滕戰(zhàn)偉，李德生，徐 晗，周海柱，婁玉杰

（吉林農(nóng)業(yè)大學動物科學技術學院，吉林長春 130118）

胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸對朗德鵝生長性能和抗氧化性能的影響

滕戰(zhàn)偉，李德生，徐 晗，周海柱，婁玉杰*

（吉林農(nóng)業(yè)大學動物科學技術學院，吉林長春 130118）

本試驗采用胚蛋注射技術研究孵化后期補充外源性營養(yǎng)物質蛋氨酸（Met）對朗德鵝生長性能和抗氧化性能的影響。選取300枚種蛋隨機分為2組，每組3個重復，每個重復50枚種蛋。在孵化第24天進行Met注射，對照組不做任何處理，處理組注射Met營養(yǎng)液（Met 5 mg/mL，NaCl 7.5 mg/mL）1.5 mL。出雛后，每個重復選取體重均勻、健康的雛鵝20只進行飼養(yǎng)試驗，飼養(yǎng)28 d。結果表明：處理組對孵化率無顯著影響（P＞0.10），但顯著提高了朗德鵝初生重（P＜0.05），顯著提高了0～7日齡平均日增重并顯著降低了飼料增重比（P＜0.05）；處理組降低了血清和肝臟中氧化型谷胱甘肽（ GSSG）和丙二醛（MDA）含量（P＜0.05）；提高了還原型谷胱甘肽（GSH）的含量和谷胱甘肽過氧化物酶（ GSH-Px）酶活性以及GSH和 GSSG的比值（P＜0.05）。試驗結果顯示，孵化后期給養(yǎng)Met可顯著提高朗德鵝初生重，提高機體的抗氧化能力，促進了機體生長。

胚蛋給養(yǎng)；鵝；蛋氨酸；生長性能；抗氧化性能

蛋氨酸在家禽生產(chǎn)上具有重要作用，不僅參與機體蛋白質的合成，而且能提高機體的免疫機能和抗氧化性能等。蛋氨酸的相關代謝產(chǎn)物及硫化物，如半胱氨酸、?；撬岬?，對機體的氧化還原平衡狀態(tài)具有重要作用，其中半胱氨酸在細胞中可以合成谷胱甘肽，并且可以提高機體的谷胱甘肽過氧化物酶活性。研究表明，提高日糧的蛋氨酸水平可以提高低孵化重肉雞中的超氧化物歧化酶（SOD）的活力，降低肝臟中丙二醛的含量以及改善肝臟還原型谷胱甘肽（ GSH）系統(tǒng)的氧化還原狀態(tài)來提高其生長性能[1]。朗德鵝是世界著名的肥肝專用品種。研究表明，蛋氨酸的中間產(chǎn)物--?；撬峥梢云鸬奖Ｗo肝臟的作用，可以抵抗肝臟的脂質過氧化和肝臟的纖維化[2]。本試驗利用胚蛋注射技術來探索蛋氨酸對朗德鵝生長性能和抗氧化性能的影響，為蛋氨酸在鵝生產(chǎn)中的應用提供理論基礎。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 試驗所用種蛋購自吉林省梅河口市德坤禽類食品有限公司，種蛋保存時間均在7 d以內。DL-蛋氨酸購自諾偉司飼料添加劑（上海）有限公司，其純度≥99%。

1.2 試驗設計與分組 本試驗采用單因素完全隨機區(qū)組設計。選擇母鵝產(chǎn)蛋史、產(chǎn)次和營養(yǎng)攝入相近的朗德鵝種鵝種蛋300枚，依據(jù)種蛋的儲存時間（7 d內）、種蛋重及蛋形指數(shù)將其分為3個重復，每個重復50枚種蛋。在種蛋孵化期的第24天進行胚蛋給養(yǎng)，對照組不進行任何處理，處理組每枚種蛋注射1.5 mL的蛋氨酸營養(yǎng)液，濃度為Met 5 mg/mL、NaCl 7.5 mg/mL。孵化至出雛后，每個重復挑選20只健康且體重無統(tǒng)計學差異的雛鵝進行飼養(yǎng)，試驗周期為28 d。

1.3 種蛋的孵化 選擇德州科裕孵化設備有限公司制造的科裕CFZ微電腦全自動孵化機進行孵化。根據(jù)鵝的胚胎發(fā)育規(guī)律孵化分為前期1～14 d、中期為15～28 d、后期在29～30 d 3個階段。孵化期采用全進全出制變溫孵化。3個階段的濕度和溫度各不相同，分別控制在70%和37.8℃、65%和37.5℃以及72%和36.5℃。由于鵝蛋蛋殼相對較厚，蛋殼的表面積相對小，孵化后期產(chǎn)熱增加，影響胚蛋內羊水和卵黃囊營養(yǎng)吸收，導致胚胎提前出殼或者死胚。所以，從孵化的第18 天開始至第24 天，每天中午涼蛋1次，第25～28天，每天涼蛋3次。在孵化的29 d將胚蛋轉入出雛機內繼續(xù)孵化直至出殼。其他孵化管理按常規(guī)孵化程序進行。

