段煜+裴科+蔡皓+范愷磊+劉曉+蔡寶昌

[摘要]藥對具有復(fù)方配伍的最基本特點，是復(fù)方配伍中的最小單元。近年來，藥對研究一直備受廣泛關(guān)注，它是中醫(yī)藥現(xiàn)代化過程中不可或缺的一部分。隨著新藥創(chuàng)制效率的降低，如何從傳統(tǒng)的中藥藥對中挖掘新藥也一直是藥物研發(fā)的難點之一。該文綜述了近年的國內(nèi)外文獻，總結(jié)并歸納了藥對研究的現(xiàn)狀及問題。以此為基礎(chǔ)，創(chuàng)新性地提出了“精準藥對”的概念?！熬珳仕帉Α辈煌谝酝饔脧V和藥效不明確的藥對或復(fù)方，而是基于某種特定的疾病而開發(fā)的新的小藥對，它作用明確且成分相對清楚。此外，作者還提出了“藥對-結(jié)合柱色譜分離和細胞相關(guān)的成分譜篩選-模糊靶標識別藥理學-精準藥對再評價”的新策略，并成功將其應(yīng)用于黃芪-山茱萸治療糖尿病腎病的精準藥對開發(fā)中。這種新策略簡單、易操作且適用范圍廣，可為藥對的現(xiàn)代研究及新藥的研發(fā)提供借鑒和思考。

[關(guān)鍵詞]藥對； 精準藥對； 新藥創(chuàng)制； 新策略

[Abstract]As the smallest unit of traditional Chinese medicinal formula compatibility， herb-pair has the basic characteristic of traditional Chinese medicinal formula compatibility. In recent years， herb-pair investigation has attracted much attention， which is an indispensable part of modernization of traditional Chinese medicine. With the decrease of the efficiency in the discovery of new drug， how to discover new drugs from traditional Chinese medicinal herb-pair has also been a bottleneck for the research and development of drug. The authors reviewed the domestic and foreign literatures in the latest years and summarized the current situations and the existing problems of herb-pair study. Based on these investigations， the authors innovatively proposed a novel concept of "precision herb-pair". Difference from traditional Chinese medicinal herb-pair or formulae with extensive roles and unclear efficacies， "precision herb-pair" belongs to a developed new mini herb-pair formula with an exact treatment and a relatively clear composition based on a certain specific disease. In addition， the authors also proposed a new strategy of "herb-pair - screen of multiple constituents based on column separation andin vitro cell viability - fuzzy target recognition pharmacology - re-evaluation of precision herb-pair"， and successfully applied it to the development of a precision herb-pair from Astragali Radix-Corni Fructus in treatment of diabetic nephropathy. This proposed new strategy is simple， easy to carry out， and has a wide application， and can offer references and thoughts for the modern investigation of herb-pair and the research and development of new drug.

[Key words]herb-pair； precision herb-pair； discovery of new drug； new strategy

doi：10.4268/cjcmm20162106

“藥有個性之特長，方有合群之妙用”，復(fù)方配伍一直是中醫(yī)臨床用藥的最大特色^[1]。眾所周知，藥對具有復(fù)方配伍的最基本特點，其組成簡單，是復(fù)方配伍中的最小單元。近年來，藥對研究一直受到高度關(guān)注和重視。藥對作為復(fù)方和單味藥之間的橋梁，對其透徹的研究將有助于盤活中醫(yī)藥的整體理論和推動中醫(yī)藥現(xiàn)代化的進程。然而，目前藥對的研究方式較為混亂，沒有一個統(tǒng)一的思路或標準。許多藥對的研究仍然停留在過去單味藥或者復(fù)方的思路上。例如大部分藥對的質(zhì)量控制仍然停留在單味藥的成分控制上，并沒有深入挖掘藥對的內(nèi)在科學內(nèi)涵，這顯然是不科學的。近年來，西藥“點對點”的新藥創(chuàng)制效率正逐步呈現(xiàn)出下降的趨勢^[2]，而隨著藥對的臨床治療效果逐漸受到廣泛的認可，越來越多的人把創(chuàng)制新藥的目光投向了藥對。如何建立藥對新的和更通用的研究模式，如何開展藥對更好的評價方法，如何以藥對為基礎(chǔ)挖掘更好的新藥，這些都是亟待解決的關(guān)鍵問題。

黃芪為豆科植物蒙古黃芪Astragalus membranaceus（Fisch.）的干燥根，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，具有補氣固表和益氣活血等功效。山茱萸為山茱萸科植物山茱萸Cornus officinalisSieb. et Zucc.的干燥成熟果肉，具有補益肝腎和澀精固脫等功效。黃芪-山茱萸為中醫(yī)學界近現(xiàn)代專家張錫純臨床常用藥對，二藥伍用，氣陰雙補，益氣固澀之功增強，用于治療糖尿病腎病的案例已明確記載于《張錫純對藥》中^[3]。但該藥對在臨床使用中同樣面臨著許多問題，諸如配伍比例混亂，藥味劑量不明確，治療效果缺乏理論依據(jù)等，嚴重制約了黃芪-山茱萸的臨床使用。

