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        金銀花尺蠖幼蟲(chóng)腸道細(xì)菌分離與鑒定

        2017-03-01 06:00:29向玉勇徐中秋柴新義
        江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2017年2期
        關(guān)鍵詞:尺蠖金銀花芽孢

        向玉勇, 徐中秋, 柴新義

        (滁州學(xué)院生物與食品工程學(xué)院,安徽滁州 239000)

        金銀花尺蠖幼蟲(chóng)腸道細(xì)菌分離與鑒定

        向玉勇, 徐中秋, 柴新義

        (滁州學(xué)院生物與食品工程學(xué)院,安徽滁州 239000)

        金銀花尺蠖是近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的金銀花主要食葉害蟲(chóng)之一,在河南、山東、安徽等地均有分布。為了解金銀花尺蠖幼蟲(chóng)腸道環(huán)境中的細(xì)菌種類,對(duì)金銀花尺蠖幼蟲(chóng)腸道中的細(xì)菌進(jìn)行分離、純化和培養(yǎng),獲得3個(gè)細(xì)菌菌株,對(duì)菌株的培養(yǎng)性狀、染色反應(yīng)、菌體形態(tài)、生理生化反應(yīng)進(jìn)行系統(tǒng)研究。結(jié)果表明,它們分別屬于葡萄球菌屬(Staphylococcus)、巨大芽孢桿菌(Bacillusmegaterium)和枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)。這3種菌株在金銀花尺蠖幼蟲(chóng)腸道中存在的數(shù)量差別很大,其中葡萄球菌屬的數(shù)量最大,為6.59×1011個(gè)/mL。

        金銀花尺蠖;腸道細(xì)菌;分離;鑒定

        動(dòng)物的腸道系統(tǒng)內(nèi)寄居著數(shù)量巨大的微生物群,動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育除受溫度、濕度、光照等環(huán)境因素影響外,還受其腸道系統(tǒng)內(nèi)的微生物群影響[1-2]。這些微生物群是在與宿主動(dòng)物協(xié)同進(jìn)化過(guò)程中形成的,含有多種酶系統(tǒng),能參與寄主動(dòng)物能量和物質(zhì)代謝,以及遺傳信息運(yùn)轉(zhuǎn)等一系列生理過(guò)程[3],因此,對(duì)寄主動(dòng)物的健康生長(zhǎng)是有益的。昆蟲(chóng)是動(dòng)物界中數(shù)量最大的類群,在昆蟲(chóng)腸道系統(tǒng)中寄居的正常微生物群,是昆蟲(chóng)機(jī)體的生理組成部分,與昆蟲(chóng)營(yíng)養(yǎng)生理活動(dòng)有著密切關(guān)系[4]。如有些昆蟲(chóng)不能直接利用食物中的某些營(yíng)養(yǎng)成分,必須依靠腸道內(nèi)微生物的作用才能消化食物,從而促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的代謝和轉(zhuǎn)化。腸道微環(huán)境發(fā)生改變,可引起微生物群發(fā)生變化,從而影響昆蟲(chóng)的生命活動(dòng)。因此,對(duì)昆蟲(chóng)腸道微生物菌群進(jìn)行研究,可以通過(guò)人為調(diào)控打破其腸道微生態(tài)平衡,影響昆蟲(chóng)的營(yíng)養(yǎng)生理活動(dòng),使其不能正常發(fā)育,從而控制害蟲(chóng)的發(fā)生危害,對(duì)害蟲(chóng)防治具有十分重要的理論和實(shí)踐意義。目前,國(guó)內(nèi)對(duì)昆蟲(chóng)腸道微生物的研究只涉及少數(shù)昆蟲(chóng)[4-7],昆蟲(chóng)是動(dòng)物界中種類最大的類群,不同種類昆蟲(chóng)甚至同種昆蟲(chóng)不同蟲(chóng)態(tài)腸道微生物的種類會(huì)存在差異。因此,還必須選擇更多的昆蟲(chóng)種類加以系統(tǒng)研究,以明確不同種類昆蟲(chóng)腸道微生物的類群。

