高梓珊，甘君學(xué)，郭江燕，傅淑平

(南京中醫(yī)藥大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院，江蘇 南京 210023)

實(shí)驗(yàn)研究

麥粒灸調(diào)控IL-17對(duì)實(shí)驗(yàn)性RA大鼠血清TNF-a、IL-1b含量影響的研究*

高梓珊，甘君學(xué)，郭江燕，傅淑平

(南京中醫(yī)藥大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院，江蘇 南京 210023)

目的：探索麥粒灸治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)抗炎效應(yīng)的IL-17信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制。方法：雄性SD大鼠66只,隨機(jī)分為空白組、模型組、空白艾灸組、艾灸組、IL-17過(guò)表達(dá)模型艾灸組(IL-17過(guò)艾組)、IL-17沉默模型艾灸組(IL-17沉艾組)、IL-17過(guò)表達(dá)模型組和IL-17沉默模型組，前6組每組各9只，后2組每組各6只。大鼠右后足足墊部皮內(nèi)注入弗氏完全佐劑0.15 ml制作RA模型。造模后第2天進(jìn)行慢病毒注射建立IL-17基因過(guò)表達(dá)、IL-17基因沉默模型。造模后第7天開(kāi)始麥粒灸大鼠“腎俞”“足三里”兩穴各5壯,每日1次,治療18天。觀測(cè)計(jì)算大鼠足跖腫脹度；采用ELISA雙抗夾心法檢測(cè)大鼠血清IL-17、TNF-a、IL-1b含量。結(jié)果：造模后模型組大鼠右后足容積顯著高于空白組(P<0.01)，麥粒灸后艾灸組大鼠右后足容積顯著低于模型組(P<0.01)。造模后模型組大鼠血清IL-17、TNF-a、IL-1b顯著高于空白組；麥粒灸后艾灸組大鼠血清IL-17、TNF-a、IL-1b顯著低于模型組。麥粒灸后IL-17過(guò)艾組大鼠血清TNF-a含量顯著高于艾灸組(P<0.01)；IL-17沉艾組大鼠血清TNF-a含量顯著低于艾灸組、空白組。麥粒灸后IL-17過(guò)艾組、IL-17沉艾組IL-1b含量與艾灸組相比，沒(méi)有顯著性差異。結(jié)論：麥粒灸可能通過(guò)調(diào)控IL-17從而調(diào)節(jié)RA大鼠血清TNF-a含量，起到抑制RA滑膜炎癥的作用。

麥粒灸；類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；IL-17；TNF-a；IL-1b；抗炎

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid arthritis, RA)是一種慢性自身免疫性疾病，其特點(diǎn)是關(guān)節(jié)滑膜的慢性炎性反應(yīng)、軟骨吸收、骨質(zhì)破壞。促炎細(xì)胞因子TNF-a、IL-1b是誘導(dǎo)RA滑膜炎的“中心罪犯”，能夠協(xié)同促進(jìn)RA滑膜炎血管翳增生，引起滑膜后期骨破壞[1-5]。最新的研究表明[6-8]，IL-17是RA重要的促炎因子，在RA急慢性滑膜炎轉(zhuǎn)化及慢性滑膜炎、骨破壞中發(fā)揮重要作用，可能與TNF-a、IL-1b一起協(xié)同加重RA滑膜炎，誘導(dǎo)RA滑膜炎急-慢性轉(zhuǎn)化，促進(jìn)RA后期骨破壞。

大量實(shí)驗(yàn)研究表明，麥粒灸治療RA具有確切抗炎效應(yīng)。其抗炎效應(yīng)的發(fā)揮，是通過(guò)抑制促炎細(xì)胞因子TNF-a、IL-1b的分泌，從而緩解滑膜炎癥,預(yù)防RA后期骨破壞[9-10]。但是，麥粒灸治療RA抗炎效應(yīng)的作用機(jī)制是否有IL-17參與、艾灸是否能夠通過(guò)調(diào)控IL-17抑制滑膜炎的重要促炎因子TNF-a、IL-1b從而發(fā)揮抗炎效應(yīng)，國(guó)內(nèi)研究尚處空白階段，值得進(jìn)一步探索。