藥對作為中醫(yī)藥學的一大特色，其在臨床上的確切療效已得到廣泛共識。但其研究過程中面臨的諸多問題也同樣不容忽視。藥對數(shù)量眾多，收載范圍廣泛，如果點對點的采用單一窮盡的研究方式顯然是不現(xiàn)實的。因此，找到一種藥對研究的共性策略并將研究過程模式化的方法勢在必行。如今西方精準醫(yī)療正逐步受到重視^[4]，而以往傳統(tǒng)的藥對總是“一對多”的治療方式，相同的藥對在臨床上往往可用于治療多種疾病，這顯然違背了精準醫(yī)療的范疇。作者首次提出基于某種特定的疾病尋找某個“精準藥對（precision herb-pair）”的概念用于新藥的創(chuàng)制與開發(fā)。作者在歸納和總結(jié)了近年來藥對使用中的常見策略的同時，創(chuàng)新性地提出了“藥對-結(jié)合柱色譜分離和細胞相關(guān)的成分譜篩選-模糊靶標識別藥理學-精準藥對再評價”的研究思路，在一定程度上解決了藥對研究包括新藥創(chuàng)制與開發(fā)過程中的問題，并將此研究思路成功地應(yīng)用到黃芪-山茱萸藥對中，以期豐富藥對的研究模式，推動藥對研究的規(guī)范化和模式化，促進藥對中新藥的深度挖掘。

1 藥對研究現(xiàn)狀及問題

目前臨床上有很多的經(jīng)典案例都已證明藥對具有較好的療效。明確收載藥對臨床治療功效的古籍眾多，常見的有《太平圣惠方》、《普濟局方》和《張錫純對藥》等。這些古籍或近現(xiàn)代專著提供了一個良好的研究基礎(chǔ)，但由于其數(shù)量眾多且復(fù)雜，同樣也讓研究者在研究過程中面臨著巨大的挑戰(zhàn)。該文選取了12種典型的藥對，見表1，高度概括了目前藥對研究過程中所運用的常見策略。這些研究方法在一定程度上解決了藥對研究過程中遇到的問題。

1.1 藥對研究現(xiàn)狀具有的趨勢和優(yōu)勢

1.1.1 先進分析儀器的使用正逐步得到普及

眾所周知，許多單味中藥本身的成分非常復(fù)雜，更不必說藥對中成分研究的難度。藥對中成分不僅數(shù)量眾多，而且許多含量極低，過去過分依賴“高效液相色譜法”的做法已飽受詬病。令人欣喜的是當今藥對中成分的分析手段正從過去的“色譜時代”逐漸過渡到現(xiàn)在的“質(zhì)譜時代”?？蒲泄ぷ髡吣壳耙迅邮炀氂诟鶕?jù)化合物的性質(zhì)選擇合適的儀器去開展分析研究工作。如分析范圍更廣和精度更佳的LC-MS的使用^[17]，針對揮發(fā)性成分的GC-MS的采用^[18]以及專屬性更強的NMR的運用等^[7]，在一定程度上解決了藥對研究過程中“成分分析難”的問題。

1.1.2 系統(tǒng)生物學的運用正逐步引起重視

由于藥對治療疾病的機制十分復(fù)雜，近年來，越來越多的科研工作者嘗試從組學的角度去闡釋藥對的功效物質(zhì)基礎(chǔ)^[19]?；蚪M學、蛋白質(zhì)組學、轉(zhuǎn)錄組學，特別是代謝組學等多元化組學研究手段正日益受到重視。有學者運用代謝組學的研究方式采用UHPLC-Q-TOF-MS測定了用當歸-川芎藥對治療再生障礙性貧血大鼠前后血液和尿液中內(nèi)源性小分子物質(zhì)的差異，發(fā)現(xiàn)了13種差異性的小分子物質(zhì)，揭示了當歸-川芎造血功能的機制^[20]。越來越多的經(jīng)典案例將系統(tǒng)生物學的研究手段成功地運用到藥對的研究中，在一定程度上將“中藥藥效的復(fù)雜問題”簡單化和可視化。

1.1.3 分子生物學的介入正逐步受到青睞

分子生物學在西藥研究過程中的運用成熟已久。藥對過去一直因其“多成分和多靶點”治療的復(fù)雜性而多采用整體的和行為學的簡單藥效評價模式。但令人欣慰的是當今藥對的藥效評價模式正從過去的“整體行為學時代”逐漸過渡到現(xiàn)在的“分子生物學時代”?？蒲泄ぷ髡咭阎鸩搅晳T從蛋白、基因和通路等方面深入地評價藥對的藥效機制。有學者揭示了知母-黃柏藥對在治療糖尿病肌肉萎縮中所具有的獨特優(yōu)勢。而這種治療過程可能與激活mTOR通路有關(guān)^[21]。可以看出分子生物學研究手段的介入不僅豐富了藥對治療疾病的理論支撐，而且使藥對治療的特色更易被理解和信服。

1.1.4 體內(nèi)過程的評價模式正逐步獲得認可

藥對的體外成分眾多，很難想象如此眾多的成分在體內(nèi)經(jīng)過眾多轉(zhuǎn)化后產(chǎn)物的復(fù)雜性。雖然體內(nèi)過程十分復(fù)雜，但必須在現(xiàn)有的條件下去解決這個問題。眾所周知，只有吸收進入血液中的成分（血中移行成分）才是中藥在體內(nèi)直接作用的物質(zhì)，才有可能成為中藥作用的物質(zhì)基礎(chǔ)。有學者采用UHPLC-Q-TOF-MS比較了麻黃-杏仁藥對和單味藥麻黃以及單味藥杏仁在體內(nèi)5種藥代動力學過程的差異，揭示了藥對配伍在成分進入體內(nèi)的優(yōu)勢^[22]。還有學者采用PK-PD相關(guān)分析的手段開展了體內(nèi)成分的研究^[11]?？梢韵嘈?，伴隨著體內(nèi)過程評價方式的成熟，藥對的研究和評價正逐步向著更加精細化的方向發(fā)展。