        金銀花尺蠖(Heterolochajinyinhuaphaga)屬鱗翅目尺蛾科昆蟲(chóng),別稱拱腰蟲(chóng),是近年新發(fā)現(xiàn)的金銀花主要食葉害蟲(chóng)之一,在河南、山東、安徽等地已有報(bào)道[8-11]。該蟲(chóng)常將金銀花葉片咬成缺刻或孔洞,甚至將葉片全部吃光,造成金銀花大面積減產(chǎn),給金銀花生產(chǎn)帶來(lái)嚴(yán)重?fù)p失。目前,國(guó)內(nèi)對(duì)金銀花尺蠖的研究主要是關(guān)于其生物學(xué)特性及防治方面[8-12],而對(duì)其腸道微生物的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。本試驗(yàn)對(duì)金銀花尺蠖幼蟲(chóng)的腸道細(xì)菌進(jìn)行分離及鑒定,以了解其幼蟲(chóng)腸道細(xì)菌的種類,為進(jìn)一步探討腸道細(xì)菌對(duì)其生命活動(dòng)的影響奠定基礎(chǔ),從而為更好地利用微生態(tài)調(diào)控技術(shù)防治該蟲(chóng)提供科學(xué)依據(jù)。

        1 材料與方法

        1.1 供試蟲(chóng)源與培養(yǎng)基

        金銀花尺蠖幼蟲(chóng)采集于安徽省明光市三界鎮(zhèn),在室內(nèi)人工氣候箱[光—暗周期為14 h—10 h、溫度為(25±1)℃、相對(duì)濕度為(70±7)%]中用新鮮的金銀花葉片飼養(yǎng),選取大小一致的健康老熟幼蟲(chóng)作為試驗(yàn)材料。培養(yǎng)基:NA培養(yǎng)基、NB培養(yǎng)基、金氏B培養(yǎng)基、PDA培養(yǎng)基等[13]。

        1.2 試驗(yàn)方法

        1.2.1 腸道細(xì)菌的分離與純化 取10頭金銀花尺蠖5齡老熟幼蟲(chóng),浸泡在75%的乙醇中將其殺死,15 s后取出蟲(chóng)體放在0.1%氯化汞液中消毒2 min,再用滅菌水清洗,然后在無(wú)菌條件下取出消化道稱其質(zhì)量后用滅菌研缽研磨成勻漿,研磨液用滅菌水稀釋至10-1~10-10。取10-8、10-9、10-10等3個(gè)稀釋度用平板稀釋法和涂抹法進(jìn)行分離,各稀釋度重復(fù)3次,分別置于生化培養(yǎng)箱中,在30 ℃下培養(yǎng)72 h。挑取表征各異菌落在NA培養(yǎng)基平板上劃線、純化,然后分別移植斜面培養(yǎng),并按出現(xiàn)數(shù)量依次編號(hào)。

        1.2.2 腸道細(xì)菌的鑒定 將分離純化得到的各細(xì)菌菌株進(jìn)行形態(tài)染色,觀察其培養(yǎng)性狀,并進(jìn)行生理生化測(cè)定,根據(jù)文獻(xiàn)[14-15]進(jìn)行鑒定。

        1.2.3 腸道細(xì)菌的數(shù)量測(cè)定 將腸道細(xì)菌懸浮液定量稀釋后,取一定量不同稀釋度的細(xì)菌懸浮液,在瓊脂平板上培養(yǎng)72 h,選取菌落生長(zhǎng)稀疏、適當(dāng)稀釋度計(jì)算菌落數(shù),求出3個(gè)重復(fù)的平均值。按照以下公式計(jì)算出腸道中的細(xì)菌數(shù)[4]:腸道中的細(xì)菌數(shù)(個(gè)/mL)=平板上菌落數(shù)(個(gè))×稀釋倍數(shù)/平板上加菌液的量(mL)。

        2 結(jié)果與分析

        通過(guò)對(duì)金銀花尺蠖幼蟲(chóng)腸道細(xì)菌進(jìn)行分離純化,獲得3個(gè)細(xì)菌菌株,對(duì)3個(gè)菌株進(jìn)行鑒定試驗(yàn)。

        2.1 菌體形態(tài)和培養(yǎng)性狀

        在NA培養(yǎng)基上將供試菌株培養(yǎng)24 h,經(jīng)革蘭氏染色法和3% KOH簡(jiǎn)易法鑒別,均呈陽(yáng)性。油鏡下觀察發(fā)現(xiàn),1個(gè)菌株呈球狀,2個(gè)菌株呈桿狀。用NA、NB培養(yǎng)基將分離純化的供試菌株經(jīng)28 ℃培養(yǎng)48 h后觀察,3個(gè)菌株在2種培養(yǎng)基各呈不同的表現(xiàn)(表1)。