本實(shí)驗(yàn)首次應(yīng)用siRNA干擾技術(shù)建立IL-17基因過(guò)表達(dá)、IL-17基因沉默模型，檢測(cè)艾灸對(duì)弗氏佐劑關(guān)節(jié)炎大鼠模型、IL-17基因過(guò)表達(dá)AA大鼠模型、IL-17基因沉默大鼠模型血清IL-17、TNF-a、IL-1b的影響，初步探索IL-17在艾灸抗炎機(jī)制中的作用，進(jìn)一步揭示艾灸治療RA抗炎效應(yīng)的IL-17促炎信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物

選用健康成年SD大鼠66只，體質(zhì)量(200±20)g，雄性，購(gòu)于蘇州西山生物技術(shù)有限公司[實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證編號(hào)：SCXK(H)2113-0003]，飼料由南京安立默科技有限公司提供。動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性馴養(yǎng)3周，動(dòng)物房溫度、濕度分別維持在20°C、70%左右，自由飲食和飲水。

1.2 藥品與試劑

弗氏完全佐劑(FCA，美國(guó)sigma公司生產(chǎn)，批號(hào)Lot88H8804)；大鼠IL-17A基因(NM_001106897.1)(477bp)過(guò)表達(dá);沉默慢病毒試劑(深圳市百恩維生物科技有限公司)；麥粒灸所用60∶1精艾絨(河北衡水醫(yī)療機(jī)械有限公司)；醫(yī)用白凡士林(北京醫(yī)療機(jī)械有限公司)；艾草香(上海醫(yī)療機(jī)械有限公司)；黃芩油膏(江蘇省中醫(yī)院)；75%酒精(南京鑫爾醫(yī)療機(jī)械有限公司)。

1.3 儀器設(shè)備

足容積測(cè)量?jī)x采用成都泰盟科技公司(pv-200足趾容積測(cè)量?jī)x)；脫脂棉球(南京鑫爾醫(yī)療機(jī)械有限公司)；微量注射器(128538069111,上海高歌醫(yī)療機(jī)械有限公司);線手套(南京醫(yī)療機(jī)械有限公司)；充電式剃毛刀(深圳柯德士電器有限公司)。

1.4 動(dòng)物分組

將大鼠用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件程序生成的隨機(jī)數(shù)字表隨機(jī)分為空白組、空白艾灸組、模型組、艾灸組、IL-17過(guò)表達(dá)模型艾灸組(IL-17過(guò)艾組)、IL-17沉默模型艾灸組(IL-17沉艾組)、IL-17過(guò)表達(dá)模型組、IL-17沉默模型組，前6組每組各9只，后2組每組各6只。

1.5 RA模型復(fù)制

除空白組、空白艾灸組外，參照文獻(xiàn)[11],于實(shí)驗(yàn)開(kāi)始第1天，用75%酒精消毒大鼠右足，從大鼠右后足的足墊部皮內(nèi)注入弗氏完全佐劑0.15 ml，建立RA模型。

1.6 IL-17過(guò)表達(dá)、沉默RA模型塑造

于弗氏完全佐劑造模成功后第1天,參照文獻(xiàn)[12]，在無(wú)菌條件下，用10%水合氯醛按0.35 ml/100 g對(duì)大鼠進(jìn)行腹腔麻醉，酒精棉球消毒RA大鼠右踝關(guān)節(jié)，分別采用兩支不同的經(jīng)高壓滅菌的微針注射器，在IL-17過(guò)艾組大鼠、IL-17沉艾組、IL-17過(guò)表達(dá)組、IL-17沉默組大鼠右踝關(guān)節(jié)腔緩慢注射IL-17A基因過(guò)表達(dá)慢病毒試劑、IL-17A基因沉默慢病毒試劑各40 ul，建立的大鼠IL-17過(guò)表達(dá)、IL-17沉默RA模型。

1.7 艾灸治療

實(shí)驗(yàn)第7天開(kāi)始,將空白艾灸組、艾灸組、IL-17過(guò)艾組、IL-17沉艾組大鼠固定在鼠臺(tái)上,用麥粒灸(每壯約5 mg艾絨)灸“腎俞”“足三里”各5壯,每日1次,左右交替,6天為一療程,共治療3個(gè)療程,每個(gè)療程后休息1天?？瞻捉M、模型組、IL-17過(guò)表達(dá)組、IL-17沉默組同法固定,做對(duì)照處理。