1.2 藥對研究過程中面臨的挑戰(zhàn)和必須要解決的問題

1.2.1 “成分黑箱問題”仍普遍存在

在藥對的研究過程中，雖然一直強調(diào)其成分的復(fù)雜性和研究的困難性，但這并不意味著藥對中的指標性成分可以和單味藥的指標性成分混為一談。許多研究者在研究藥對中成分的變化時仍主要關(guān)注單味藥的指標性成分。例如，在研究A藥和B藥組成的藥對時，很多研究者仍習慣于僅關(guān)注A藥和B藥在《中國藥典》中的3～5個質(zhì)控成分，這顯然是不科學和不準確的。

1.2.2 藥對中“有效成分”的概念仍不明確

藥對中“有效成分”的概念十分重要，采用先進的分析儀器可使鑒別出的成分增多。但到底什么樣的成分是“有效成分”。有些研究者仍將 “有效成分”等同于“變化了的成分”，這顯然是不科學的。藥對配伍中成分含量的增加或減少以及成分的消失或新成分的生成并不意味著其就一定是“有效成分”，“有效成分”的研究必須與藥效相關(guān)。

1.2.3 “配伍比例”仍較為混亂

“配伍比例”是藥對協(xié)同增效治療疾病的關(guān)鍵所在。目前許多藥對的研究并不十分重視“配伍比例”。許多研究者仍將藥對的“配伍比例”等同于藥對在其對應(yīng)復(fù)方中的比例，這顯然是不科學的。藥對脫離了其在原來復(fù)方中的背景，其最佳的“配伍比例”有可能會發(fā)生相應(yīng)的改變。一個合適的“配伍比例”也許能發(fā)揮藥對更大的治療作用。

1.2.4 “藥效評價模式”仍十分單一

眾所周知，藥對治療疾病的另一大優(yōu)勢是其多靶點的特征。但目前評價藥效的方式仍十分孤立和單一，切不可將藥對的藥效評價模式等同于西藥的藥效評價模式。

1.2.5 “基于藥對開發(fā)新藥”的戰(zhàn)略仍不夠理想

任何醫(yī)藥研究的最終目的都是為了獲得更好的可應(yīng)用于臨床治療的藥物。但目前藥對的研究仍主要聚焦在基礎(chǔ)研究，缺乏新藥開發(fā)的策略。

1.2.6 過于分散的“研究途徑”仍缺乏系統(tǒng)化

雖然藥對研究目前備受關(guān)注，但研究仍過于分散。成千上萬種藥對采用零星的和不同的方式去研究，將會是一件非常耗時和耗力的工程，效果的好壞也很難定論。因此，必須找到藥對研究的共性策略并將它規(guī)范化和模式化，使藥對研究能更加有效地開展下去。

2 藥對研究模式新策略

2.1 結(jié)合柱色譜分離和細胞相關(guān)的成分譜篩選

本課題組針對藥對研究現(xiàn)狀中的優(yōu)勢和問題，揚長避短，創(chuàng)新性地提出了結(jié)合柱色譜分離和細胞相關(guān)的成分譜篩選策略，并將其成功地運用到黃芪-山茱萸藥對的研究中^[23]。如今，與中藥相關(guān)的臨床產(chǎn)品一般是采用復(fù)方或從單味藥中開發(fā)的活性成分（單體）用于疾病的治療，雖然取得了一定的效果，但仍然存在著眾多突出的問題，諸如療效廣泛，不易服用、儲藏和攜帶等。特別是成分不明確所帶來的“黑箱問題”一直困擾著中醫(yī)藥的創(chuàng)新和發(fā)展。本課題組通過近年的努力，試圖尋找到更好的替代物去替代傳統(tǒng)的復(fù)方，而精準藥對即是最為器重的方式。如何獲得精準藥對。如何去證實這就是基于原復(fù)方挖掘出來的最好替代物。首先需要得到各種不同的結(jié)構(gòu)類型相似的化合物群。這時候就需要采用柱色譜去進行分離。舉個例子，如需得到黃酮類型化合物的集合，就可以考察聚酰胺和不同型號的大孔樹脂以及洗脫條件來確定此種類型化合物集合的最佳工藝。以此類推，還可以得到其他多種結(jié)構(gòu)類型相似的化合物群。根據(jù)得到的不同化合物群進行隨機統(tǒng)計學組合得到一系列新的小藥對復(fù)方。這時候特定的細胞相關(guān)的成分譜篩選就可以解決以下2個問題：①通過對細胞造模后加入不同組合的小藥對復(fù)方細胞損傷改善情況的觀察，從體外的角度揭示哪種新的小藥對最佳；②找到有研究必要的、與疾病改善密切相關(guān)的成分。筆者所采用的成分譜篩選其實就是將成分群中的各種已知的若干成分的“峰信號”與“細胞中變化了的指標”進行相關(guān)?！胺逍盘枴笨梢酝ㄟ^對各個成分峰面積的處理進行標準化，然后再與變化了的指標進行Pearson相關(guān)分析，以此得到的指標性成分可以很好地對精準藥對的質(zhì)量進行控制?，F(xiàn)將研究過程中的相關(guān)思路歸納如下，以供其他藥對研究工作者參考。

2.1.1 成分譜的深入挖掘是基礎(chǔ)

“成分黑箱問題”仍普遍存在，既然不能片面地研究單味藥的幾個孤立的指標性成分，那就必須盡可能多地歸納出藥對中現(xiàn)有的已知成分群。常見可供挖掘的數(shù)據(jù)庫有PubMed， SciFinder， CNKI等?，F(xiàn)將典型的黃芪-山茱萸成分群歸納如下。

