田婭王素萍石遵銘陳晶羅文輝

（1.湖北省大冶市農產品質量安全管理辦公室 435100；2.湖北省大冶市農業(yè)執(zhí)法大隊 435100；

3.湖北省大治市陳貴鎮(zhèn)農業(yè)技術服務中心 435124；4.湖北省大冶市微生物實驗站 435100；5.湖北省大冶市植保站 435100）

葉菜類農藥殘留快速檢測方法

田婭1王素萍2石遵銘3陳晶4羅文輝5

（1.湖北省大冶市農產品質量安全管理辦公室 435100；2.湖北省大冶市農業(yè)執(zhí)法大隊 435100；

3.湖北省大治市陳貴鎮(zhèn)農業(yè)技術服務中心 435124；4.湖北省大冶市微生物實驗站 435100；5.湖北省大冶市植保站 435100）

利用有機磷和氨基甲酸酯農藥對乙酰膽堿酯酶的活性的抑制作用，使這種酶在含有有機磷和氨基甲酸酯農藥殘留的蔬菜樣品中不能被水解，從而無顯色反應原理，采用吸光度對比法計算抑制率，判斷葉菜類蔬菜中是否存在有機磷和氨基甲酸酯類農藥的殘留，方法簡便、快捷、經濟，是保障農產品質量安全的重要手段。

葉菜；有機磷；氨基甲酸酯；農藥殘留；快速檢測

葉菜類富含維生素、無機鹽、粗纖維等多種營養(yǎng)成份，是人民日常生活中不可缺少的蔬菜，因生長嫩綠，易致菜青蟲、小菜蛾、斜紋夜蛾、甜菜夜蛾等多種害蟲為害，農民噴施農藥防治不可避免。隨著人民生活水平的不斷提高，人們對食品安全越來越關注。為保證葉菜類的質量安全，加強農藥殘留的檢測工作勢在必行。由于葉菜類產量高，品種多，種植點多面廣，樣品數量很大?？焖贆z測以其方法簡便、快捷、經濟、適用的特點，特別適合對葉菜中有機磷和氨基甲酸酯農藥殘留檢測，已成為保障葉菜產品質量安全的重要手段。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試劑材料及規(guī)格

緩沖試劑粉7.5g；乙酰膽堿酯酶粉0.1mg；底物粉125mg；顯色劑粉120mg。

1.1.2 儀器

農殘快速測定儀，波長412nm；冰箱；恒溫箱；振蕩器。

1.1.3 檢測工具

電子天平、燒杯、試管、剪刀、吸管、刻度滴管、移液器、比色皿、計時器。

1.2 方法

1.2.1 抽樣方法

在蔬菜成熟上市前，根據地形情況確定取樣方法。采用單對角線、雙對角線、五點式、棋盤式和蛇形式方法抽樣。生產基地種植面積小于10hm2，每1hm2～3hm2設一個抽樣單元；種植面積大于10 hm2，每3hm2～5hm2設一個抽樣單元。設施地每個大棚為一個抽樣單元，每個抽樣單元內抽樣點不少于5個，每個抽樣點面積1m2左右，蔬菜單個個體大于0.5kg時，抽樣樣本不少于10個，單個個體大于1kg時，抽取樣本不少于5個。批發(fā)市場散裝樣視堆高從上、中、下分層抽樣，每層從中間和四角五點取樣。堆垛商品取樣時，在堆垛兩側的不同部位上、中、下和四角抽取相應數量的樣本。

1.2.2 試劑配制方法

a）緩沖溶液

取緩沖試劑粉7.5g，加入500mL蒸餾水或純凈水，溶解攪拌均勻，即得pH=8.0緩沖溶液。

b）酶液

向乙酰膽堿酯酶粉0.1mg瓶中加入3mL緩沖溶液，溶解、混勻即可。4℃下保存，配好的酶液在4℃下可使用7d。切勿冷凍至結冰。

c）底物

向底物粉125mg瓶中加入15mL蒸溜水或純凈水，溶解、混勻即可。4℃下保存，配好的底物在4℃下可使用3d。冷凍保存可使用15d。

d）顯色劑

向顯色劑粉120mg瓶中加入15mL緩沖溶液，溶解、混勻即可。

a）樣品提取

擦掉樣品表面泥土，剪成1cm左右見方的碎片；取樣品1g，放入燒杯或提取瓶中，加入5mL緩沖溶液，振蕩2min；倒出樣品溶液，靜置3min，備用。

b）對照測試（空白溶液測試）

在試管中加入2.5mL緩沖液，再加入0.1mL酶液、0.1mL顯色劑，搖勻，置于37℃恒溫箱中放置15min；取出后加入0.1mL底物搖勻，立即倒入比色皿中并放入儀器比色池中進行對照測試，測試時間以3min為準。