        表1 金銀花尺蠖幼蟲(chóng)腸道細(xì)菌形態(tài)特征及培養(yǎng)性狀

        2.2 供試菌株生理性狀

        從表2可知,經(jīng)不同溫度、pH值、NaCl濃度下培養(yǎng),所有供試菌株均在15~42 ℃、pH值5~9、NaCl濃度2%~7%條件下生長(zhǎng)良好。在10 ℃低溫下只有3號(hào)菌株能夠正常生長(zhǎng);在55 ℃高溫下,只有1號(hào)菌株能夠正常生長(zhǎng);pH值=11條件下只有1、2號(hào)菌能正常生長(zhǎng);在10% NaCl濃度條件下只有1號(hào)菌株可以正常生長(zhǎng)。

        表2 金銀花尺蠖幼蟲(chóng)腸道細(xì)菌生理性狀

        注:“+”表示該條件下菌株擴(kuò)繁;“-”表示該條件下菌株死亡。

        2.3 供試菌株生化性狀

        3種菌株均產(chǎn)生氧化酶和過(guò)氧化氫酶,能進(jìn)行淀粉水解和硝酸鹽還原,均能分解利用葡萄糖、麥芽糖、乳糖、半乳糖、阿拉伯糖、海藻糖、果糖、甘露糖、甘露醇、山梨醇、肌醇,甲基紅試驗(yàn)均呈陰性,都不產(chǎn)生吲哚,其他生化項(xiàng)目各異(表3)。

        表3 金銀花尺蠖幼蟲(chóng)腸道細(xì)菌生化反應(yīng)

        注:“+”表示陽(yáng)性;“-”表示陰性。

        2.4 菌株鑒定

        通過(guò)對(duì)3個(gè)細(xì)菌菌株的培養(yǎng)性狀、菌體形態(tài)、染色反應(yīng)、生理生化性狀等進(jìn)行試驗(yàn),結(jié)果表明它們分別屬于葡萄球菌屬(Staphylococcus)、巨大芽孢桿菌(Bacillusmegaterium)和枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)。由表4可見(jiàn),金銀花尺蠖幼蟲(chóng)腸道中各菌株存在的數(shù)量差別很大,其中葡萄球菌屬的數(shù)量最大,為6.59×1011個(gè)/mL。

        表4 金銀花尺蠖幼蟲(chóng)腸道細(xì)菌鑒定結(jié)果及存在數(shù)量

        3 討論

        與其他動(dòng)物一樣,昆蟲(chóng)與共生的腸道微生物之間建立了復(fù)雜的協(xié)同進(jìn)化關(guān)系,其腸道系統(tǒng)為各種微生物提供適宜的生活環(huán)境,腸道微生物一方面幫助宿主昆蟲(chóng)消化食物,為昆蟲(chóng)提供各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),另一方面可以起著益生素的作用,調(diào)控腸道微生物區(qū)系本身之間的平衡,保證昆蟲(chóng)健康。腸道微生物的類群和數(shù)量與昆蟲(chóng)所取食的食物性質(zhì)存在密切的關(guān)系,不同食性昆蟲(chóng)腸道環(huán)境中的微生物菌株的種類和數(shù)量存在差別。如刺吸植物汁液的斑衣蠟蟬(Lycormadelicatula)成蟲(chóng)消化道內(nèi)存在有多黏芽孢桿菌(Bacilluspolymyxa)、地衣芽孢桿菌(Bacilluslicheniformis)、巨大芽孢桿菌(Bacillusmegaterium)和枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)4種細(xì)菌,其中多黏芽孢桿菌數(shù)量最多[4];取食動(dòng)物性物品和食品的白腹皮蠹(Dermestesmaculatus)成蟲(chóng)消化道內(nèi)分布有堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌(Bacillusfirmus)、氣微菌屬(Aeromicrobium)、浸麻芽孢桿菌(Bacillusmacerans)、葡萄球菌屬(Staphylococcus)、巨大芽孢桿菌和短芽孢桿菌(Bacillusbrevis)6種細(xì)菌,以巨大芽孢桿菌數(shù)量最多[7]; 取食植物葉片或莖稈的沙漠蝗腸道中優(yōu)勢(shì)菌群為腸桿菌屬和鏈球菌屬[16]。本試驗(yàn)從金銀花尺蠖幼蟲(chóng)腸道中分離鑒定出3種細(xì)菌,分別為葡萄球菌屬(Staphylococcus)、巨大芽孢桿菌(Bacillusmegaterium)和枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis),其中葡萄球菌屬的數(shù)量最大。金銀花尺蠖的食性單一,只取食危害金銀花等少數(shù)忍冬科植物,消化道對(duì)食物消化也比較單一,可能導(dǎo)致腸道中的細(xì)菌種類比較少。另外,金銀花是中藥材,含有抑菌作用的活性成分,其活性成分對(duì)金銀花尺蠖腸道細(xì)菌的影響還有待進(jìn)一步研究。

