邢亞楠 阿來?賽坎 田樹革

摘要：目的 分析比較不同產(chǎn)地杜仲葉的紅外光譜，建立杜仲葉的薄層色譜鑒別方法，為其質(zhì)量控制提供依據(jù)。方法 利用紅外光譜、二階導(dǎo)數(shù)譜圖對(duì)6種不同產(chǎn)地杜仲葉進(jìn)行特征峰的指認(rèn)和對(duì)比分析，并進(jìn)行聚類分析；通過薄層色譜對(duì)杜仲葉中活性成分進(jìn)行分離和鑒別。結(jié)果 通過特征峰峰形、峰位與峰強(qiáng)的對(duì)比，發(fā)現(xiàn)不同產(chǎn)地杜仲葉之間存在差異，聚類結(jié)果顯示可將6個(gè)產(chǎn)地杜仲葉分為1類；薄層色譜結(jié)果顯示6批樣品主斑點(diǎn)一致，但不同產(chǎn)地的樣品間微量成分斑點(diǎn)存在差異。結(jié)論 2種方法直觀、簡(jiǎn)單、方便、快速，為杜仲葉的分離鑒別和質(zhì)量控制提供了依據(jù)。

關(guān)鍵詞：杜仲葉；紅外光譜；二階導(dǎo)數(shù)譜圖；聚類分析；薄層色譜

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2017.02.022

中圖分類號(hào)：R284.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1005-5304（2017）02-0088-03

杜仲葉是杜仲科杜仲屬植物杜仲Eucommia ulmoides Oliv.的干燥葉[1]。杜仲葉與皮的化學(xué)成分基本一致[2]，且具有同等功效，在醫(yī)藥、保健、食品方面發(fā)展前景廣闊。杜仲葉富含綠原酸、槲皮素、山柰酚、桃葉珊瑚苷、京尼平甘酸等活性物質(zhì)及多種氨基酸、維生素[3]，有良好的降壓、利尿、保肝、抗腫瘤、抗菌、抗衰老和中樞鎮(zhèn)靜等多種藥理作用。本研究采用傅里葉變換紅外光譜[4]、二階導(dǎo)數(shù)紅外光譜、聚類分析[5-6]與薄層色譜法[7]對(duì)不同產(chǎn)地的6種杜仲葉進(jìn)行鑒別研究，為杜仲葉的鑒定和質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

TENSOR27傅里葉變換近紅外光譜儀（德國Bruker 公司）DTGS檢測(cè)器，光譜掃面范圍4000～400 cm-1，光譜分辨率2 cm-1，累計(jì)掃描次數(shù)32次。769YP-15A粉末壓片機(jī)（天津市科器高新技術(shù)公司）；70-1型遠(yuǎn)紅外干燥箱（上海申光儀器儀表有限公司）；薄層色譜點(diǎn)樣器（Linomat5 CAMAG），薄層色譜點(diǎn)樣針（CAMAG），薄層色譜照相儀（REPROSTAR 3），薄層色譜掃描儀（TLC SANNER3 CAMAG）

杜仲葉樣品采自5個(gè)不同地區(qū)（S1為2014年摘于新疆烏魯木齊，S2為2015年摘于新疆烏魯木齊，S3為陜西銅州，S4為湖北襄陽，S5為湖南張家界，S6為云南西雙版納），經(jīng)新疆醫(yī)科大學(xué)中藥學(xué)院中藥鑒定教研室徐海燕副教授鑒定為杜仲科植物杜仲Eucommia ulmoides Oliv.的葉。

溴化鉀（北京化工，優(yōu)級(jí)純），綠原酸對(duì)照品（批號(hào)110753-200413，中國食品藥品檢定研究院），槲皮素對(duì)照品（批號(hào)YA0806YB13，上海源葉生物科技有限公司），山柰酚對(duì)照品（批號(hào)MUST-12102503，成都曼思特生物科技有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 紅外光譜鑒別

2.1.1 樣品處理 樣品去除雜質(zhì)，分別取20 g粉碎后過200目篩，在60 ℃紅外干燥箱中干燥6 h，取適量樣品與溴化鉀混合均勻研磨，壓片。

2.1.2 紅外光譜分析 將樣品壓片放入紅外光譜儀中測(cè)定，掃描時(shí)扣除H2O和CO2的干擾，每個(gè)樣品壓片3次，重復(fù)3次測(cè)定，取平均值作為單個(gè)樣品光譜數(shù)據(jù)。杜仲葉樣品紅外光譜見圖1、圖2。在4000～1300 cm-1范圍內(nèi)有幾個(gè)明顯的官能區(qū)特征峰，在3374 cm-1出現(xiàn)寬峰為締和的O-H伸縮振動(dòng)提供，2935、1632、1428 cm-1是植物蛋白酰胺的Ⅰ帶和Ⅲ帶峰，在1300～400 cm-1波數(shù)范圍內(nèi)有許多明顯的指紋區(qū)特征峰，1069 cm-1處出現(xiàn)寬強(qiáng)峰為開鏈酸酐提供的C-O伸縮振動(dòng)峰，795、589 cm-1是糖類物質(zhì)糖環(huán)的彎曲振動(dòng)峰。分析表明，杜仲葉的紅外光譜圖可以提供豐富的化學(xué)組成信息，其中采自陜西銅州（S3）湖南張家界（S5）在2935 cm-1處吸收峰不明顯。其余樣品的吸收峰位置基本一致，為更好地區(qū)別與比較，需要通過二階導(dǎo)數(shù)紅外光譜圖對(duì)特征區(qū)進(jìn)一步分析。

2.1.3 紅外光譜二階導(dǎo)數(shù)分析 采用Origin7.5軟件對(duì)所測(cè)得原始數(shù)據(jù)光譜進(jìn)行基線校正，標(biāo)記峰位置，二階導(dǎo)數(shù)求導(dǎo)處理。杜仲葉S1的二階導(dǎo)數(shù)圖見圖3、圖4。不同產(chǎn)地杜仲葉樣品二階導(dǎo)數(shù)圖各吸收峰詳細(xì)對(duì)比見圖5。

3 討論

本研究利用紅外光譜、二階導(dǎo)數(shù)譜圖結(jié)合聚類分析對(duì)6個(gè)不同產(chǎn)地的杜仲葉進(jìn)行分析，通過比較不同產(chǎn)地杜仲葉的部分吸收峰峰形、峰位置和峰強(qiáng)，對(duì)其特征進(jìn)行研究。紅外光譜數(shù)據(jù)顯示，6個(gè)不同產(chǎn)地的杜仲葉紅外光譜和二階導(dǎo)數(shù)的結(jié)果相一致，說明不同產(chǎn)地的杜仲葉在成分類型上基本相似；通過二階求導(dǎo)處理可以使這些差異明顯化，推斷是由于化學(xué)成分的類型和含量的差異所致，可根據(jù)其譜圖特征進(jìn)行有效的區(qū)分。在1800～500 cm-1特征波段，采用主成分壓縮，篩選主成分再進(jìn)行聚類分析，將6種不同產(chǎn)地杜仲葉歸為一類。在薄層色譜鑒別中，通過已知主要成分綠原酸對(duì)照品與杜仲葉樣品的比較，發(fā)現(xiàn)樣品斑點(diǎn)與對(duì)照品斑點(diǎn)位置一致且清晰明顯。2種手段均在不同程度上實(shí)現(xiàn)了對(duì)杜仲葉中有效成分的鑒別及特征的分析，為其質(zhì)量控制提供了依據(jù)。

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