1.4 胚蛋給養(yǎng) 胚蛋給養(yǎng)參照Tako等[3]方法，并進行了修改，具體步驟：首先通過照蛋，確定注射部位羊膜腔的位置，然后用75%的酒精棉球對鈍端注射部位進行消毒，在消毒過的區(qū)域鉆適宜大小的孔，用5 mL注射器垂直進針（深度為2 cm左右），將營養(yǎng)液注射到羊膜腔中（1.5 mL/枚），為避免感染，每枚胚蛋用1枚針頭。注射完畢后經(jīng)再次消毒后，用滅菌的石蠟迅速封口，然后按照正常的孵化程序繼續(xù)孵化直至出殼。

1.5 飼養(yǎng)管理 參照NRC（1994）推薦的鵝營養(yǎng)需要來配制飼糧[4]（表1），出殼后雛鵝分為3個重復進行飼養(yǎng)，在出殼后12 h內開水，24 h內開食，并嚴格控制飼養(yǎng)環(huán)境條件。雛鵝的飼養(yǎng)管理和免疫按照正常的程序進行。

1.6 樣品采集 在出殼當天（出殼2 h以內，0 d）、第7天（7 d）、和第28天（28 d）從每組選取6羽（每個重復2羽）鵝胚/雛鵝進行組織樣品采集。在雛鵝第7、28天頸靜脈取血液樣品5 mL于離心管中，3 000×g離心15 min，將上清液分裝于0.5 mL的EP管中，置于-80℃低溫冰箱中保存待測。試驗雛鵝采血完畢，頸部放血致死，將肝臟樣品完整取出，用預冷的生理鹽水小心沖洗并去除其上附屬的其他組織，然后將其分成3份，迅速放入準備好的液氮中冷凍，置于-80℃超低溫冰箱中保存用于抗氧化性能的測定。

1.7 指標測定與方法

1.7.1 孵化率測定 雛鵝完全出雛后，按重復來計算孵化率，其中胚蛋注射前（孵化第23天）通過照蛋檢測到的死胚不統(tǒng)計在內。

1.7.2 生長性能測定 每天記錄采食量，分別于出殼后第0、7、28天按重復數(shù)記錄體重，計算平均日采食量（ADFI）、平均日增重（ADG）和飼料增重比（F/ G）。

1.7.3 血清與肝臟抗氧化指標測定 氧化型谷胱甘肽（ GSSG）、還原型谷胱甘肽（ GSH）、谷胱甘肽過氧化物酶（ GSH-Px）和丙二醛（MDA）等指標均采用南京建成生物工程研究所的試劑盒進行測定。

表1 基礎日糧組成和營養(yǎng)成分（風干基礎）

1.8 統(tǒng)計分析 試驗數(shù)據(jù)經(jīng)Excel 2010進行整理歸納后，用SPSS18.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析，采用t-text進行差異顯著性檢驗，以P＜0.05為顯著性判斷標準，以0.05≤P＜0.10為有趨勢判斷標準。所有數(shù)據(jù)以平均值±標準誤表示。

2 結果分析

2.1 胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸對朗德鵝生長性能的影響由表2可知，胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸對孵化率無顯著影響（P＞0.10），但顯著提高了朗德鵝的初生重（P＜0.05）。胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸對0 ～7 d的ADFI無顯著影響（P＞0.10），但顯著提高了0～7 d朗德鵝的ADG（P＜0.05）并顯著降低了0～7 d朗德鵝的F/G（P＜0.05）。胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸對7 ～28 d和0 ～ 28 d的生長性能無顯著性的影響（P＞0.10）。

2.2 胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸對朗德鵝血清抗氧化指標的影響 由表3可知，與對照組相比胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸有降低7 d血清中 GSSG含量的趨勢（0.05≤P＜0.10）；顯著提高了7 d血清中的 GSH含量（P＜0.05）和GSH/ GSSG（P＜0.05），但在28 d時對其均無顯著性影響（P＞0.10）。

表2 胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸對朗德鵝生長性能的影響

表3 胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸對朗德鵝血清氧化型和還原型GSH的影響

由表4可知，胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸顯著降低了7 d血清中的MDA含量（P＜0.05），但對28 d血清的MDA含量無顯著影響（P＞0.10）。對7 d和28 d血清中的 GSH-Px活性均無顯著性影響（P＞0.10）。

2.3 胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸對朗德鵝肝臟抗氧化指標的影響 由表5可知，胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸顯著降低了0 d和7 d肝臟的GSSG含量（P＜0.05），顯著提高了0 d肝臟的 GSH含量（P＜0.05），對7 d和28 d 肝臟 GSH含量有提高趨勢（0.05≤P＜0.10），對28 d肝臟的 GSSG含量無顯著性影響（P＞0.10），但試驗全程提高了 GSH / GSSG （P＜0.05）。

