。甲醇、乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、硫酸亞鐵、鄰菲羅啉、氫氧化鈉、磷酸二氫鉀、乙二胺四乙酸二鈉(EDTA)、30%的雙氧水、鐵氰化鉀、三氯乙酸和三氯化鐵，均為分析純；2,2′-聯(lián)氮-二(3-乙基-苯并噻唑啉- 6-磺酸)二胺鹽(ABTS)、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)，購(gòu)自Sigma公司。1200 Series 6310 lon Trap型高效液相色譜-質(zhì)譜儀，Agilent Technologies公司；MULTISKAN GO型酶標(biāo)儀，Thermo fisher scientific公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 提取與分離 取漆樹(shù)木材粉末2 kg，按液料比20 ∶1(mL ∶g，下同)，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為70%的乙醇水溶液，采用減壓回流提取2次，每次1 h，過(guò)濾，合并濾液，于40 ℃下減壓蒸發(fā)除去溶劑，即得乙醇粗提物。粗提物按液料比5 ∶1～10 ∶1加入蒸餾水，攪拌溶解，加入石油醚萃取3次，分離，在40～60 ℃下減壓蒸發(fā)除去溶劑，干燥得到石油醚相；水層繼續(xù)用乙酸乙酯萃取3次，分離，在40～60 ℃下減壓蒸發(fā)除去溶劑，干燥得到乙酸乙酯相；水層繼續(xù)用正丁醇萃取3次，分離，在40～60 ℃下減壓蒸發(fā)除去溶劑，干燥得到正丁醇相和水相。

1.2.2 高效液相色譜-質(zhì)譜分析 色譜柱為C18Gold AQ反相柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動(dòng)相為甲醇(A)，0.5%醋酸水溶液(B)。梯度洗脫：0～20 min 70%B，20～35 min 30%B，35～50 min 10%B，50～55 min 70%B。紫外檢測(cè)器，波長(zhǎng)280 nm，流速為0.5 mL/min，進(jìn)樣量10 μL。電離方式：電噴霧(ESI)負(fù)離子模式，干燥器流速12.00 L/min，干燥器溫度325 ℃，霧化器壓力241.325 kPa，分子質(zhì)量掃描范圍100～1 000 u。

1.2.3 對(duì)DPPH自由基清除能力的測(cè)定 取0.15 mmol/L的DPPH乙醇溶液150 μL，加入50 μL不同濃度的樣品溶液，混合均勻后在黑暗處室溫下反應(yīng)30 min后，在517 nm波長(zhǎng)下測(cè)吸光度，每個(gè)樣品平行3次，取平均值[9]。樣品液對(duì)DPPH自由基(DPPH·)清除率(yDPPH·)計(jì)算公式見(jiàn)式(1)：

(1)

式中：Ai—待測(cè)樣品與DPPH在乙醇溶劑中的吸光值；A0—待測(cè)樣品在乙醇溶劑中的吸光值；A1—DPPH乙醇溶液的吸光值。

1.2.4 對(duì)ABTS自由基清除能力的測(cè)定 儲(chǔ)備液的制備[10]：將7.4 mmol/L的ABTS溶液與2.6 mmol/L的過(guò)硫酸鉀溶液等量混合，在黑暗處常溫靜置反應(yīng)15 h，然后取1 mL溶液用甲醇稀釋，得到溶液在734 nm處的吸光度為0.74。加入150 μL的上述儲(chǔ)備液配制不同濃度的樣品溶液50 μL，在96孔板中，放置4 min后，在734 nm波長(zhǎng)下測(cè)吸光度，每個(gè)樣品平行3次，取平均值。樣品液對(duì)ABTS自由基(ABTS·)清除率(yABTS·)計(jì)算見(jiàn)式(2)：

(2)

1.2.5 對(duì)羥基自由基清除能力的測(cè)定 將不同溶劑萃取物配制成不同濃度的樣品溶液。在10 mL的試管中依次加入60 μL的5 mmol/L鄰菲羅啉， 40 μL的pH值7.4的磷酸緩沖溶液， 60 μL的5 mmol/L硫酸亞鐵， 60 μL的15 mmol/L的EDTA， 60 μL的蒸餾水，100 μL的樣品溶液和80 μL的0.1%H2O2,搖勻，37 ℃水浴加熱60 min后取出，于536 nm處測(cè)其吸光度[11]。對(duì)羥基自由基(OH·)清除率(yOH·)的計(jì)算見(jiàn)式(3)：

(3)