1.8 行為學(xué)測(cè)試

足跖腫脹度：在注射 FCA 前及第7、13、19、25和31天測(cè)致炎側(cè)關(guān)節(jié)足容積且做好記錄，測(cè)量方法：將大鼠致炎側(cè)踝關(guān)節(jié)呈測(cè)量時(shí)自然下垂角度，在毛發(fā)與足趾皮膚分界線處畫(huà)線，包裹住整個(gè)踝關(guān)節(jié)，將大鼠右側(cè)足緩慢放入盛有水的足容積測(cè)量?jī)x燒杯中，待畫(huà)線水平面與燒杯水面同齊，此時(shí)足容積測(cè)量?jī)x發(fā)出嘀嘀聲，按下踏板，記錄足容積數(shù)值，測(cè)量3次，取平均值，誤差值大小不超過(guò)0.2 ml。按(造模后足容積-造模前足容積)/造模前足容積的方法計(jì)算足腫脹度。

1.9 血液樣本采集及檢測(cè)方法

實(shí)驗(yàn)結(jié)束后禁食12 h，稱重，用10%水合氯醛0.35 ml/100 g進(jìn)行腹腔麻醉，將大鼠活體取材：股動(dòng)脈穿刺取血,用肝素鈉抗凝管采血5 ml,靜置1 h后,4℃離心(3 000 r/min)10 min,分離出血清0.5 ml,-70℃冰箱保存待測(cè)。IL-17、RANKL均在南京凱基生物公司檢測(cè)。

1.10 IL-17、TNF-a、IL-1b檢測(cè)

在實(shí)驗(yàn)前20 min從冰箱中取出試劑盒，平衡室溫。濃縮洗滌液以雙蒸水稀釋(1∶20)，其余放回4℃。加入標(biāo)準(zhǔn)品/標(biāo)本稀釋液1 ml至凍干標(biāo)準(zhǔn)品中，靜置15 min，溶解后，輕微混勻(濃度為4000 pg/ml)。再根據(jù)需用量進(jìn)行稀釋。標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度：4000，2000,1000，1000,500, 250,125,62.5,31.625,0 pg/ml。稀釋完成前提前20 min，以生物素化抗體稀釋液稀釋濃縮生物素化抗體(1∶30)成工作濃度。然后按當(dāng)次試驗(yàn)所需要的用量，提前20 min，以酶結(jié)合物稀釋液稀釋濃縮酶結(jié)合物(1∶30)成工作濃度。隨機(jī)將平衡至室溫的密封袋中取出試驗(yàn)板條，空白孔加標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，其余相應(yīng)孔中加標(biāo)本或不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品(100 ul/孔)，用封板膠紙封住反應(yīng)孔，36℃孵箱孵育90 min，洗板5次。然后，空白孔加生物素化抗體稀釋液，其余孔加入生物素化抗體工作液(100 ul/孔)。用封板膠紙封住反應(yīng)孔，36℃孵箱孵育60 min。洗板5次。接著，空白孔加提前20 min準(zhǔn)備好的酶結(jié)合物稀釋液，其余孔加入酶結(jié)合物工作液(100 ul/孔)，封住反應(yīng)孔，36℃孵箱，避光孵育30 min。隨后打開(kāi)酶標(biāo)儀電源，預(yù)熱儀器并設(shè)置好程序。洗板同上。洗板后，加入顯色底物100 ul/孔，避光36℃孵育15 min。加入終止液100 ul/孔,混勻后(3 min內(nèi))即刻測(cè)量OD450值。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本的OD值減去空白孔的OD值。最后進(jìn)行手工繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，OD值是縱坐標(biāo)，曲線為滑線，根據(jù)標(biāo)本的OD值查出其濃度。

1.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠右后足腫脹度比較

為了研究麥粒灸的抗炎效應(yīng)，實(shí)驗(yàn)首先進(jìn)行大鼠右后足腫脹度行為學(xué)測(cè)試。見(jiàn)表1和封三彩圖1、2,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，造模后模型組大鼠、艾灸組大鼠、IL-17過(guò)表達(dá)組大鼠、IL-17過(guò)艾組大鼠、IL-17沉默組大鼠、IL-17沉艾組大鼠右后足腫脹度明顯升高(P<0.01)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明造模成功。在接受18天麥粒灸治療后，艾灸組大鼠、IL-17過(guò)艾組大鼠、IL-17沉艾灸組大鼠右后足腫脹度明顯下降(P<0.01)，說(shuō)明麥粒灸能夠降低關(guān)節(jié)炎大鼠右后足趾腫脹度、緩解關(guān)節(jié)炎疼痛，從而達(dá)到抗炎效果。