        為適應(yīng)中藥材無(wú)公害生產(chǎn)的要求,今后還需進(jìn)一步分析金銀花尺蠖幼蟲(chóng)腸道主要細(xì)菌菌株的功能,并與食物的營(yíng)養(yǎng)成分進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析,探討細(xì)菌菌群與金銀花尺蠖幼蟲(chóng)的共生機(jī)制,從而通過(guò)人工方法改善和調(diào)節(jié)腸道微生物的微生態(tài)條件,調(diào)控金銀花尺蠖的生長(zhǎng)發(fā)育,實(shí)現(xiàn)該蟲(chóng)的生態(tài)控制。

        [1]何明清. 動(dòng)物微生態(tài)學(xué)[M]. 北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社,1994.

        [2]施曼玲,邱清波,計(jì) 翔. 兩種有磷類爬行動(dòng)物消化道微生物的研究[J]. 動(dòng)物學(xué)雜志,2000,35(6):12-15.

        [3]陳 群,鮑大鵬. 人及動(dòng)物胃腸道正常微生物群的研究[J]. 安徽農(nóng)業(yè)技術(shù)師范學(xué)院學(xué)報(bào),1999,13(4):39-42.

        [4]劉玉升,陳艷霞,呂 飛,等. 斑衣蠟蟬成蟲(chóng)腸道細(xì)菌的鑒定研究[J]. 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2006,37(4):495-498.

        [5]貝紹國(guó),劉玉升,崔俊霞. 日本龜蠟蚧腸道細(xì)菌分離及鑒定研究[J]. 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2005,36(2):209-212.

        [6]孟祥杰,劉玉升,崔 俊,等. 六斑異瓢蟲(chóng)成蟲(chóng)腸道細(xì)菌分離及鑒定研究[J]. 中國(guó)微生態(tài)學(xué)雜志,2008,20(2):120-121,125.

        [7]秦 浩,李志鵬,李林懋,等. 白腹皮蠹幼蟲(chóng)腸道細(xì)菌分離及鑒定[J]. 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2013,40(3):482-486.

        [8]張文冉,高殿滑,劉愛(ài)華. 金銀花尺蠖的發(fā)生與氣象條件的關(guān)系[J]. 氣象與環(huán)境科學(xué),2007,30(4):60-62.

        [9]王廣軍,張國(guó)彥,王江蓉. 金銀花尺蠖的發(fā)生規(guī)律與防治技術(shù)[J]. 中國(guó)植保導(dǎo)刊,2005,25(3):22-23.

        [10]姜 敏,邵明果,趙伯林. 金銀花尺蠖的生物學(xué)特性及防治技術(shù)[J]. 山東林業(yè)科技,2005(1):62-63.

        [11]向玉勇,劉克忠,殷培峰,等. 安徽金銀花尺蠖的生物學(xué)特性[J]. 滁州學(xué)院學(xué)報(bào),2010,12(5):35-37.

        [12]倪云霞,劉新濤,劉玉霞,等. 金銀花尺蠖的藥劑防治[J]. 河南農(nóng)業(yè)科學(xué),2006,35(12):78-79.

        [13]陳天壽. 微生物培養(yǎng)基的制造與應(yīng)用[M]. 北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社,1995:179-671.

        [14]東秀珠,蔡妙英. 常見(jiàn)細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè)[M]. 2版. 北京:科學(xué)出版社,2001.

        [15]布坎南R E,吉本斯N E. 伯杰細(xì)菌鑒定手冊(cè)[M]. 中國(guó)科學(xué)院微生物研究所,譯. 8版. 北京:科學(xué)出版社,1984.

        [16]Hunt J,Charnly A K. Abundance and distribution of the gut flora of the desert locust,Schistocercagregaria[J]. Journal of Invertebrate Pathology,1981,38(3):378-385.

        10.15889/j.issn.1002-1302.2017.02.029

        2015-11-21

        安徽省高校省級(jí)自然科學(xué)研究項(xiàng)目(編號(hào):KJ2012B123);安徽省高等學(xué)校優(yōu)秀青年人才基金(編號(hào):2009SQRZ147);國(guó)家級(jí)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃(編號(hào):201310377018)。

        向玉勇(1974—),男,湖南麻陽(yáng)人,博士,副教授,主要從事資源昆蟲(chóng)學(xué)及害蟲(chóng)防治研究。E-mail:xyy10657@sohu.com。

        S433.4

        A

        1002-1302(2017)02-0106-02

        向玉勇,徐中秋,柴新義. 金銀花尺蠖幼蟲(chóng)腸道細(xì)菌分離與鑒定[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2017,45(2):106-108.

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