（河南農(nóng)業(yè)大學牧醫(yī)工程學院，河南 鄭州 450002）

不同消毒劑抑菌效果觀察

王潔瓊，趙玉杰，周薇帆，周云飛，陳盼盼，李新生

（河南農(nóng)業(yè)大學牧醫(yī)工程學院，河南 鄭州 450002）

針對3種常見的致病菌（金黃色葡萄球菌、沙門氏菌和大腸桿菌），選取3種消毒劑，檢測對比其抑菌效果。方法：使用普通肉湯對3種消毒劑進行不同比例稀釋，分別接種10 μl 1×1011CFU/ml的金黃色葡萄球菌菌懸液、沙門氏菌菌懸液和大腸桿菌菌懸液，培養(yǎng)8 h和24 h后，根據(jù)OD值測定結(jié)果判斷其抑菌效果。戊二醛癸甲溴銨溶液在低濃度下即可抑制3種細菌生長，為綜合效果較好的消毒劑，稀戊二醛溶液需適當提高濃度或延長時間才能有效抑菌；聚維酮碘溶液在高濃度下才可有效抑菌，低濃度下存在抑菌無效的情況。3種消毒劑對沙門氏菌、葡萄球菌抑菌效果相對較好，對大腸桿菌抑菌效果相對較差。

消毒劑；稀釋度；OD值；抑菌效果

消毒劑是指能夠殺滅傳播媒介中的病原微生物，從而使之無害的制劑［1］。其主要作用機理是改變微生物賴以生存的環(huán)境，致使微生物的內(nèi)外結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，主要代謝機能出現(xiàn)障礙，生長發(fā)育受阻，從而喪失活性失去致病力。不同類型的消毒劑有不同的消毒效果［2］。消毒劑按照其作用水平可分為滅菌劑、高效消毒劑、中效消毒劑、低效消毒劑。近幾年，消毒劑已廣泛應用于工業(yè)、醫(yī)療衛(wèi)生、農(nóng)業(yè)等各個行業(yè)，人們對消毒劑的應用研究有了很大的進展。

該試驗選取了聚維酮碘、稀戊二醛、戊二醛癸甲溴銨3種消毒劑。目前聚維酮碘作為一種優(yōu)良的皮膚黏膜消毒劑和外用藥已被許多國家藥典收錄［3］；戊二醛是一種高效消毒劑和滅菌劑，廣泛用于石油開采、醫(yī)藥衛(wèi)生、生物化學、食品化妝品的防腐等方面；戊二醛癸甲溴銨可以廣譜、高效殺滅各種細菌及芽孢、病毒、支原體、真菌、霉菌和衣原體。隨著消毒劑的頻繁使用，抗藥菌株不斷出現(xiàn)，有必要定期測定評價不同消毒劑的消毒效果，為此筆者開展了相關(guān)研究，現(xiàn)將結(jié)果報告如下：

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 消毒劑 3種消毒劑，實驗室編號分別為A、B、C，其中A為聚維酮碘溶液，B為稀戊二醛溶液，C為戊二醛癸甲溴銨溶液。

1.1.2 菌種 3株標準菌株：致病性的金黃色葡萄球菌（ATCC 6538）、沙門氏菌（ATCC 13076）、大腸桿菌（ATCC 25922），編號分別為P、S、D。

1.1.3 培養(yǎng)基 普通肉湯、普通瓊脂培養(yǎng)基。

1.2 操作過程和方法

1.2.1 培養(yǎng)基制備 普通肉湯、普通瓊脂培養(yǎng)基配制按照《中華人民共和國獸藥典》標準進行［4］。

1.2.2 平板菌落總數(shù)測定 將金黃色葡萄球菌、沙門氏菌和大腸桿菌的菌液分別進行10倍倍比稀釋，選取稀釋至107、108、109、1010的菌液進行平板計數(shù)。分別用1 ml滅菌吸管移1 ml稀釋液于滅菌皿內(nèi)，每個稀釋度做兩個平皿；稀釋液移入平皿后，及時將涼至46℃普通瓊脂培養(yǎng)基注入平皿約15 ml，并轉(zhuǎn)動平皿混合均勻，同時將普通瓊脂培養(yǎng)基傾入加有1 ml滅菌水的滅菌平皿內(nèi)作空白對照；待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平板，置37℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)48 h后記下各平板的菌落數(shù)，求出同稀釋度下的各平板平均菌落數(shù)。用普通肉湯培養(yǎng)基將3種菌懸液稀釋至1×1011CFU/ml。