表1 各組大鼠右后足腫脹度比較(±s)

注：與空白組比較，ΔΔP<0.01；與模型組比較，**P<0.01；與艾灸組比較，○P<0.05

2.2 各組大鼠血清IL-17、TNF-a和IL-1b含量比較

在證明了麥粒灸對(duì)RA大鼠右后足的抗炎效果后，用ELISA法檢測(cè)各組大鼠IL-17、IL-1b、TNF-a含量，探討麥粒灸對(duì)于RA大鼠血清促炎細(xì)胞因子IL-17、TNF-a以及IL-1b含量影響。見(jiàn)表2～4、圖3、5、6,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，麥粒灸治療18天后，血清空白艾灸組與空白組比較，IL-17、TNF-a含量沒(méi)有顯著性差異，說(shuō)明麥粒灸對(duì)正常大鼠血IL-17、TNF-a含量沒(méi)有影響。模型組與空白組相比，大鼠血清IL-17、TNF-a、IL-1b含量顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，說(shuō)明促炎因子IL-17、TNF-a在RA炎癥發(fā)作期含量明顯上升，參與RA炎癥活動(dòng)過(guò)程。艾灸組與模型組相比，艾灸組能夠明顯降低模型組大鼠IL-17、TNF-a、IL-1b含量，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，說(shuō)明麥粒灸可能通過(guò)抑制促炎因子IL-17、TNF-a、IL-1b含量，發(fā)揮其抗炎效應(yīng)。

為了進(jìn)一步研究IL-17對(duì)RA滑膜炎重要的促炎因子IL-1b和TNF-a的作用,通過(guò)應(yīng)用關(guān)節(jié)腔注射IL-17基因沉默、IL-17基因過(guò)表達(dá)來(lái)探索IL-17對(duì)艾灸血清IL-17、TNF-a、IL-1b的影響。見(jiàn)表2～4、圖4～6,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在注射了IL-17過(guò)表達(dá)慢病毒之后，IL-17過(guò)表達(dá)組與模型組相比，IL-17含量顯著上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，說(shuō)明IL-17過(guò)表達(dá)模型成功。IL-17沉默組與模型組相比，IL-17含量明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),說(shuō)明IL-17沉默模型成功。在造模30天、麥粒灸18天后，IL-17過(guò)表達(dá)組與模型組相比TNF-a含量明顯上升(P<0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；IL-17過(guò)艾組與艾灸組相比TNF-a含量明顯上升(P<0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,說(shuō)明IL-17過(guò)表達(dá)可以阻斷麥粒灸對(duì)于TNF-a因子的調(diào)節(jié)效果。而在造模30天、麥粒灸18天后，IL-17沉默組與模型組相比，TNF-a含量明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；IL-17沉艾組與艾灸組、空白組相比，血清TNF-a表達(dá)水平明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，說(shuō)明麥粒灸聯(lián)合IL-17沉默對(duì)血清TNF-a的抑制效果要比單獨(dú)IL-17沉默或單獨(dú)艾灸要更好。相反的是，造模26天后IL-17過(guò)表達(dá)組與模型組相比，IL-1b水平顯著升高差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，說(shuō)明IL-17參與調(diào)控IL1-b表達(dá);而IL-17過(guò)艾組、IL-17沉艾組與艾灸組相比，IL-1b含量沒(méi)有顯著性差異，說(shuō)明IL-17過(guò)表達(dá)或沉默并不能影響麥粒灸對(duì)IL-1b水平的調(diào)整。

表2 各組大鼠血清IL-17含量比較

注：與空白組比較，ΔΔP<0.01；與模型組比較，**P<0.01；與艾灸組比較，○○P<0.01

圖3 空白組、空白艾灸組、模型組、艾灸組大鼠血清IL-17含量比較

圖4 各組大鼠血清IL-17含量比較

組別例數(shù)TNF-a(pmol/L)空白組928．82±9．28空白艾灸組831．25±8．80模型組8143．22±11．94ΔΔ艾灸組972．67±5．54??IL-17過(guò)艾組8114．89±9．94○IL-17沉艾組838．79±16．07○○ΔΔIL-17過(guò)表達(dá)組6234．81±11．25?IL-17沉默組676．37±10．06?