c）樣品測試

用定量移液器吸取2.5mL樣品溶液于試管中，依次加入0.1mL酶液，0.1mL顯色劑，搖勻后置于37℃恒溫箱中放置15min；取出后加入0.1mL底物搖勻，立即倒入比色皿中并放入儀器比色池中進行樣品測試，測試時間以3min為準。

d）計算方法

此外，黑水虻幼蟲體內還發(fā)現了大量其它的抗菌物質，例如月桂酸、蛋白酶、P450解毒酶、水解酶等，經免疫反應產生的BF64抗菌蛋白和BD2抗菌蛋白，具有特別強的抗菌能力，是青霉素的幾百倍。黑水虻幼蟲體內豐富的抗菌物質，使其在醫(yī)藥領域具有廣闊的應用前景，可以開發(fā)制備更多具有抗菌、保健的醫(yī)藥產品。

式中：

△A空白：對照溶液反應3min吸光度變化值；

△A樣品：樣品溶液反應3min吸光度變化值。

2 結果與分析

2.1 檢測原理及內容

乙酰膽堿酯酶水解后，水解產物可與顯色劑反應產生顏色，有機磷和氨基甲酸酯類農藥可以抑制乙酰膽堿酯酶的活性，使這種酶不能被水解，從而無顯色反應。根據這個原理，利用膽堿酯酶的催化反應的抑制法，通過顏色變化直觀檢測方法，快速檢測葉類蔬菜中有機磷農藥殘留或氨基甲酸酯類農藥殘留。

2.2 檢測結果

根據樣品和對照中的吸光度變化值的檢測，按抑制率計算方法，檢測結果抑制率大于50%時檢測結果為陽性，注意對于陽性樣品要有2次以上重復檢測。

2.3 判定依據和標準

樣品檢測為陽性，依據GB2763-2014進行判定，為有機磷或氨基甲酸酯類農藥殘留超標。監(jiān)測項目全部合格者，判定為“該產品所檢項目符合GB2763-2014的要求”。

3 問題與探討

3.1 操作與試劑保存

a）溶解、配制試劑時要小心操作，注意不能使瓶蓋上沾染的部分試劑粉末損失，以免影響檢測精確程度。

b）顯色時間3min時，對照測試（空白溶液測試）吸光度變化應在0.3以上。

c）試劑溶解前冷凍保存的保質期為1年；冷藏保存時間不建議過長。

d）酶粉溶解后要盡快用完，可短期冷藏保存；如1星期內不能用完，應冷凍保存，但反復凍融不可超過3次，冷凍保存不超過30d。

e）底物和顯色劑溶解后需冷藏保存，保持期1個月；可冷凍長期保存。

3.2 特種蔬菜檢測方法

蔥、蒜、蘿卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中，因為含有色素、纖維素、次生物質等較多的蔬菜樣品在農藥殘留檢測過程中會導致假陽性比較高，一般建議的處理如下方式：

a）對一些含葉綠素較高的蔬菜（如：香菜、韭菜）等可采取整株（體）蔬菜浸提的方法，減少色素的干擾；

b）含色素明顯的蔬菜樣品（如：蘿卜）在樣品處理中，加1g～2g活性碳振蕩過濾2min，然后提取濾液中的上清液檢測；

c）含纖維素多的蔬菜樣品（如：茭白）等在樣品處理過程中，用密性濾紙過濾，然后提取濾液中的上清液檢測。

[1]中華人民共和國國家質量監(jiān)督檢驗檢疫總局，中國國家標準化管理委員會GB/T 5009.199-2003.

[2]中華人民共和國國家質量監(jiān)督檢驗檢疫總局，中國國家標準化管理委員會GB 2763-2014.

[3]蔣新.果蔬中有機磷農藥殘留快速檢測方法研究進展[J].農業(yè)災害研究,2013,3（07）:55-57.

[4]劉亞平,張金艷,孫東立.酶抑制率法在4種蔬菜農藥殘留快速檢測中的應用[J].安徽農業(yè)科技,2014,42（2）：427-428,470.

S131+2

B

1005-6114（2017）01-010-003

2016-07-25

田婭（1987-），女，助理農藝師，從事農產品農藥殘留檢測工作。