楊 杰， 潘孝青， 宋丹丹， 秦 楓， 邵 樂， 李 健， 張 霞， 潘翠玲

(1.江蘇省農(nóng)業(yè)科學院畜牧研究所，江蘇南京 210014；2.南京農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院，江蘇南京 210095)

無機硒對青年獺兔生產(chǎn)性能及抗氧化性能的影響

楊 杰1， 潘孝青1， 宋丹丹2， 秦 楓1， 邵 樂1， 李 健1， 張 霞1， 潘翠玲2

(1.江蘇省農(nóng)業(yè)科學院畜牧研究所，江蘇南京 210014；2.南京農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院，江蘇南京 210095)

為了探討硒對獺兔生產(chǎn)性能及血漿抗氧化能力的影響，將90只初始體質(zhì)量為(690±7.0) g的青年獺兔分為C、SS和D組3組，每組30只(雌雄各半)。C組直接飼喂基礎(chǔ)日糧，SS組和D組日糧添加亞硒酸鈉，經(jīng)測定C組、SS組和D組日糧硒元素含量分別為0.20、0.36、0.75 mg/kg，其他營養(yǎng)指標3組均一致，飼養(yǎng)30 d。試驗結(jié)果表明：D組試驗兔采食0.72 mg/kg硒水平日糧后1周開始出現(xiàn)零星死亡，直至3周后D組試驗兔全部死亡。與C組相比，SS組獺兔日增質(zhì)量顯著降低50.5%(P<0.01)，腹瀉率提高16.7百分點，死亡率提高13.4百分點；SS組血液中硒含量與C組相比提高42.96%(P<0.05)；SS組血漿中SOD活性、T-AOC總抗氧化能力與C組相比分別降低19.77%與30.35%(P<0.01)，MDA含量與C組相比提高90.70%(P<0.01)?？梢姡萌占Z中無機硒添加量安全范圍窄，過量添加會引起獺兔生產(chǎn)性能及抗氧化能力顯著降低甚至死亡。

硒；兔；生產(chǎn)性能；抗氧化能力；安全范圍

硒是人和動物體內(nèi)必需礦物質(zhì)微量元素，人和動物對硒的需要量和耐受量是不同的[1]。動物機體硒缺乏表現(xiàn)為生長停滯、肌肉萎縮、心肌變性并伴有微血管受損、肝壞死，幼畜可出現(xiàn)白肌??；硒缺乏還可導致畜禽繁殖機能下降，生產(chǎn)性能降低。但是過量的硒會導致動物出現(xiàn)中毒癥狀，豬硒中毒表現(xiàn)為生長遲緩、脫毛、蹄甲變形、運動失調(diào)、呼吸困難等。所以添加適量的硒對硒發(fā)揮其生物學作用是很重要的。

機體對硒的攝入量因不同地區(qū)(富硒地區(qū)和缺硒地區(qū))、不同品種以及不同的生長階段而有所不同。1980年美國國家科學院制定了人的第一個硒的膳食標準，該膳食標準建議成人的硒的日膳食攝入量約50～200 μg[2]。在2014年6月，中國營養(yǎng)學會把硒的日營養(yǎng)攝入最低量從 50 μg/d上調(diào)到60 μg/d。對于生長豬的日糧硒的需要量，我國推薦量為0.28～0.30 mg/kg，1998年美國NRC標準則公布為0.15～0.30 mg/kg[3]。畜禽中硒日糧攝入推薦標準(NRC，1998)為：火雞0.2 mg/kg，肉雞0.1～0.15 mg/kg，豬0.1 mg/kg。1977年美國NRC標準顯示生長肥育兔硒的需要量是0 mg/kg，泌乳母兔需要量為0.08 mg/kg[4]；李克廣等研究表明，日糧中添加硒可顯著促進獺兔繁殖性能提高，最佳劑量為 0.18 mg/kg，但硒添加量差異較大，不能確定獺兔生產(chǎn)中適宜添加量[5]。