2.1.1.1 多糖類成分群 葡聚糖和雜多糖是黃芪多糖的主要組成部分。Shimizu等^[24]從蒙古黃芪中分離得到平均相對分子質(zhì)量為76 kDa的黃芪多糖AMon-S。Xu等^[25]通過黃芪水提液蛋白沉淀和離子交換色譜以及凝膠色譜分離得到相對分子質(zhì)量分別為1 699.1，1 197.6 kDa的黃芪多糖Ⅰ和黃芪多糖Ⅱ。Yin等^[26]通過雙水相系統(tǒng)和高速逆流色譜純化分離得到平均相對分子質(zhì)量為1 095 kDa的多糖。

2.1.1.2 黃酮類成分群 黃芪中黃酮類物質(zhì)的分類與其他植物有所不同，主要為異黃酮類。Zhang等^[27]分離得到新的異黃酮類物質(zhì)6″-O-乙酰基毛蕊異黃酮葡萄糖苷和6′-O-乙?；?3-O-葡萄糖苷。Xiao等^[28]通過高速逆流色譜分離得到5種黃酮類化合物，分別為毛蕊異黃酮葡萄糖苷、芒柄花苷、9，10-二甲氧基紫檀烷-3-O-葡萄糖苷、黃芪異黃烷苷和6″-O-乙酰基毛蕊異黃酮葡萄糖苷。Qi等^[29]通過質(zhì)譜碎片檢測到黃芪中的黃芪異黃烷和芒柄花素等異黃酮類物質(zhì)。

2.1.1.3 皂苷類成分群 黃芪中皂苷類成分群的結(jié)構(gòu)均屬于四環(huán)三萜類皂苷。Hirotani等^[30]從黃芪中分離得到最基本也是現(xiàn)在最廣泛熟知的黃芪皂苷Ⅰ、黃芪皂苷Ⅱ、黃芪皂苷Ⅲ和黃芪皂苷Ⅳ。Nalbantsoy等^[31]分離并評估了黃芪皂苷Ⅶ和Mac B的活性。Zhang等^[32]首次從黃芪中分離并鑒別出astroolesaponins A和astroolesaponins B等皂苷類物質(zhì)。

2.1.1.4 環(huán)烯醚萜苷類成分群 山茱萸環(huán)烯醚萜苷類成分一直備受人們關(guān)注。Liang等^[33]采用高速逆流色譜從山茱萸中分離得到3種環(huán)烯醚萜苷類成分，分別為馬錢苷、莫諾苷和獐牙菜苷。Ma等^[34]從山茱萸中分離得到2種新的環(huán)烯醚萜苷類物質(zhì)，分別為logmalicids A和logmalicids B。Lin等^[35]分離得到山茱萸新苷并檢測了其抗糖尿病的活性。

2.1.2 體外模型的合理選擇是前提

成分的選擇必須與活性相關(guān)，脫離活性的成分研究是毫無意義的。成分譜的篩選亦如此。如何選擇一個合適和精準的體外細胞模型是“結(jié)合柱色譜分離和細胞相關(guān)的成分譜篩選”能否成功的前提。以治療糖尿病腎病為例，有報道稱可通過抑制腎小球系膜細胞中的過度激活的NF-κB通路來改善糖尿病腎病的腎小球纖維化^[36]。Zhou等^[37]報道可通過激活FXR受體來抑制腎小球系膜細胞中的TGF-β/smad信號通路，從而減輕糖尿病腎病的進程。Huang等^[38]報道可通過激活Sirt1-Nrf2-ARE通路來抵抗腎小球系膜細胞中的FN和TGF-β1的過渡表達，從而延緩糖尿病腎病的進程。腎小球系膜細胞的病變已成為糖尿病腎病發(fā)生和發(fā)展的中心環(huán)節(jié)，高糖誘導(dǎo)腎小球系膜細胞的增殖作為糖尿病腎病的體外模型已逐漸被人們認可。因此，選用該模型開展黃芪-山茱萸藥對成分譜的篩選是合理的。

2.1.3 “精準藥對”概念的提出是核心

任何醫(yī)藥研究的最終目的都是為了更好地服務(wù)于臨床和為人類健康做出貢獻。而以往藥對的研究過于重視理論，卻忽視了如何去尋找更好的藥物。因此，在藥對的研究過程中應(yīng)更加注重新藥的開發(fā)。筆者首次提出了“精準藥對”的概念并將它成功地應(yīng)用于黃芪-山茱萸藥對的開發(fā)中^[23]?！熬珳仕帉Α辈煌谝酝饔脧V和藥效不明確的藥對或復(fù)方，而是基于某種特定的疾病而開發(fā)的新的小藥對，它作用明確且成分相對清楚。

2.1.4 統(tǒng)計學等交叉學科的運用是關(guān)鍵

藥對研究是一項非常復(fù)雜的工作，成分譜的篩選更是極具挑戰(zhàn)性。如果僅局限于醫(yī)藥研究中運用的儀器和方法是遠遠不夠的，必須強調(diào)多學科的交叉和協(xié)同作用的發(fā)揮。鑒于成分譜的篩選可以看做是一種極其復(fù)雜的數(shù)據(jù)篩選過程，因此數(shù)據(jù)處理所運用的統(tǒng)計學相關(guān)學科就顯得尤為重要，而其中的主成分分析（PCA）則是經(jīng)常運用的一種數(shù)據(jù)處理方法。Brereton等^[39]指出PLS-DA在復(fù)雜數(shù)據(jù)處理和分類過程中具有非常明顯的作用，但必須要解決好過飽和的問題。Sah等^[40]強調(diào)了響應(yīng)面法在藥物釋放過程中參數(shù)優(yōu)化所體現(xiàn)的重大作用。所以必須根據(jù)具體的情況選擇合適的統(tǒng)計學工具，以避免數(shù)據(jù)處理過程中出現(xiàn)“假陽性”或“假陰性”結(jié)果。