式中：A″i—加樣品的吸光值；A″0—不加樣品的吸光值；A″1—不加樣品和H2O2的吸光值。

1.2.6 統(tǒng)計(jì)分析 采用origin 7.5軟件進(jìn)行繪圖及計(jì)算。

2 結(jié)果與討論

2.1 不同溶劑萃取相的抗氧化能力

由表1可知，通過(guò)不同有機(jī)溶劑萃取，乙酸乙酯相的萃取得率最高，其次是水相，正丁醇相的萃取得率最低。各萃取相對(duì)3種自基由的清除效果由強(qiáng)到弱依次為：乙酸乙酯相>正丁醇相>石油醚相>水相，其中乙酸乙酯相對(duì)DPPH·、 ABTS·和OH·的半數(shù)抑制質(zhì)量濃度(IC50)值分別為19.9、 29.74和37.95 mg/L。說(shuō)明漆樹(shù)木粉乙酸乙酯相是具有抗氧化活性成分的主要部位，因此采用HPLC-MS對(duì)乙酸乙酯相進(jìn)行化學(xué)成分的鑒定。

表1 不同溶劑萃取相的抗氧化能力Table 1 Antioxidant capacity of different fractions of wood powder

2.2 HPLC-MS鑒定漆樹(shù)木粉乙酸乙酯相中的化合物

圖1 乙酸乙酯相的HPLC-MS總離子流圖Fig.1 TIC of HPLC-MS of ethyl acetate fraction

漆樹(shù)木粉乙酸乙酯相經(jīng)過(guò)0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾后進(jìn)入HPLC-MS進(jìn)行分離檢測(cè)，總離子流圖如圖1所示。選用G18 Gold AQ極性封端C18色譜柱，采用不同比例的甲醇和含0.5%的醋酸水溶液作為流動(dòng)相，在該條件下乙酸乙酯相的化合物得到很好的分離和保留。根據(jù)圖1中主要色譜峰的保留時(shí)間，以及一級(jí)質(zhì)譜和二級(jí)質(zhì)譜的特征離子峰、分子質(zhì)量，結(jié)合參考文獻(xiàn)[12-20]推測(cè)化合物如表2所示。從乙酸乙酯相中初步表征得到12種化合物，其中6種為酚酸類化合物，另外6種為黃酮類化合物。此外，還有4種化合物無(wú)法辨別。

在負(fù)離子模式下，化合物1的[M-H]-峰為m/z181，推斷它的分子式可能為C9H10O4，其二級(jí)質(zhì)譜碎片離子m/z136和108通過(guò)丟失OCH2CH3(M-H-45u)和CO(M-H-45u-28u)獲得，與文獻(xiàn)[12]進(jìn)行比對(duì)，推測(cè)該化合物為對(duì)乙氧基-3-羥基苯甲酸。

化合物2的[M-H]-峰為m/z169，推斷它的分子式可能為C7H6O5，其二級(jí)質(zhì)譜碎片離子為m/z125通過(guò)丟失CO2(M-H-44u)獲得，該化合物的相關(guān)信息與文獻(xiàn)[13]相比對(duì)，判定該化合物為沒(méi)食子酸。

化合物3的[M-H]-峰為m/z183，推斷它的分子式可能為C8H8O5，其二級(jí)質(zhì)譜主要的碎片離子為m/z167和m/z123通過(guò)丟失O(M-H-16u)和CO2(M-H-16u- 44u)獲得，該化合物的相關(guān)信息與文獻(xiàn)[14]相比對(duì)，推斷該化合物可能為3,4-二羥基杏仁酸。

表2 乙酸乙酯相的HPLC-MS定性分析結(jié)果Table 2 Analysis of ethyl acetate fraction by HPLC-MS

化合物4的[M-H]-峰為m/z393，推測(cè)可能的分子式為C23H38O5。其二級(jí)質(zhì)譜主要碎片離子m/z316、 241、169和125通過(guò)丟失C7H4O4(M-H-152u)、C16H33(M-H-224u)和CO2(M-H-224u-44u)獲得。其中主要的碎片離子與沒(méi)食子酸相似，而其中m/z241的碎片離子可能為長(zhǎng)鏈烷醇，該化合物的相關(guān)信息與文獻(xiàn)[15]相比對(duì)，推斷該化合物為沒(méi)食子酸十六烷酯。

化合物5的[M-H]-峰為m/z153，推測(cè)可能的分子式為C7H6O4。二級(jí)質(zhì)譜主要碎片離子m/z109由丟失CO2(M-H-44u)獲得，碎片特征與文獻(xiàn)報(bào)道[8]相近，故推斷該化合物為原兒茶酸，即3,4-二羥基苯甲酸。