注：與空白組比較，ΔΔP<0.01;與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01;與艾灸組比較，○P<0.05，○○P<0.01

圖5 各組大鼠血清TNF-a含量比較

組別例數(shù)IL-1b(pmol/L)空白組977．10±1．94空白艾灸組879．47±1．38模型組8267．89±4．57ΔΔ艾灸組9214．28±3．85??IL-17過(guò)艾組8208．83±7．21IL-17沉艾組8216．55±3．74IL-17過(guò)表達(dá)組6319．26±10．26??IL-17沉默組6252．20±7．40

注：與空白組比較，ΔΔP<0.01；與模型組比較，**P<0.01

圖6 各組大鼠血清IL-1b含量比較

3 討論

本試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，麥粒灸能夠顯著降低完全弗氏佐劑造模(AA)關(guān)節(jié)炎大鼠血清升高的促炎細(xì)胞因子IL-17、TNF-a、IL-1b含量。在這其中，麥粒灸對(duì)于TNF-a含量的調(diào)節(jié)作用受血清IL-17促炎因子的調(diào)控；麥粒灸與IL-17能夠協(xié)同下調(diào)血清TNF-a含量，麥粒灸加IL-17沉默對(duì)于血清TNF-a抑制效果比單純麥粒灸或單純IL-17沉默要更好。雖然IL-17過(guò)表達(dá)可以引起IL-1b含量升高，但是麥粒灸對(duì)IL-1b含量的調(diào)控不受IL-17過(guò)表達(dá)或沉默影響。實(shí)驗(yàn)說(shuō)明，麥粒灸可能通過(guò)下調(diào)血清IL-17含量從而調(diào)節(jié)TNF-a含量；而麥粒灸對(duì)IL-1b含量的調(diào)控則可能不僅只通過(guò)IL-17起作用，而是受多因素影響的。

RA是臨床上常見(jiàn)的致殘性、自身免疫性疾病，滑膜炎癥是 RA 的最突出病理特征，貫穿于RA 整個(gè)病理過(guò)程始終。大量基礎(chǔ)研究證實(shí)，滑膜細(xì)胞的異常致炎、類腫瘤樣生長(zhǎng)及骨破壞與炎性細(xì)胞因子及其炎癥信號(hào)通路轉(zhuǎn)導(dǎo)密切相關(guān)。在關(guān)節(jié)炎病程中，炎性細(xì)胞因子TNF-a和IL-1β是導(dǎo)致RA滑膜炎和骨破壞的“中心罪犯”。CD4+T細(xì)胞異?；罨?分泌炎性細(xì)胞因子白介素IL1-1b、腫瘤壞死因子TNF-a等作為第一信使與滑膜細(xì)胞上相應(yīng)受體結(jié)合，把細(xì)胞外信號(hào)傳導(dǎo)至細(xì)胞內(nèi)，引起細(xì)胞內(nèi)酪氨酸激酶磷酸化，激活 NF-k B、JAK-STAT等炎性信號(hào)通路，調(diào)節(jié)相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子活性，調(diào)控相關(guān)炎性基因表達(dá)，從而促使炎癥加重、滑膜細(xì)胞增生、血管翳形成，引起滑膜細(xì)胞的持續(xù)性炎癥[13-18]。因此，筆者從與RA滑膜炎關(guān)系最密切的促炎細(xì)胞因子TNF-a和IL-1b入手，研究麥粒灸調(diào)控IL-17對(duì)RA抗炎效應(yīng)的作用機(jī)制。