2.2 模糊靶標識別藥理學

該文提出的“精準藥對”針對的是基于某種特定的疾病而開發(fā)的新的小藥對，它作用明確且成分相對清楚，不同于以往作用廣和藥效不明確的藥對或復(fù)方。那為何又提出“模糊靶標識別”呢？傳統(tǒng)復(fù)方雖有很多顯而易見的缺點，但“多成分和多靶點”的作用方式一直是其有別于西藥“單一靶點”作用方式的獨特優(yōu)勢。許多復(fù)雜疾病，如糖尿病和免疫系統(tǒng)疾病的發(fā)病過程均是受到多種靶標環(huán)節(jié)調(diào)控失衡的共同結(jié)果。筆者所提出的“精準藥對”針對的是某種特定的疾病而非某種特定的靶點。因此，精準藥對保留了原復(fù)方“多成分和多靶點”的優(yōu)勢。但同時，又面臨著一個不可回避的問題，即：“精準藥對”如何來評價？傳統(tǒng)的藥理評價模式針對的是單一靶點或孤立地看待幾個靶點，采用這種模式對“精準藥對”進行評價顯然是不合適的?；诖?，筆者提出了一個新的“模糊靶標識別”的藥理評價模式。這種新的評價模式不僅適用于評價筆者所倡導(dǎo)的“精準藥對”，同時也適用于評價其他傳統(tǒng)天然產(chǎn)物治療疾病的優(yōu)劣。此時，又面臨另一個新的問題，即：“模糊靶標”如何來選擇?；谀撤N疾病，筆者選擇了各種被公認的表型指標（這些指標均是已被證實與疾病密切相關(guān)的），在評價之前均把它們看成具有同等的重要性（因為此時并不知道對于精準藥對來說，哪個指標更重要，所以說其模糊）。然后通過各種統(tǒng)計學方法來評價組合的精準藥對和其他組合物的優(yōu)劣，并同時識別出最重要的一個或幾個表型指標。這些最重要的表型指標所相關(guān)的蛋白分子靶標此時可以進一步通過細胞實驗來評價“精準藥對”的優(yōu)劣。筆者所提出的這種“模糊靶標識別”策略實質(zhì)上是通過表型指標為橋梁，最終把最重要的、真正的蛋白分子靶標給識別出來?；诖?，本課題組提出了模糊靶標識別藥理學的策略，并將其成功地運用到黃芪-山茱萸藥對的研究中^[41]?，F(xiàn)將研究過程中的相關(guān)思路歸納如下，以供其他藥對研究工作者參考。

2.2.1 盡可能多的靶標識別是關(guān)鍵

2.2.1.1 “三多一少”靶標 “多飲、多食、多尿、體重減輕”所代表的“三多一少”特征是糖尿病腎病病人所面臨的最基本的癥狀，這一認識已得到廣泛的共識^[42-43]。

2.2.1.2 “氧化應(yīng)激”靶標 Miranda-Díaz等^[44]指出氧化應(yīng)激在患有早期慢性腎臟疾病的糖尿病腎病中發(fā)揮著重要的作用。氧化應(yīng)激引起活性氧自由基的堆積，從而加重腎臟疾病的發(fā)展。Hou等^[45]發(fā)現(xiàn)可通過激活線粒體上的四肽SS-31來改善糖尿病腎病中的氧化應(yīng)激狀態(tài)，從而緩解糖尿病腎病的發(fā)展進程。

2.2.1.3 “炎癥”靶標 Xie等^[46]發(fā)現(xiàn)黃連素可通過激活RhoA/ROCK信號通路來抑制糖尿病腎病發(fā)展過程中所過度激活的炎癥狀態(tài)。Uzun等^[47]通過特定的專屬性炎癥因子發(fā)現(xiàn)糖尿病腎病中PTX-3的狀態(tài)有著較大作用，從另一方面證實了炎癥狀態(tài)在糖尿病腎病的發(fā)展過程中發(fā)揮著關(guān)鍵的作用。

2.2.1.4 “足細胞損傷”靶標 Hyvnen等^[48]指出CD2AP蛋白在足細胞損傷中發(fā)揮的作用可減輕糖尿病腎病的發(fā)展。Gluhovschi等^[49]通過尿液中出現(xiàn)的足細胞等特征證實了足細胞的完整性與否決定了糖尿病腎病的嚴重程度，充分證實了足細胞是糖尿病腎病治療的一個重要靶標。

2.2.1.5 “高血脂”靶標 Wang等^[50]指出血脂紊亂是糖尿病腎病發(fā)生和發(fā)展過程中重要的危險因素，厄貝沙坦能通過改善血脂環(huán)境來調(diào)節(jié)糖尿病腎病的腎臟功能。Zhang等^[51]通過小鼠注射游離脂肪酸發(fā)現(xiàn)FGF21能改善糖尿病腎病的高血脂環(huán)境。

2.2.1.6 “高血糖”靶標 糖尿病腎病發(fā)生過程中的高血糖能誘導(dǎo)腎小球系膜細胞的增殖，1，25-dihydroxyvitamin D3可通過激活DDIT4/TSC2/mTOR來改善這一狀態(tài)^[52]。Katsoulieris等^[53]通過糖尿病腎病的腎小球相關(guān)細胞中胰島素通路特征指標檢測（IR，IRS-1等）發(fā)現(xiàn)了高血糖損傷在其中所起的關(guān)鍵作用。