本研究是基于課題組在家兔規(guī)模養(yǎng)殖過程中發(fā)現(xiàn)的一個實際問題而展開的，目前國內(nèi)外還未針對皮毛動物(獺兔、貂等)提出具體含硒日糧標準，在獺兔日糧加工過程中，為獲得較好皮張品相，往往通過適度過量添加無機硒來增加獺兔皮張品質(zhì)；但因硒的安全添加量范圍極窄，經(jīng)常引發(fā)硒中毒現(xiàn)象，導致獺兔出現(xiàn)生長遲緩和大面積的被毛稀疏甚至死亡。針對這一現(xiàn)狀，本研究通過獺兔生產(chǎn)性能的變化以及兔體抗氧化能力等指標來探討過量硒對獺兔生長的影響，旨在為家兔飼料中硒的安全添加提供一定參考。

1 材料與方法

1.1 試驗動物來源及分組

試驗所用獺兔來源于江蘇省農(nóng)業(yè)科學院六合動物科學基地試驗兔場，將90只初始體質(zhì)量為(690±7.0)g的獺兔分為C、SS和D組3組，每組30只(雌雄各半)。C組直接飼喂基礎(chǔ)日糧，不添加亞硒酸鈉，SS組和D組日糧添加亞硒酸鈉，經(jīng)測定，C組、SS組和D組日糧硒元素含量分別為0.20、0.36、0.75 mg/kg(C組未添加亞硒酸鈉，測出的硒元素來源于其他日糧組分)，其他營養(yǎng)指標3組均一致，飼養(yǎng)30 d。

1.2 主要試劑及器材

主要試劑：超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒、總抗氧化物能力(T-AOC)試劑盒、丙二醛(MDA)試劑盒均購自于南京建成生物有限公司。

主要器材：試管、微量移液器、漩渦混勻器、恒溫水浴鍋、可見分光光度計等。

1.3 生產(chǎn)性能記錄及樣品采集與處理

生產(chǎn)性能：預飼期7 d，正試期30 d，在試驗開始和結(jié)束時以個體為單位對所有試驗兔進行空腹稱質(zhì)量；記錄采食量以及腹瀉、死亡情況。正試期30 d結(jié)束即采樣，每組選擇10只體質(zhì)量接近、公母各半的獺兔待收集樣本。兔全血獲?。赫嚻?0 d結(jié)束即采樣，耳緣靜脈采血。準確吸取一定量兔全血置于聚四氟乙烯消化罐中，加入1 ∶1 HNO33 mL，旋緊消化罐蓋進行微波消解，冷卻后再加入1 mL H2O2再次微波消解。用0.2% HNO3定容消化液至10 mL，同時做試劑空白。兔血漿獲?。赫嚻?0 d結(jié)束即采樣，采血至真空肝素鈉管后 2 500 r/min 低速離心10 min，取上清分離血漿待測。

1.4 全血及皮膚組織中硒含量測定

準確移取消化液1 mL，用0.2%HNO3逐級將其稀釋，使硒的濃度在測定線性范圍內(nèi)。用0.2% HNO3逐級稀釋 1 000 μg/mL 的硒標準溶液至0.100 0 μg/mL作為硒標準工作液，儀器自動稀釋配制濃度為20、40、60、80 ng/mL的標準系列。

1.5 氧化性能檢測指標及方法

采用相關(guān)試劑盒檢測獺兔血漿中SOD活性和MDA、T-AOC 含量。

1.6 數(shù)據(jù)處理

生產(chǎn)性能及抗氧化性能數(shù)據(jù)經(jīng)過SPSS 16.0統(tǒng)計軟件采用單因素方差顯著性檢驗分析，數(shù)據(jù)均以“平均數(shù)±標準誤”表示。差異判斷標準為：P<0.05表示差異顯著；P<0.01 表示差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 硒對獺兔生產(chǎn)性能的影響

從表1可知，當日糧硒水平為0.36 mg/kg時(SS組)，與C組相比(日糧硒水平為0.2 mg/kg)，日增質(zhì)量降低50.5%(P<0.01)，腹瀉率提高16.7百分點，死亡率提高13.4百分點。