化合物6的[M-H]-離子峰為m/z287，推測(cè)可能的分子式為C15H12O6。二級(jí)質(zhì)譜主要碎片離子m/z269、197和153由丟失H2O(M-H-18u)、C6H2O(M-H-90u)和C7H2O4(M-H-134u)獲得。脫水可能是3位上的羥基進(jìn)行脫水反應(yīng)，碎片離子m/z197和丟失碎片m/z90可能是黃酮發(fā)生逆Dields-Alder(RDA)裂解，C環(huán)0位和4位發(fā)生斷裂產(chǎn)生的碎片離子，碎片離子m/z153和丟失的碎片m/z134可能是C環(huán)1位和3位發(fā)生的RDA裂解，這些數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道[16]的數(shù)據(jù)相似，故推測(cè)該化合物為黃顏木素。

化合物7的[M-H]-離子峰為m/z197，推測(cè)該化合物的分子式為C9H10O5。二級(jí)質(zhì)譜主要碎片離子m/z169和125由丟失C2H4(M-H-28u)和CO2(M-H-28u-44u)獲得。該化合物中的主要碎片離子與沒(méi)食子酸相似，而m/z169的碎片離子是由丟失C2H4(28u)中性分子獲得。這些碎片特征與文獻(xiàn)報(bào)道[17]相近，推斷該化合物為沒(méi)食子酸乙酯。

化合物9的[M-H]-離子峰為m/z271，推測(cè)該化合物的分子式可能為C15H12O5。二級(jí)質(zhì)譜主要碎片離子m/z243、227和179由丟失CO(M-H-28u)、CO2(M-H-44u)和C6H4O(M-H-92u)獲得。CO和CO2為C環(huán)4位上的脫羰基引起的，而碎片離子m/z179和丟失的碎片m/z92 可能是脫去B環(huán)而發(fā)生的裂解，將這些信息與文獻(xiàn)[18]進(jìn)行比對(duì)，推測(cè)該化合物可能為3,4′,7-三羥基二氫黃酮醇。

化合物13的[M-H]-離子峰為m/z285，推測(cè)該化合物的分子式為C15H10O6。二級(jí)質(zhì)譜主要碎片離子m/z257、163和135由丟失CO(M-H-28u)、C7H6O2(M-H-122u)和C8H6O3(M-H-150u)獲得。CO可能是C環(huán)上4位的脫羰基引起的，碎片離子m/z135和丟失碎片m/z150可能是黃酮發(fā)生RDA裂解，由C環(huán)1位和3位斷裂產(chǎn)生的碎片離子，碎片離子m/z163和丟失碎片m/z122，可能是C環(huán)1位和2位發(fā)生的RDA裂解，將這些信息與文獻(xiàn)[18]進(jìn)行比對(duì)，推斷該化合物為漆黃素。

化合物14的[M-H]-離子峰為m/z269，推測(cè)該化合物的分子式為C15H10O5。二級(jí)質(zhì)譜主要碎片離子m/z241、225和133由丟失CO(M-H-28u)、CO2(M-H-44u)和C7H4O3(M-H-136u)獲得。CO可能是C環(huán)4位的脫羰基引起的，CO2可能是C環(huán)的脫羰基和脫醚基引起的，碎片離子m/z133和丟失碎片子m/z136 可能是C環(huán)1位和2位發(fā)生的RDA裂解，將這些信息與文獻(xiàn)[19]報(bào)道漆樹(shù)中相關(guān)活性物質(zhì)進(jìn)行比對(duì)，推斷該化合物為硫黃菊素。

化合物15的[M-H]-離子峰為m/z271，推測(cè)該化合物的分子式為C15H12O5。二級(jí)質(zhì)譜主要碎片離子m/z253、151和135由丟失H2O(M-H-18u)、C7H4O2(M-H-120u)和C8H8O2(M-H-136u)獲得。H2O可能是B環(huán)上3位和4位上的羥基脫水引起的，碎片離子m/z151和丟失碎片m/z120 可能是C環(huán)0位和3位發(fā)生的RDA裂解，碎片離子m/z135和丟失碎片m/z136 可能是C環(huán)1位和3位發(fā)生的RDA裂解，將這些信息與文獻(xiàn)[20]報(bào)道漆樹(shù)中相關(guān)活性物質(zhì)進(jìn)行比對(duì)，推斷該化合物為紫鉚花素。