2.2.2 “模糊識別”——距離法是核心

許多藥對研究工作者在研究藥對藥效的過程中大多傾向于特定的靶點或者特定的作用方式，這有背于藥對多靶點的作用效果。藥對與西藥特定的單一靶點的作用方式相比有著很大的不同。因為藥對是在多個環(huán)節(jié)起著協(xié)同的療效，所以在某些復(fù)雜疾病的新藥開發(fā)方面有著它獨特的優(yōu)勢。正是由于藥對這種特有的作用方式，因此在藥效研究過程中必須要挖掘其獨特的研究思路。精準地進行活性篩選和功能定位的最關(guān)鍵步驟是PLS-DA距離法的引入。距離的長短可以體現(xiàn)出不同組合物對疾病調(diào)控的整體貢獻。這種量化的方法可使復(fù)雜疾病的調(diào)控以數(shù)字和圖形的方式形象地展示出來?；诖?，本課題組創(chuàng)新性地建立了PLS-DA藥效模型，將靶標距離法成功地應(yīng)用于黃芪-山茱萸藥對的研究中^[42]。這一研究方式可供其他藥對研究工作者參考。

3 結(jié)語與展望

3.1 精準藥對再評價

“精準藥對”的提出是在傳統(tǒng)醫(yī)藥研究思路上的一種創(chuàng)新和突破，本課題組提出的藥對研究模式新策略的核心基礎(chǔ)就是基于該“精準藥對”的概念（精準藥對的研究模式見圖1）。通過大量的體內(nèi)和體外實驗，筆者已證實了從黃芪-山茱萸藥對中開發(fā)出來的精準藥對CG6（按照多糖-黃酮-皂苷-環(huán)烯醚萜苷精確配比2∶3∶1∶2組合的新的小藥對復(fù)方）無論從成分上還是活性上均優(yōu)于原來的藥對^[23，41]。精準藥對CG6不僅具有明確和突出的藥效，而且成分清晰易于控制。

3.2 展望

雖然提出的“精準藥對”的概念已成功地應(yīng)用于黃芪-山茱萸藥對的研究，且所提出的“藥對-結(jié)合柱色譜分離和細胞相關(guān)的成分譜篩選-模糊靶標識別藥理學-精準藥對再評價”策略已模式化并易于復(fù)制和應(yīng)用于其他藥對的研究中，但清楚地意識到一種新的策略要被廣泛認可變成一種常規(guī)的思路還需要積累更多令人信服的證據(jù)。中醫(yī)藥的研究是一個非常復(fù)雜的過程，如果不對方法進行變革和創(chuàng)新，研究很難取得突破性的進展。本文提出的“精準藥對”其實就是將“配伍藝術(shù)”和“精準藥物”的思路進行高度的結(jié)合。這種“精準藥對”具有許多無與倫比的優(yōu)勢，它易于大生產(chǎn)，質(zhì)量可控且藥效比傳統(tǒng)復(fù)方更佳。還需強調(diào)的是，筆者所提出的“模糊靶標識別藥理學”的策略不僅適用于精準藥對的開發(fā)，同時也適用于傳統(tǒng)中藥或天然產(chǎn)物的再評價。相信通過筆者以及其他醫(yī)藥科研工作者的共同努力，“精準藥對”的概念和產(chǎn)品或許會在將來大量的出現(xiàn)和應(yīng)用于臨床實踐中，然而現(xiàn)在這誰又能說的清楚呢。

[參考文獻]

[1]Wang S P， Hu Y Y， Tan W， et al. Compatibility art of traditional Chinese medicine： from the perspective of herb pairs[J]. J Ethnopharmacol， 2012， 143： 412.

[2]Jiang W Y. Therapeutic wisdom in traditional Chinese medicine： a perspective from modern medicine[J]. Trends Pharmacol Sci， 2005， 26： 558.

[3]劉健. 張錫純對藥[M]. 北京：人民軍醫(yī)出版社，2009.

[4]Prasad V， Gale R P. Precision medicine in acute myeloid leukemia： hope， hype or both？[J]. Leuk Res， 2016， 48： 73.

[5]Xi S Y， Yue L F， Shi M M， et al. The effects of Taoren-Honghua herb pair on pathological microvessel and angiogenesis-associated signaling pathway in mice model of CCl4-induced chronic liver disease[J]. Evid Based Complement Alternat Med， 2016， doi： 10.1155/2016/2974256.

[6]Ma W， Wang W H， Peng Y， et al. Ultra-high performance liquid chromatography with tandem mass spectrometry method for the simultaneous quantitation of five phthalides in rat plasma： application to a comparative pharmacokinetic study of Huo Luo Xiao Ling Dan and herb-pair extract[J]. J Sep Sci， 2016， 39： 2057.

[7]Han B， Huang H Z， Li Z， et al. Therapeutic effects of Chinese medicine herb pair， Huzhang and Guizhi， on monosodium urate crystal-induced gouty arthritis in rats revealed by anti-inflammatory assessments and NMR-based metabonomics[J]. Evid Based Complement Alternat Med， 2016， doi： 10.1155/2016/9398435.

[8]Song S， Ma Q H， Tang Q F， et al. Stereoselective metabolism of amygdalin-based study of detoxification of Semen Armeniacae Amarum in the Herba Ephedrae-Semen Armeniacae Amarum herb pair[J]. J Ethnopharmacol， 2016， 179： 356.

[9]Xiong X G， Peng W J， Chen L， et al. Traditional Chinese medicine Zhiqiao-Houpu herb-pair induce bidirectional effects on gastric motility in rats[J]. J Ethnopharmacol， 2015， 175： 444.