表1 硒對獺兔生產(chǎn)性能的影響

注：腹瀉率=∑(腹瀉兔只數(shù)×兔腹瀉天數(shù))/(試驗兔只數(shù)×試驗天數(shù))×100%；同列標注不同小寫、大寫字母分別表示差異顯著(P<0.05)、極顯著(P<0.01)；N：表示試驗結(jié)束時試驗兔全部死亡。

2.2 硒在獺兔血液及皮膚組織中的沉積變化

從表2可知，當日糧硒水平為0.36 mg/kg時(SS組)，與C組相比(日糧硒水平為0.2 mg/kg)，血液中硒含量顯著提高42.96%(P<0.05)，表明SS組日糧硒水平已明顯高于C組，此結(jié)果與表1中的SS組獺兔生產(chǎn)性能相對應，表明硒元素已在SS組獺兔血液中大量累積并造成一定程度中毒。

表2 獺兔全血和皮膚中的硒含量

2.3 硒對兔血漿SOD活力的影響

如圖1所示，SS組獺兔血漿中SOD活性降低了19.77%(P<0.01)。

2.4 硒對兔血漿T-AOC的影響

如圖2所示，SS組獺兔血漿中T-AOC降低了30.35%(P<0.01)。

2.5 硒對兔血漿MDA含量的影響

如圖3所示，SS組獺兔血漿組織中MDA含量升高了90.7%(P<0.01)。

3 小結(jié)與討論

3.1 硒對兔生產(chǎn)性能的影響

馮婧等研究發(fā)現(xiàn)，當?shù)傍嗭暳现形教砑拥?.08～0.16 mg/kg時，蛋鴨生長處于高峰平臺，但當硒添加水平為0.36～0.66 mg/kg時，蛋鴨的生長性能有降低的趨勢[6]。高宏偉等在研究中發(fā)現(xiàn)，在獺兔日糧中添加不同劑量的硒飼喂60 d時，以硒水平0.25 mg/kg組的平均日增質(zhì)量(average daily gain，ADG)最高，并且差異顯著(P<0.05)；再繼續(xù)提高硒水平為0.4、0.55、0.7 mg/kg的情況下，ADG有下降的趨勢[7]。陳明濤研究表明：飼料中硒水平為0.317 mg/kg時，對小鼠的生產(chǎn)性能有明顯的促進作用；當硒水平增加為1.586、7.93 mg/kg時，小鼠的生產(chǎn)性能明顯降低[8]。本研究結(jié)果也顯示，D組試驗兔采食0.75 mg/kg硒水平日糧后1周開始出現(xiàn)零星死亡，直至3周后D組試驗兔全部死亡。SS組硒水平為0.36 mg/kg時，與C組(日糧硒水平為 0.2 mg/kg)相比獺兔日增質(zhì)量降低50.5%(P<0.01)，腹瀉率提高16.7百分點，死亡率提高13.4百分點。這說明日糧中硒水平為 0.36 mg/kg 及以上時，對青年獺兔的正常生長需求是過量的，而過量的硒可能產(chǎn)生過氧化的作用損傷細胞抗氧化能力，從而導致兔體生長受阻甚至死亡。本試驗中所選擇的0.20、0.36、0.75 mg/kg 3個梯度，從結(jié)果來看，青年獺兔日糧硒水平在0.75 mg/kg時已出現(xiàn)大量死亡現(xiàn)象，說明硒水平在高于0.75mg/kg時的日糧不能用于獺兔飼喂，這一結(jié)果對生產(chǎn)有現(xiàn)實指導意義；本研究團隊下一步將在0.20～0.36 mg/kg 含量間重新設(shè)定梯度試驗，以期精準確定獺兔日糧中硒的安全添加量范圍。