1.2.3 測定試驗所用3種菌株的OD值與菌落總數(shù)的關(guān)系 將15個試管分成3組，每組5個，分別加入10 ml的普通肉湯培養(yǎng)基。第1組中分別加入未稀釋葡萄球菌菌液，稀釋至1010、109、108、107的葡萄球菌菌液各10 μl；第2組中分別加入未稀釋沙門氏菌菌液，稀釋至1010、109、108、107的沙門氏菌菌液各10 μl；在第3組中分別加入稀釋至1011、1010、109、108、107的大腸桿菌菌液各10 μl。在37℃恒溫培養(yǎng)振蕩器內(nèi)培養(yǎng)24 h時每管取2 ml運用紫外分光光度計在600 nm波長下測定其OD值，繪制曲線圖。

1.2.4 稀釋 用高壓滅菌的普通肉湯培養(yǎng)基分別對A、B、C3種消毒劑進行1∶100、1∶200、1∶500、1∶1 000、1∶2 000、1∶5 000、1∶10 000、1∶20 000 8個稀釋度稀釋，總量定為10 ml。各分別稀釋3組。

1.2.5 接菌 向第1組消毒劑A、B、C的8個稀釋度分別接種10 μl金黃色葡萄球菌菌液；第2組消毒劑A、B、C的8個稀釋度分別接種10 μl沙門氏菌菌液；第3組消毒劑A、B、C的8個稀釋度分別接種10 μl大腸桿菌菌液。同時分別設(shè)置陰性對照普通肉湯培養(yǎng)基＋10 μl LB培養(yǎng)液，陽性對照普通肉湯培養(yǎng)基＋10 μl對應菌液。所接菌液均為1× 1011CFU/ml。

1.2.6 培養(yǎng)及OD值測定 在37℃恒溫培養(yǎng)振蕩器內(nèi)培養(yǎng)，分別在培養(yǎng)8 h和24 h時每管取2 ml運用紫外分光光度計在600 nm波長下測定其OD值［5］。

1.2.7 確定最佳稀釋度 ①用高壓滅菌的普通肉湯培養(yǎng)基對消毒劑A進行1∶10、1∶20、1∶40、1∶60、1∶80 5個稀釋度稀釋，對消毒劑B、C進行1∶100、1∶200、1∶500、1∶1 000 4個稀釋度稀釋，總量均定為10 ml。各分別稀釋3組。②向第1組消毒劑A1、B1、C1的各個稀釋度分別接種10 μl金黃色葡萄球菌菌液，第2組A2、B2、C2的各個稀釋度分別接種10 μl沙門氏菌菌液，第3組A3、B3、C3的各個稀釋度分別接種10 μl大腸桿菌菌液。同時分別設(shè)置陰性對照普通肉湯培養(yǎng)基＋10 μl LB培養(yǎng)液，陽性對照普通肉湯培養(yǎng)基＋10 μl對應菌液。③在37℃恒溫培養(yǎng)振蕩器內(nèi)培養(yǎng)，在培養(yǎng)8 h和24 h時每管取2 ml運用紫外分光光度計在600 nm波長下測定其OD值。確定3種消毒劑的最佳稀釋度。

2 結(jié)果

2.1 平板菌落總數(shù)測定結(jié)果

通過平板菌落總數(shù)測定可得葡萄球菌的細菌含量為2.43×1011CFU/ml；沙門氏菌的細菌含量為1.34×1011CFU/ml；大腸桿菌的細菌含量為4.88×1014CFU/ml。

2.2 不同稀釋度的3種消毒劑抑菌效果的OD值測定結(jié)果

消毒劑A的8個稀釋度下OD值測定顯示8 h和24 h時均有大量細菌增殖，對3種菌均無抑菌效果；消毒劑B的8個稀釋度下OD值測定顯示8 h時在1∶100和1∶200下對葡萄球菌和沙門氏菌有抑菌效果，在1∶100下對大腸桿菌有抑菌效果。24 h時在1∶100下對葡萄球菌有抑菌效果，在1∶100和1∶200下對沙門氏菌仍有抑菌效果，而在8個稀釋度下對大腸桿菌均無抑菌效果；消毒劑C的8個稀釋度的OD值測定顯示8 h時在1∶100、1∶200、1∶500下對3種菌均有抑菌效果。24 h時在1∶100和1∶200下對葡萄球菌有抑菌效果，在1∶100、1∶200和1∶500下對沙門氏菌有抑菌效果，在1∶100下對大腸桿菌有抑菌效果。