[10]Wang S N， Sun L J， Gu L Q， et al. The comparative pharmacokinetics of four bioactive ingredients after administration of Ramulus Cinnamomi Radix Glycyrrhizae herb pair extract， Ramulus Cinnamomi extract and Radix Glycyrrhizae extract[J]. Biomed Chromatogr， 2016， 30： 1270.

[11]Dong L C， Fan Y X， Yu Q， et al. Synergistic effects of rhubarb-gardenia herb pair in cholestatic rats at pharmacodynamic and pharmacokinetic levels[J]. J Ethnopharmacol， 2015， 175： 67.

[12]Xu G L， Geng D， Xie M， et al. Chemical composition， antioxidative and anticancer activities of the essential oil： Curcumae Rhizoma-Sparganii Rhizoma， a traditional herb pair[J]. Molecules， 2015， 20： 15781.

[13]Song L L， Liu H Y， Wang Y， et al. Application of GC/MS-based metabonomic profiling in studying the therapeutic effects of Huangbai-Zhimu herb-pair （HZ） extract on streptozotocin-induced type 2 diabetes in mice[J]. J Chromatogr B， 2015， 997： 96.

[14]Wang K R， Zhu Z Y， Yang L， et al. Detection， characterization and identification of major constituents in Zhimu-Baihe herb-pair extract by fast high-performance liquid chromatography and time-of-flight mass spectrometry through dynamic adjustment of fragmentor voltage[J]. Rapid Commun Mass Spectrom， 2011， 25： 9.

[15]Han C C， Guo J Y. Antibacterial and anti-inflammatory activity of traditional Chinese herb pairs，Angelica sinensis andSophora flavescens[J]. Inflammation， 2012， 35： 913.

[16]Yang Y， Yin X J， Guo H M， et al. Identification and comparative analysis of the major chemical constituents in the extracts of single fuzi herb and fuzi-gancao herb-pair by UFLC-IT-TOF/MS[J]. Chin J Nat Med， 2014， 12： 542.

[17]Liang Z T， Chen Y J， Xu L， et al. Localization of ginsenosides in the rhizome and root of Panax ginseng by laser microdissection and liquid chromatography-quadrupole/time of flight-mass spectrometry[J]. J Pharm Biomed Anal， 2015， 105： 121.

[18]Li X R， Lian Y Z， Guo F Q. Analysis of volatile oil in Rhizoma Ligustici Chuanxiong-Radix Paeoniae Rubra by gas chromatography-mass spectrometry and chemometric resolution[J]. Acta Pharmacol Sin， 2006， 27： 491.

[19]Cao H X， Zhang A H， Zhang H M， et al. The application of metabolomics in traditional Chinese medicine opens up a dialogue between Chinese and Western medicine[J]. Phytother Res， 2015， 29： 159.

[20]Li W X， Tang Y P， Guo J M， et al. Comparative metabolomics analysis on hematopoietic functions of herb pair Gui-Xiong by ultra-high-performance liquid chromatography coupled to quadrupole time-of-flight mass spectrometry and pattern recognition approach[J]. J Chromatogr A， 2014， 1346： 49.

[21]Zhang J B， Zhuang P W， Wang Y， et al. Reversal of muscle atrophy by Zhimu-Huangbai herb-pair via Akt/mTOR/FoxO3 signal pathway in streptozotocin-induced diabetic mice[J]. PLoS ONE， 2014， 9： e100918.

[22]Song S， Chen F L， Xing X F， et al. Concurrent quantification and comparative pharmacokinetic analysis of bioactive compounds in the Herba Ephedrae-Semen Armeniacae Amarum herb pair[J]. J Pharm Biomed Anal， 2015， 109： 67.

[23]Duan Y， Pei K， Cai H， et al. Bioactivity evaluation-based ultra high-performance liquid chromatography coupled with electrospray ionization tandem quadrupole-time-of-flight mass spectrometry and novel distinction of multi-subchemome compatibility recognition strategy with Astragali Radix-Fructus Corni herb-pair as a case study[J]. J Pharm Biomed Anal， 2016， 129： 514.

[24]Shimizu N， Tomoda M， Kanari M， et al. An acidic polysaccharide having activity on the reticuloendothelial system from the root ofAstragalus mongholicus[J]. Chem Pharm Bull， 1991， 39： 2969.

[25]Xu D J， Xia Q， Wang J J， et al. Molecular weight and monosaccharide composition ofAstragalus polysaccharides[J]. Molecules， 2008， 13： 2408.

[26]Yin J Y， Jiang Z H， Yu H， et al. A new application of an aqueous diphase solvent system in one-step preparation of polysaccharide from the crude water extract of Radix Astragali by high-speed counter-current chromatography[J]. J Chromatogr A， 2012， 1262： 92.

[27]Zhang L J， Liu H K， Hsiao P C， et al. New isoflavonoid glycosides and related constituents from Astragali Radix （Astragalus membranaceus） and their inhibitory activity on nitric oxide production[J]. J Agric Food Chem， 2011， 59： 1131.

[28]Xiao W H， Han L J， Shi B. Isolation and purification of flavonoid glucosides from Radix Astragali by high-speed counter-current chromatography[J]. J Chromatogr B， 2009， 877： 697.

[29]Qi L W， Cao J， Li P， et al. Qualitative and quantitative analysis of Radix Astragali products by fast high-performance liquid chromatography-diode array detection coupled with time-of-flight mass spectrometry through dynamic adjustment of fragmentor voltage[J]. J Chromatogr A， 2008， 1203： 27.

[30]Hirotani M， Zhou Y， Rui H， et al. Cycloartane triterpene glycosides from the hairy root cultures ofAstragalus membranaceus[J]. Phytochemistry， 1994， 37： 1403.