3.2 不同硒含量日糧在獺兔血液及皮膚組織中的累積效應

伊小平研究表明，過量的硒飼喂雞，隨著硒的不斷攝入，硒在血液和組織中的含量增加，并引起慢性中毒癥狀[9]。張艷艷研究表明，在日糧中添加硒水平分別為0、0.15、0.30、0.45、0.60 mg/kg，飼喂斷奶肉兔30 d后，隨硒添加水平的增加肝臟中硒沉積極顯著增加，硒水平為0.45 mg/kg時，肝臟硒沉積量達到最大，硒水平為0.6 mg/kg時肝臟硒沉積量增加不顯著[10]。管延杰研究表明，用亞硒酸鈉低劑量組(0.14 mg/kg)、中劑量組(0.54 mg/kg)、高劑量組(2.16 mg/kg)及對照組(0.00 mg/kg)對雄性昆明小鼠進行灌胃后，小鼠脾臟硒含量明顯上升，并且隨著劑量的增加和灌胃時間的延長呈明顯的上升趨勢[11]。田園等研究表明，給大鼠補充硒水平為3、6、10、15 mg/kg的亞硒酸鈉后，硒在大鼠肝臟、血漿及紅細胞中的蓄積量隨著硒水平的增加而增多[12]。Zhang等研究表明飼喂BALB/c小鼠硒水平為0.045、0.1、0.4、0.8 mg/kg的日糧56 d后，飼喂硒水平為0.8 mg/kg的小鼠肝臟和腎臟中的硒含量顯著高于飼喂硒水平為 0.045 mg/kg 和0.1 mg/kg的小鼠[13]。本研究也發(fā)現(xiàn)相類似的結(jié)果，SS組日糧添加硒水平0.36 mg/kg的亞硒酸鈉可顯著提高獺兔血液中硒含量(P<0.05)，這一結(jié)果引起的慢性中毒效應與表1相對應，導致了SS組獺兔生產(chǎn)性能的顯著降低。

3.3 硒對兔血漿抗氧化能力的影響

張在香等研究發(fā)現(xiàn)，在低硒酵母飼料的基礎(chǔ)上添加硒水平為0.2和5.0 mg/kg(適硒和高硒)的亞硒酸鈉，飼喂斷乳雄性Wistar大鼠20周后，高硒組的血漿細胞內(nèi)谷胱甘肽過氧化物酶GPx活性與適硒組比較顯著下降[14]。張偉民等通過增加飼料中硒含量來探究籠養(yǎng)蛋雛鴨抗氧化能力的結(jié)果表明，雛鴨血清和肝臟的T-AOC水平呈明顯的先上升后下降的趨勢[15]。張艷艷等在日糧不同硒水平對2～3月齡肉兔抗氧化能力的影響研究中發(fā)現(xiàn)，硒水平為0.6 mg/kg添加組的兔血清SOD活性比硒水平分別為0、0.15、0.30、0.45 mg/kg 添加組的兔血清SOD活性顯著降低[16]。Zhang等研究表明飼喂BALB/c小鼠硒水平為0.045、0.1、0.4、0.8 mg/kg 的日糧56 d后，0.8 mg/kg時小鼠肝臟MDA含量最高，并且SOD和GPx的活性顯著降低[13]。在本試驗中，SS組獺兔所食日糧總硒0.36 mg/kg，獺兔血漿中SOD活性和 T-AOC總抗氧化能力極顯著降低，而MDA含量極顯著升高，提示過量的硒可引起獺兔機體抗氧化能力下降。

而目前關(guān)于硒中毒的真正機理并不完全清楚。Seko等在1989年提出谷胱甘肽能夠使亞硒酸鹽中的Se(Ⅳ)還原成Se(Ⅱ)，Se(Ⅱ)與氧反應產(chǎn)生氧自由基ROS，造成細胞損傷，從而使機體受到氧化損傷[17]。本研究中發(fā)現(xiàn)的獺兔血漿中抗氧化能力下降這一現(xiàn)象，可能是由于硒的過量導致細胞氧化應激，產(chǎn)生過多的氧自由基，擾亂GPx、SOD等各種抗氧化物酶的合成及生化功能，從而導致機體抗氧化能力下降，推測這一結(jié)果可能是SS組獺兔生產(chǎn)性能顯著下降的主要原因。

[1]董 英. 微量元素硒的營養(yǎng)作用及合理使用[J]. 福建輕紡，2006(11)：52-55.

