宋 斌 洪曉華 張 平

(惠州市中醫(yī)醫(yī)院消化內二科，廣東 惠州 516001)

老年腸易激綜合征患者腸黏膜肥大細胞與血管活性腸肽的表達及意義

宋 斌 洪曉華1張 平

(惠州市中醫(yī)醫(yī)院消化內二科，廣東 惠州 516001)

目的 探討腸易激綜合征(IBS)患者腸黏膜肥大細胞(MC)及血管活性腸肽(VIP)的表達及其可能作用。方法 33例腹瀉型IBS患者(D-IBS組)、27例便秘型IBS患者(C-IBS組)及18例健康體檢者(對照組)納入研究。分別取回盲部、乙狀結腸黏膜行VIP 免疫組織化學染色和甲苯胺藍染色MC計數(shù)，檢測肛管直腸壓力。結果 ①D-IBS組和C-IBS組乙狀結腸部MC計數(shù)均較回盲部顯著降低(P<0.05)，兩組間各部MC計數(shù)比較無統(tǒng)計學差異(P>0.05)，但各部位均較對照組顯著增高(P<0.05)。②D-IBS組和C-IBS組回盲部和乙狀結腸黏膜VIP表達無統(tǒng)計學差異(P>0.05)，但各部位均較對照組顯著增高(P<0.05)。③三組間靜息壓、最大收縮壓及松弛壓均無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。D-IBS組和C-IBS組患者感覺閾值、最大容量閾值及疼痛閾值均無統(tǒng)計學差異(P>0.05)，但與對照組比較均顯著降低(P<0.05)。結論 IBS患者結腸黏膜MC和VIP表達增加，可能對IBS患者內臟高敏感性的形成有一定影響。

腸易激綜合征；肥大細胞；血管活性腸肽；內臟高敏感性

腸易激綜合征(IBS)以腹痛、腹脹或腹部不適，伴大便性狀或排便習慣改變?yōu)橹饕卣鳎珶o器質性或生化指標異常改變，在亞洲國家其患病率達2.9%～15.6%〔1〕，是最常見的功能性胃腸道功能障礙。目前其發(fā)病機制仍不明確，但大量研究顯示神經(jīng)-內分泌-免疫調控異常在IBS中起到重要作用〔2〕。本研究觀察IBS患者結腸黏膜肥大細胞(MC)及血管活性腸肽(VIP)的表達，并通過直腸測壓探討VIP、MC與IBS患者內臟高敏性的相關性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2014年5月至2015年6月在我院就診的IBS患者60例，納入標準：符合功能性胃腸疾病羅馬Ⅲ制定的IBS診斷標準〔3〕，包括腹瀉型IBS(D-IBS)患者 33例，便秘型IBS(C-IBS)患者 27例；男25例，女35例，年齡59～70〔平均(64.7±6.3)〕歲。選擇同期行健康體檢或腸息肉內鏡下切除術后復查者18例作為對照組，均無胃腸道癥狀、大便習性正常、鏡檢腸黏膜無異常且近期無服藥史，男女各9例，年齡58～65〔平均(55.5±5.8)〕歲。所有受試者均簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 腸黏膜標本制備 采用電子結腸鏡(奧林巴斯CV-260)分別于回盲部(升結腸距回盲瓣約5 cm左右處)和乙狀結腸(距肛門25 cm左右)各鉗取2塊黏膜標本，常規(guī)行固定、脫水、包埋、切片、脫蠟處理，采用免疫組化鏈霉親合素-生物素復合物(SABC)法檢測VIP，甲苯胺藍改良染色法檢測MC。VIP兔抗人多克隆抗體和免疫組化SABC購自武漢博士德生物科技有限公司；甲苯胺藍購自上海化學試劑公司，操作均嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.2.2 染色結果分析 VIP 陽性細胞質呈棕褐色顆粒，MC陽性呈現(xiàn)紫紅色顆粒。采用 Olympus-CH 光學顯微鏡高倍視野(×400)下觀察5個不重復視野的黏膜層，分別對VIP、MC陽性表達進行計數(shù)，取平均值為檢測結果。

1.3 肛管直腸壓力檢測 采用美國Medtronic公司生產(chǎn)的肛腸動力學檢測系統(tǒng)，受試者均于檢查當日空腹，檢查前排空腸道。患者取左側臥位，屈膝顯露肛門外口，將測壓導管經(jīng)肛門插入肛管直腸內，按規(guī)范程序分別測定肛管直腸括約肌靜息壓、最大收縮壓、括約肌松弛壓。向測壓導管的氣囊內注氣10 ml，并以10 ml容量逐次遞增，檢測有無直腸肛門抑制，并記錄直腸感知閾值、直腸最大容量閾值及疼痛閾值。