2.3 最佳稀釋度測定結(jié)果

通過對培養(yǎng)8 h和24 h時OD值的測定結(jié)果分析可得：消毒劑A的最佳稀釋度為1∶10；消毒劑B的最佳稀釋度為1∶100；消毒劑C的最佳稀釋度為1∶200。

3 討論

消毒是貫徹預防為主方針的一項重要措施，目的是消滅被傳染源散播于外界環(huán)境中的病原體，以切斷傳播途徑，阻止疫病繼續(xù)蔓延。隨著我國養(yǎng)殖集約化程度的提高，畜產(chǎn)品市場流通日趨頻繁，病原微生物傳播概率大大增加；同時隨著國外引進畜禽優(yōu)良品種的渠道、途徑多樣化，疫病控制的難度越來越大，嚴重威脅了我國畜牧業(yè)的健康發(fā)展。很多養(yǎng)殖場的衛(wèi)生防疫工作已經(jīng)做得很好，但仍然不時有傳染病的發(fā)生，主要原因是養(yǎng)殖環(huán)境已經(jīng)受到污染。

該試驗采用OD值（光密度值）法對3種消毒劑的抑菌效果進行了快速有效的評價。戊二醛癸甲溴銨溶液在低濃度下即可抑制3種細菌生長，為綜合效果較好的消毒劑，稀戊二醛溶液需適當提高濃度或延長時間才能有效抑菌；聚維酮碘溶液在高濃度下才可有效抑菌，低濃度下存在抑菌無效的情況。3種消毒劑對沙門氏菌、葡萄球菌抑菌效果相對較好，對大腸桿菌抑菌效果相對較差。

聚維酮碘溶液在最大稀釋度1∶100時尚無抑菌效果，因此對消毒劑A重新選擇稀釋度稀釋。在實際消毒中，考慮到部分消毒劑具有逐漸揮發(fā)或避光保存等特點，而且該試驗中細菌是完全浸泡在一定濃度下的消毒劑中，與實際的應用環(huán)境有些許差別。因此，建議3種消毒劑的工作濃度為100%殺滅細菌的稀釋度，即消毒劑A 1∶10；消毒劑B 1∶100；消毒劑C 1∶200。另外,在實際消毒環(huán)境中細菌的含量各不相同，結(jié)果的準確性也有待進一步研究。故在具體消毒時，可根據(jù)消毒的對象性質(zhì)、受污染的程度等因素，選擇合適的消毒劑、有效的濃度、足夠的作用時間，以確保達到很好的消毒效果。理想的消毒劑應該是高效、低毒、價廉［6］。目前市場供應的消毒劑要達到這一理想標準是很難的，就毒性而言，許多消毒劑或多或少地存在一定毒性，因此，正確選擇與使用消毒劑對畜禽生產(chǎn)者來說就顯得比較重要［7］。

［1］邱梅，郝智慧，龐云露，等.國內(nèi)外獸用消毒劑的研究現(xiàn)狀與發(fā)展趨勢［J］.中國獸藥雜志，2011，45（6）: 43-47.

［2］陳小強，王晶鈺，張中航，等.規(guī)?；u場消毒劑的篩選與消毒效果評價［J］.動物醫(yī)學進展，2011，32（11）：85-89.

［3］巴劍波，劉玉明，殷明，等.聚維酮碘的理化性能及其消毒應用研究進展［J］.中國消毒學雜志，2009，（5）：548-550.

［4］中國獸藥典委員會.中華人民共和國獸藥典［M］．2010年版.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2011.

［5］喬軍，孟慶齡.運用OD值法進行細菌計數(shù)的研究［J］．中國家禽，1996，（4）：26-27.

［6］甘孟候，趙余放，周蛟，雞病防治［M］.北京：農(nóng)業(yè)出版社.1992.

［7］計慧琴，王丙云，陳志勝，等.常用消毒劑對 H3N2豬流感病毒的殺滅效果［J］.畜牧與獸醫(yī)，2014，46（1）：89-91.

S859.79＋9.1

：B

：1004-5090（2017）01-0006-02

2016-10-30）