化合物16的[M-H]-離子峰為m/z417，推測(cè)該化合物的分子式為C21H22O9。二級(jí)質(zhì)譜圖主要碎片離子m/z399、253和209由丟失H2O(M-H-18u)、C6H10O4(M-H-18u-146u)和CO2(M-H-18u-146u-44u)獲得。H2O可能是A環(huán)上的羥基脫水引起的，碎片離子m/z255和丟失碎片m/z146 可能是脫糖基引起的，碎片離子m/z209和丟失碎片m/z44 可能是C環(huán)脫掉CO2，將這些信息與文獻(xiàn)[18]進(jìn)行比對(duì)，并與化合物9(3,4′,7-三羥基二氫黃酮醇)進(jìn)行對(duì)比，推測(cè)該化合物可能為3,7-二羥基黃酮醇- 4′-鼠李糖苷?；衔?～7、9、13～16的結(jié)構(gòu)如圖2所示。

圖2 化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)Fig.2 The structures of the Compounds

2.3 討論

DPPH·、 ABTS·和OH·清除能力是化合物體外抗氧化能力評(píng)價(jià)的主要反應(yīng)體系。通過(guò)表1可知，漆樹(shù)木粉乙酸乙酯相顯示出最強(qiáng)的自由基清除能力，前期的研究表明[21]，漆樹(shù)木粉乙酸乙酯相含有大量的多酚化合物(53.43%)，說(shuō)明乙酸乙酯相的抗氧化能力與其含有多酚化合物有很大的相關(guān)性。通過(guò)HPLC-MS的分子離子峰、一級(jí)質(zhì)譜、二級(jí)質(zhì)譜以及參考相關(guān)文獻(xiàn)從漆樹(shù)木粉乙酸乙酯相中鑒定出的活性物質(zhì)分為黃酮類和酚酸類。

黃酮類化合物是漆樹(shù)中的主要活性物質(zhì)。從漆樹(shù)中已經(jīng)分離鑒定的黃酮類化合物有黃顏木素、3,4′,7-三羥基二氫黃酮醇、漆黃素、硫黃菊素、紫鉚花素、紫鉚因、花旗松素、二氫山柰酚和槲皮素等[20]。本研究鑒定出了漆樹(shù)中含有的6種黃酮類化合物，分別為：黃顏木素、3,4′,7-三羥基二氫黃酮醇、漆黃素、硫黃菊素、紫鉚花素和3,7-二羥基黃酮醇- 4′-鼠李糖苷。通過(guò)HPLC-MS分析可知中國(guó)漆樹(shù)中含有3,7-二羥基黃酮醇- 4′-鼠李糖苷，但其糖苷鍵的位置還有待于進(jìn)一步證實(shí)。黃酮化合物具有C6-C3-C6結(jié)構(gòu)，由于含有多酚羥基，使其有較強(qiáng)的生理活性，漆黃素具有抗氧化、抗癌、抗過(guò)敏、抗炎、治療糖尿病和神經(jīng)保護(hù)等作用[22]，紫鉚花素具有增白、抑制著床和抑制DNA損傷氧化作用[23]，硫黃菊素具有減少氧化壓力、血小板聚集和突變發(fā)生作用[24]。黃酮類化合物的抗氧化活性強(qiáng)弱與酚羥基的數(shù)量、有無(wú)糖苷鍵、C2與C3位有無(wú)雙鍵以及C3′與C4′有無(wú)鄰二羥基有關(guān)[25]。因此可以初步推斷漆黃素、硫黃菊素和紫鉚花素對(duì)漆樹(shù)木粉乙酸乙酯相的抗氧化活性貢獻(xiàn)較大。

從漆樹(shù)木粉乙酸乙酯相鑒定出6種酚酸類化合物分別為：對(duì)乙氧基-3-羥基苯甲酸、沒(méi)食子酸、3,4-二羥基杏仁酸、沒(méi)食子酸十六烷酯、原兒茶酸和沒(méi)食子酸乙酯。其中韓國(guó)漆樹(shù)中檢測(cè)到?jīng)]食子酸和原兒茶酸，HPLC-MS分析得到中國(guó)漆樹(shù)除以上2種成分外，還檢測(cè)到了對(duì)乙氧基-3-羥基苯甲酸、3,4-二羥基杏仁酸、沒(méi)食子酸十六烷酯和沒(méi)食子酸乙酯。酚酸類化合物的抗氧化活性與酚羥基的位置、數(shù)量及取代基團(tuán)相關(guān)，沒(méi)食子酸和原兒茶酸是重要的酚酸類物質(zhì)，其抗氧化活性已被大量證實(shí)[26]，因此，可以初步推斷3,4-二羥基杏仁酸、沒(méi)食子酸乙酯對(duì)漆樹(shù)木粉乙酸乙酯相的抗氧化活性貢獻(xiàn)也較大。