1.4 統(tǒng)計學方法 應用SPSS17.0軟件，計量資料組間均數(shù)比較用單因素方差分析或t檢驗，多組間兩兩比較采用S-N-K法。

2 結 果

2.1 MC染色與計數(shù) 在D-IBS、C-IBS及對照組回盲部、乙狀結腸黏膜固有層均可見MC散在分布，細胞呈梭形、圓形或不規(guī)則形。各組乙狀結腸黏膜 MC計數(shù)均較回盲部顯著降低(P<0.05),而D-IBS組及C-IBS組各部位MC計數(shù)比較均無統(tǒng)計學差異，但均較對照組顯著增高(P<0.05)。見表1。

2.2 VIP免疫組化染色 在D-IBS、C-IBS及對照組回盲部、乙狀結腸黏膜均可見VIP表達，主要分布在腸黏膜固有層內分泌細胞的胞質內，呈楔形或不規(guī)則形。各組在回盲部和乙狀結腸腸黏膜VIP表達比較均無統(tǒng)計學差異(P>0.05)；組間比較，D-IBS組與C-IBS組差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，但均高于對照組(P<0.05)。見表1。

表1 各組腸黏膜VIP染色和 MC計數(shù)結果，個/高倍視野)

與對照組比較：1)P<0.05；與回盲部比較：2)P<0.05；下表同

2.3 肛管直腸壓力檢測結果 D-IBS組、C-IBS組及對照組均存在直腸肛門抑制性反射,且三組間靜息壓、最大收縮壓及松弛壓比較均無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。D-IBS組和C-IBS組患者感覺閾值、最大容量閾值及疼痛閾值比較均無統(tǒng)計學差異(P>0.05)，但與對照組比較均顯著降低(P<0.05)。見表2。

表2 各組受試者肛管直腸測壓結果±s，kPa)

3 討 論

內臟高敏感性是指內臟組織對刺激的感受性增強，導致引起內臟發(fā)生疼痛或不適感覺的閾值降低〔4〕。大量研究表明內臟敏感性增高是IBS最主要的病理生理改變，因此，不能誘發(fā)正常人起反應的微小刺激可能導致IBS患者腸管劇烈收縮，并發(fā)生腹痛和排便異常等癥狀〔5〕。本研究結果顯示IBS患者直腸動力是正常的。但不論是D-IBS，還是C-IBS患者，其感覺閾值、最大容量閾值和疼痛閾值均顯著低于對照組，提示IBS患者容量刺激的耐受性顯著降低，結、直腸敏感性增加，而研究證實其也反映了食管、胃、十二指腸、小腸等內臟敏感性增加〔6〕。

MC是人體內具有重要免疫活性的細胞，在胃腸道廣泛存在，作為一種抗原感受器在腸黏膜發(fā)揮局部免疫作用。據(jù)報道約1/3的患者在腸道感染后出現(xiàn)IBS〔7〕，感染后IBS患者腸黏膜MC明顯增多〔8〕，表明MC在IBS的發(fā)病過程中起到了重要作用。本研究顯示IBS患者結腸黏膜MC計數(shù)較正常者顯著增加，與王承黨等〔9〕的研究結果一致。各種理化因素或內源性物質如神經(jīng)肽等可誘導 MC 活化，并通過脫顆粒作用釋放多種生物活性介質，如組織胺、前列腺素、5-羥色胺、白三烯等，這些介質作用于神經(jīng)纖維引發(fā)腸道高敏感性。

VIP是一種含 28個氨基酸的堿基多肽，廣泛分布于腸道和神經(jīng)系統(tǒng)，以神經(jīng)遞質的方式局部發(fā)揮作用〔10〕。本研究結果顯示正常對照組和IBS患者結腸黏膜均有VIP表達，且主要在結腸黏膜上皮細胞間的內分泌細胞內。而與對照組比較，IBS患者VIP陽性表達明顯增強，且在不同類型IBS患者及結腸不同部位的分布均無明顯差異，與趙志忠等〔11〕研究結果一致。提示VIP可能在IBS發(fā)病機制中的不同環(huán)節(jié)發(fā)生作用。VIP增高使C-IBS患者腸蠕動性收縮作用減弱導致便秘，但在D-IBS患者中VIP導致胃腸道動力紊亂，促進腸道水和電解質分泌增加，腸道對外來刺激敏感性增強，因此導致腹瀉、腹痛等癥狀〔12〕。