[31]Nalbantsoy A， Nesil T， YI lmaz-Dilsiz O， et al. Evaluation of the immunomodulatory properties in mice andin vitro anti-inflammatory activity of cycloartane type saponins fromAstragalus species[J]. J Ethnopharmacol， 2012， 139： 574.

[32]Zhang Y， Li X X， Ruan J Y， et al. Oleanane type saponins from the stems ofAstragalus membranaceus（Fisch.） Bge. var.mongholicus （Bge.） Hsiao.[J]. Fitoterapia， 2016， 109： 99.

[33]Liang J R， He J， Zhu S， et al. Preparative isolation and purification of iridoid glycosides from Fructus Corni by high-speed countercurrent chromatography[J]. J Liq Chromatogr Relat Technol， 2013， 36： 983.

[34]Ma W， Wang K J， Cheng C S， et al. Bioactive compounds fromCornus officinalis fruits and their effects on diabetic nephropathy[J]. J Ethnopharmacol， 2014， 153： 840.

[35]Lin M H， Liu H K， Huang W J， et al. Evaluation of the potential hypoglycemic and beta-cell protective constituents isolated from Corni Fructus to tackle insulin-dependent diabetes mellitus[J]. J Agric Food Chem， 2011， 59： 7743.

[36]Wang S G， Yang Z Y， Xiong F Q， et al. Betulinic acid ameliorates experimental diabetic-induced renal inflammation and fibrosis via inhibiting the activation of NF-κB signaling pathway[J]. Mol Cell Endocrinol， 2016， 434： 135.

[37]Zhou B S， Feng B， Qin Z X， et al. Activation of farnesoid X receptor downregulates visfatin and attenuates diabetic nephropathy[J]. Mol Cell Endocrinol， 2016， 419： 72.

[38]Huang K P， Chen C， Hao J， et al. Polydatin promotes Nrf2-ARE anti-oxidative pathway through activating Sirt1 to resist AGEs-induced upregulation of fibronetin and transforming growth factor-β1 in rat glomerular messangial cells[J]. Mol Cell Endocrinol， 2015， 399： 178.

[39]Brereton R G， Lloyd G R. Partial least squares discriminant analysis： taking the magic way[J]. Chemometrics， 2014， 28： 213.

[40]Sah A K， Suresh P K. Loteprednol etabonate nanoparticles： optimization via box-behnken design response surface methodology and physicochemical characterization[J]. Curr Drug Deliv， 2016， 13（8）： 1.

[41]Duan Y， Pei K， Cai H， et al. Strategy of integrated evaluation on treatment of traditional Chinese medicine as interaction of system to system and establishment of novel fuzzy target contribution recognition with herb-pairs， a case study on Astragali Radix-Fructus Corni[J]. Mol Cell Endocrinol， 2016， 434： 219.

[42]Shera A S， Miyan Z， Basit A， et al. Trends of type 1 diabetes in Karachi， Pakistan[J]. Pediatr Diabetes， 2008， 9： 401.

[43]Liu K， Xu H Q， Lv G H， et al. Loganin attenuates diabetic nephropathy in C57BL/6J mice with diabetes induced by streptozotocin and fed with diets containing high level of advanced glycation end products[J]. Life Sci， 2015， 123： 78.

[44]Miranda-Díaz A G， Pazarín-Villaseor L， Yanowsky-Escatell F G， et al. Oxidative stress in diabetic nephropathy with early chronic kidney disease[J]. J Diabetes Res， 2016， 2016： 7047238.

[45]Hou Y J， Li S C， Wu M， et al. Mitochondria-targeted peptide SS-31 attenuates renal injury via an antioxidant effect in diabetic nephropathy[J]. Am J Physiol Renal Physiol， 2016， 310： F547.

[46]Xie X， Chang X T， Chen L， et al. Berberine ameliorates experimental diabetes-induced renal inflammation and fibronectin by inhibiting the activation of RhoA/ROCK signaling[J]. Mol Cell Endocrinol， 2013， 381： 56.

[47]Uzun S， Ozari M， Gursu M， et al. Changes in the inflammatory markers with advancing stages of diabetic nephropathy and the role of pentraxin-3[J]. Ren Fail， 2016，doi： 10.1080/0886022X.2016.1209031.

[48]Hyvnen M E， Saurus P， Wasik A， et al. Lipid phosphatase SHIP2 downregulates insulin signalling in podocytes[J]. Mol Cell Endocrinol， 2010， 328： 70.

[49]Gluhovschi C， Gluhovschi G， Petrica L， et al. Urinary biomarkers in the assessment of early diabetic nephropathy[J]. J Diabetes Res， 2016， doi： 10.1155/2016/4626125.

[50]Wang C Y， Min C Y， Rong X L， et al. Irbesartan can improve blood lipid and the kidney function of diabetic nephropathy[J]. Discov Med， 2015， 20： 67.

[51]Zhang C， Shao M L， Yang H， et al. Attenuation of hyperlipidemia-and diabetes-induced early-stage apoptosis and late-stage renal dysfunction via administration of fibroblast growth factor-21 is associated with suppression of renal inflammation[J]. PLoS ONE， 2013， 8： e82275.

[52]Wang H， Wang J M， Qu H， et al.In vitro andin vivo inhibition of mTOR by 1，25-dihydroxyvitamin D3 to improve early diabetic nephropathy via the DDIT4/TSC2/mTOR pathway[J]. Endocrine， 2016， doi： 10.1007/s12020-016-0999-1.

[53]Katsoulieris E N， Drossopoulou G I， Kotsopoulou E S， et al. High glucose impairs insulin signaling in the glomerulus： an in vitro andex vivo approach[J]. PLoS ONE， 2016， 11： e0158873.

[責任編輯 馬超一]