[2]National Research Council. Recommended dietary allowances[M]. 9th ed. Washington D C：National Academy Press，1980.

[3]耿義群，蘇 敏，徐小虎. 硒-谷胱甘肽過氧化物酶在腦抗氧化損傷中的研究進展[J]. 腦與神經(jīng)疾病雜志，2004，12(3)：239-240.

[4]National Research Council. Nutrient requirements of rabbit[M]. Washington D C：National Academy Press，1977.

[5]李克廣，丁原春，王文山，等. 微量元素硒對獺兔繁殖性能的影響[J]. 畜牧獸醫(yī)雜志，2010，29(6)：6-8.

[6]馮 婧，王 安，霍思遠. 飼糧添加硒對生長期蛋鴨生長性能、免疫機能及內(nèi)分泌的影響[J]. 動物營養(yǎng)學報，2011，23(10)：1697-1702.

[7]高宏偉，段 銘，孟軻音，等. 日糧中鋅、銅、錳和硒對生長獺兔生產(chǎn)性能及生化指標的影響[J]. 中國獸醫(yī)學報，2005，25(5)：530-533.

[8]陳明濤. 小鼠硒蓄積性毒性試驗及其殘留測定研究[D]. 雅安：四川農(nóng)業(yè)大學，2009.

[9]尹小平. 柳州黑雞硒亞慢性中毒的病理及某些毒性機理的研究[D]. 長沙：湖南農(nóng)業(yè)大學，2005.

[10]張艷艷. 日糧不同硒水平對斷奶2～3月齡生長肉兔生長性能、抗氧化指標、血液生化及肝臟GPx1 mRNA 表達量的影響[D]. 泰安：山東農(nóng)業(yè)大學，2010.

[11]管延杰. 亞急性硒中毒對雄鼠生殖與免疫的影響[D]. 哈爾濱：東北農(nóng)業(yè)大學，2012.

[12]田 園，牟維鵬，李鵬高，等. 補充不同水平亞硒酸鈉和硒蛋氨酸對大鼠硒代謝的影響[J]. 衛(wèi)生研究，2004，33(6)：749-751.

[13]Zhang Q，Chen L，Guo K，et al. Effects of different Selenium levels on gene expression of a subset of selenoproteins and antioxidative capacity in mice[J]. Biological Trace Element Research，2013，154(2)：255-261.

[14]張在香，楊曉光，牟維鵬，等. 慢性硒中毒大鼠硒蛋白的變化[J]. 衛(wèi)生研究，1999，28(3)：155-157.

[15]張偉明，王 安. 微量元素硒對籠養(yǎng)蛋雛鴨生產(chǎn)性能、免疫器官發(fā)育和抗氧化功能影響[J]. 飼料工業(yè)，2012(14)：11-14.

[16]張艷艷，李福昌. 日糧不同硒水平對2～3月齡肉兔生產(chǎn)性能、抗氧化指標和肉質(zhì)的影響[J]. 動物營養(yǎng)學報，2010，22(1)：82-87.

[17]Seko Y，Saito Y，Kitahara J，et al. Active oxygen generation by the reaction of selenite with reduced glutathioneinvitro[M]//Wendel A.Selenium in biology and medicine. Berlin：Springer，1989：70-73.

10.15889/j.issn.1002-1302.2017.02.044

2016-10-21

江蘇省農(nóng)業(yè)科技自主創(chuàng)新資金[編號：CX(14)2078]。

楊 杰(1972—)，男，安徽蒙城人，碩士，副研究員，主要從事家兔飼料營養(yǎng)調(diào)控研究。E-mail：jieyangbwx@hotmail.com。

S829.15

A

1002-1302(2017)02-0149-03

楊 杰，潘孝青，宋丹丹，等. 無機硒對青年獺兔生產(chǎn)性能及抗氧化性能的影響[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學，2017，45(2)：149-151.