3 結(jié) 論

3.1 采用不同有機(jī)溶劑逐級(jí)萃取漆樹(shù)乙醇提取物，得到石油醚相、乙酸乙酯相、正丁醇相和水相，通過(guò)測(cè)定體外清除DPPH自由基(DPPH·)、 ABTS自由基(ABTS·)和羥基自由基(OH·)的能力比較了4個(gè)萃取相的抗氧化活性。結(jié)果表明：乙酸乙酯相的萃取得率最高，為60.1%，對(duì)DPPH·、 ABTS·和·OH具有最強(qiáng)的清除作用，其半數(shù)抑制質(zhì)量濃度(IC50)值分別為19.9、 29.74和37.95 mg/L。

3.2 通過(guò)HPLC-MS分析漆樹(shù)木粉乙酸乙酯相中的主要化學(xué)成分，從質(zhì)譜圖中共識(shí)別16種分子質(zhì)量的化合物，根據(jù)化合物的一級(jí)質(zhì)譜和二級(jí)質(zhì)譜的特征離子峰，總共鑒定出12種化合物，其中6種為酚酸類化合物，分別為對(duì)乙氧基-3-羥基苯甲酸(1)、沒(méi)食子酸(2)、 3,4- 二羥基杏仁酸(3)、沒(méi)食子酸十六烷酯(4)、原兒茶酸(5)、沒(méi)食子酸乙酯(7)；另外6種為黃酮類化合物，分別為黃顏木素(6)、 3,4′,7-三羥基二氫黃酮醇(9)、漆黃素(13)、硫黃菊素(14)、紫鉚花素(15)和3,7-二羥基黃酮醇- 4′-鼠李糖苷(16)。

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HPLC-MS Analysis of Antioxidant Components from
RhusvernicifluaStokes Wood Powder

CHEN Hongxia1, WANG Chengzhang1,2, ZHOU Hao1,2, TAO Ran1, YE Jianzhong1

(1.Institute of Chemical Industry of Forest Products,CAF;National Engineering Lab.for Biomass Chemical Utilization;Key and Open Lab.of Forest Chemical Engineering,SFA;Key Lab.of Biomass Energy and Material,Jiangsu Province,
Nanjing 210042， China; 2.Research Institute of Forestry New Technology,CAF, Beijing 100091，China)

The ethanol extract fromRhusvernicifluaStokes wood powder was partitioned with different polarity solvents to obtain petroleum ether fraction, ethyl acetate fraction,n-butylalcohol fraction and water fraction. The DPPH·, ABTS· and OH· scavenging activities of the four fractions were evaluated. The results showed that the extraction yield of ethyl acetate was the highest (60.1%) and its scavenging activities of DPPH·, ABTS· and OH· were the strangest with the IC50of 19.9, 29.74 and 37.95 mg/L, respectively. Twelve compounds in ethyl acetate fraction were identified by HPLC-MS, including six phenolic acids, i.e., ethoxy-3-hydroxy benzoic acid(1), gallic acid(2), 3,4-dihydroxy almond acid(3), gallic acid cetyl ester(4), protocatechuic acid(5) and ethyl gallate(7) and six flavonoids, i.e., fustin(6), 3,4′,7-trihydroxy-flavanonol(9), fisetin(13), sulfuretin(14), butin(15) and 3,7-dihydroxy flavanone- 4′-rhamnose(16).

RhusvernicifluaStokes; wood powder; antioxidant; active component; HPLC-MS

10.3969/j.issn.0253-2417.2017.01.012

2016- 05- 05

國(guó)家林業(yè)局948技術(shù)引進(jìn)項(xiàng)目(2016-4-07)；國(guó)家國(guó)際科技合作專項(xiàng)(2014DFR31300)

陳虹霞(1983— )，女，浙江舟山人，助理研究員，博士，主要從事天然產(chǎn)物化學(xué)的研究；E-mail：shirenyahui@126.com

*通訊作者：王成章，研究員，博士，博士生導(dǎo)師，主要從事天然產(chǎn)物研究與利用方面的工作；E-mail:wangczlhs@sina.com。

TQ35

A

0253-2417(2017)01- 0094- 07

陳虹霞，王成章，周昊，等.漆樹(shù)木粉抗氧化活性成分的HPLC-MS分析[J].林產(chǎn)化學(xué)與工業(yè)，2017，37(1)：94-100.