研究表明，胃腸道的功能受到自主神經(jīng)-腸神經(jīng)系統(tǒng)(ENS)的調控，ENS具有自主調節(jié)、自我控制的特點，但通過腦腸軸與中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)聯(lián)系起來，CNS間接通過各種腦腸肽調控ENS和胃腸運動〔13〕。MC作為神經(jīng)-內分泌-免疫網(wǎng)絡的橋梁，MC激活后一方面分泌活性介質，促進水、電解質和黏液的分泌〔14〕，另一方面作用于鄰近的內分泌細胞和 ENS，促使VIP等一系列神經(jīng)肽釋放〔15〕，引發(fā)腸動力和敏感性變化，腸功能發(fā)生紊亂，最終導致 IBS患者發(fā)生腹痛、腹脹及排便習慣改變等癥狀。

綜上所述，MC與VIP在IBS患者結腸黏膜表達增強，可能通過神經(jīng)-內分泌-免疫網(wǎng)絡導致腸動力紊亂和腸道敏感性增高，在IBS的發(fā)病機制發(fā)揮重要作用。

1 Gwee KA,Bak YT,Ghoshal UC,etal.Asian consensus on irritable bowel syndrome〔J〕.J Gastroenterol Hepatol,2010;25(7):1189-205.

2 周正華,馬玲玲.腸易激綜合征與神經(jīng)-內分泌-免疫網(wǎng)絡關系〔J〕.中國中西醫(yī)結合消化雜志,2013;21(2):106-9.

3 Longstreth GF,Thompson WG,Chey WD,etal.Functional bowel disorders〔J〕.Gastroenterology,2006;130(5):1480-91.

4 肖 晨,王承黨.腸易激綜合征內臟高敏感性發(fā)生機制中相關受體的作用〔J〕.國際消化病雜志,2011;31(1):28-31.

5 蔣文瑜,張紅杰.腸易激綜合征患者的自主神經(jīng)功能失調與內臟高敏感性〔J〕.中華消化雜志,2012;32(7):499-501.

6 Posserud I,Ersryd A,Simrén M.Functional findings in irritable bowel syndrome〔J〕.World J Gastroenterol,2006;12(18):2830-8.

7 Guilarte M,Santos J,de Torres I,etal.Diarrhoea-predominant IBS patients show mast cell activation and hyperplasia in the jejunum〔J〕.Gut,2007;56(2):203-9.

8 Kim HS,Lim JH,Park H,etal.Increased immunoendocrine cells in intestinal mucosa of postinfectious irritable bowel syndrome patients 3 years after acute Shigella infection-an observation in a small case control study〔J〕.Yonsei Med J,2010;51(1):45-51.

9 王承黨,郭朝書.肥大細胞和類胰蛋白酶在腹瀉型腸易激綜合征升結腸黏膜中的表達及意義〔J〕.世界華人消化雜志,2010;18(16):1682-6.

10 程曉雯,鄭清華,李小玲，等.血管活性腸肽與某些胃腸動力紊亂性疾病的內在關聯(lián)研究進展〔J〕.中國全科醫(yī)學,2012;15(3):237-41.

11 趙志忠,王俊平.腸易激綜合征患者結腸黏膜血管活性腸肽生長抑素的表達研究〔J〕.中國藥物與臨床,2012;12(1):45-6.

12 馮 璟,王俊平.血管活性腸肽對HT-29細胞水通道蛋白8表達的影響〔J〕.中國藥物與臨床,2011;11(1):40-1.

13 霍 濤,胡團敏.肥大細胞與腸易激綜合征關系的研究進展〔J〕.世界華人消化雜志,2011;19(5):494-7.

14 Kim DH,Cho YJ,Kim JH,etal.Stress-induced alterations in mast cell numbers and proteinase-activated receptor-2 expression of the colon:role of corticotrophin-releasing factor〔J〕.J Korean Med Sci,2010;25(9):1330-5.

15 周 磊,張 旭,楊清峰,等.感染后腸易激綜合征患者腸黏膜肥大細胞與細胞因子的相關性研究〔J〕.中華全科醫(yī)學,2010;8(2):201-59.

〔2016-06-05修回〕

(編輯 袁左鳴)

宋 斌(1979-)，男，副主任醫(yī)師，主要從事消化內科臨床研究。

R574.4

A

1005-9202(2017)03-0654-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.03.058

1 惠州市中醫(yī)醫(yī)院心內六科