Th17細(xì)胞是最新發(fā)現(xiàn)的一種新輔助性CD4+T細(xì)胞亞群，IL-17是由Th17細(xì)胞分泌的重要促炎因子。實(shí)驗(yàn)證明IL-17在RA滑膜炎由急性向慢性轉(zhuǎn)化、RA關(guān)節(jié)骨破壞中發(fā)揮重要促炎作用、加速RA后期骨破壞進(jìn)程。2008 年 Hideki Ogura等在國(guó)際著名的免疫學(xué)雜志 《Immunity》(IF:24.2)上發(fā)表文章，首次闡明了IL-17A介導(dǎo)的IL-17A-STAT3炎性細(xì)胞信號(hào)正反饋通路在RA關(guān)節(jié)急-慢性炎癥轉(zhuǎn)化中可能發(fā)揮重要作用。此外，IL-17還誘導(dǎo)TNF-a的產(chǎn)生并與其有協(xié)同作用，導(dǎo)致炎性反應(yīng)的持續(xù)發(fā)生和軟骨與骨的漸進(jìn)性破壞[19-22]。

本試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，麥粒灸能夠顯著降低完全弗氏佐劑造模(AA)關(guān)節(jié)炎大鼠血清升高的促炎細(xì)胞因子IL-17、TNF-a、IL-1b含量,說(shuō)明麥粒灸可能通過(guò)抑制促炎細(xì)胞因子IL-17、TNF-a、IL-1b,抑制RA急、慢性滑膜炎進(jìn)程。除此之外，本實(shí)驗(yàn)還首次應(yīng)用了IL-17基因過(guò)表達(dá)、IL-17基因沉默兩種模型，探索IL-17在麥粒灸治療RA抗炎效應(yīng)的作用機(jī)制。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，IL-17過(guò)表達(dá)可以阻斷麥粒灸對(duì)于TNF-a含量的抑制作用。說(shuō)明麥粒灸對(duì)于血清TNF-a的調(diào)節(jié)作用，依賴于IL-17的參與。實(shí)驗(yàn)首次揭示了IL-17是TNF-a的上游調(diào)控因子，麥粒灸通過(guò)調(diào)控IL-17從而影響TNF-a含量，麥粒灸對(duì)RA滑膜炎發(fā)揮抗炎效應(yīng)的作用機(jī)制，有賴于對(duì)促炎因子IL-17的調(diào)控。值得一提的是，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)麥粒灸能與IL-17能夠協(xié)同下調(diào)血清TNF-a含量，麥粒灸加IL-17沉默對(duì)于血清TNF-a抑制效果比單純艾灸或單純IL-17沉默要更好，說(shuō)明臨床上可以應(yīng)用IL-17抑制劑加麥粒灸聯(lián)合治療來(lái)抑制RA滑膜炎，為RA治療提供了新的治療手段和應(yīng)用前景。但是，實(shí)驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)雖然IL-17過(guò)表達(dá)可以引起IL-1b水平升高，但是麥粒灸對(duì)IL-1b水平的調(diào)控，不受IL-17變化的影響，說(shuō)明艾灸對(duì)IL-1b促炎因子的影響，具有多因性。

本實(shí)驗(yàn)主要探討了IL-17對(duì)RA滑膜炎抗炎細(xì)胞因子的可能作用機(jī)制，對(duì)于STAT3、NF-kb等促炎信號(hào)通路的重要信號(hào)因子在本次實(shí)驗(yàn)中還尚未涉及，擬在下一步實(shí)驗(yàn)進(jìn)行繼續(xù)探索。

4 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示，麥粒灸可以顯著降低RA模型大鼠踝關(guān)節(jié)腫脹度以及血清IL-17、TNF-a、IL-1b含量。在將IL-17過(guò)表達(dá)或沉默后，血清TNF-a水平發(fā)生顯著變化。說(shuō)明麥粒灸可能通過(guò)調(diào)控IL-17，從而調(diào)節(jié)RA大鼠血清TNF-a含量，起到抑制RA滑膜炎癥的作用。

致謝:感謝南京中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心對(duì)本實(shí)驗(yàn)的協(xié)助；感謝在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)過(guò)程中姜姝姝、高宇晨?jī)晌淮T士對(duì)本實(shí)驗(yàn)的協(xié)助。

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國(guó)家自然科學(xué)基金青年基金項(xiàng)目,編號(hào):81202741；教育部高等學(xué)校博士學(xué)科點(diǎn)專項(xiàng)科研基金聯(lián)合資助課題,編號(hào):20123237120009。

高梓珊(1982-),女，講師，研究方向：針灸抗炎、鎮(zhèn)痛神經(jīng)生物學(xué)和免疫學(xué)機(jī)制研究。

R246.2

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1005-0779(2017)01-0037-05

2016-06-04