表4 胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸對朗德鵝血清GSH-PxHE 和MDA的影響

由表6可知，與對照組相比處理組顯著的提高了0 d和7 d肝臟的 GSH-Px活性（P＜0.05），顯著性降低了0 d肝臟的MDA含量（P＜0.05），對28 d肝臟的 GSH-Px活性和7 d和28 d肝臟的MDA含量無顯著性影響（P＞0.10）。

表5 胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸對朗德鵝肝臟氧化型和還原型GSH的影響

表6 胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸對朗德鵝肝臟GSH-PxHE 和MDA的影響

3 討 論

3.1 胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸對朗德鵝孵化率的影響 孵化率是影響家禽養(yǎng)殖業(yè)經(jīng)濟效益的一個關鍵因素，故孵化率是胚蛋給養(yǎng)是否成功的一個重要考察指標。胚蛋給養(yǎng)的時間、胚蛋的種類、注射液的滲透壓、注射體積等諸多因素都對孵化率有不同程度的影響[5]。研究表明，在胚胎后期給胚胎補充外源性的碳水化合物可以提高鴿的孵化率，而在鴨上孵化率是降低的[6-7]。Zhai等[8]研究表明胚蛋注射左旋肉堿對孵化率沒有影響，李德生[9]研究表明胚蛋注射蛋氨酸對吉林白鵝的孵化率無顯著影響，本試驗研究的研究結果與其一致。這表明本試驗給養(yǎng)蛋氨酸的處理是成功的，可用于后續(xù)進一步的研究。

3.2 胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸對朗德鵝生長性能的影響 家禽孵化后期由于胚胎機體活動加強如開始轉身、破殼等，而此時胚蛋內的碳水化合物不足，機體會通過糖異生作用動員胸肌中的蛋白質來維持代謝需要，這直接影響了胚胎的胸肌發(fā)育，各組織器官發(fā)育也受到了影響，進而可能會影響禽類的初生重。日糧中添加蛋氨酸提高了胸肌Myf5和MEF2B的相對表達量并降低了MSTN的表達量進而促進了肉雞的胸肌發(fā)育[10]。Coskun等[11]研究表明，胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸顯著提高了雞的出殼重。李世召等[12]研究表明，胚蛋內給養(yǎng)3 mg維生素C顯著提高了肉仔雞的初生重，并顯著降低了1～42 d的F/G。本試驗研究表明，胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸顯著提高了初生重和0～7 d的ADG，顯著降低了0～7 d的F/G，同上述研究結果相似，這可能是由于胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸提供了腸道發(fā)育所需的氨基酸，促進了肌肉發(fā)育。陳偉[6]和李德生等[9]在鴨和吉林白鵝上的研究指出，胚蛋給養(yǎng)二糖和蛋氨酸促進了腸道和胸肌發(fā)育，這進一步說明了本試驗的結果。

3.3 胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸對朗德鵝抗氧化性能的影響動物機體在生長過程中會產(chǎn)生大量的自由基，其過度積累會對機體造成氧化應激，機體通過自身的抗氧化系統(tǒng)來清除過多的自由基。含硫氨基酸通過自身的抗氧化作用或者生成能夠起到抗氧化作用的代謝產(chǎn)物來實現(xiàn)抗氧化作用[14]。

GSH在細胞的脂質過氧化損傷防御中發(fā)揮著重要作用，其含量及相關酶活性可作為反映機體抗氧化狀態(tài)的標志。其原因是， GSH是 GSH-Px的底物，在清除細胞內的過氧化氫（H2O2）及脂類過氧化物上發(fā)揮作用；此外， GSH也能夠單獨地與烷自由基、過氧自由基、半醌自由基等眾多自由基發(fā)生作用[15]。蛋氨酸能夠參與體內甲基基團代謝以及參與半胱氨酸合成，而半胱氨酸又是組織中合成GSH和?；撬岬那绑w物質。

GSH-Px能夠通過催化 GSH與過氧化氫反應生成 GSSG來清除過氧化氫。 GSSG可在 GSSG還原酶的催化下形成 GSH或者直接清除出細胞。在細胞內 GSH/ GSSG的和 GSH的含量能反映出硫醇的氧化還原狀態(tài)。本試驗中發(fā)現(xiàn)胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸增加了 GSH的含量以及降低了 GSSG的含量，而且提高了雛鵝血清和肝臟的 GSH-Px活性。這同李豪[16]在仔豬上的研究結果較為相似。蛋氨酸在轉甲基和轉硫的作用下能夠生成半胱氨酸，而半胱氨酸又是谷胱甘肽合成的限速氨基酸，因此，胚蛋給養(yǎng)Met增加了機體的 GSH含量。

MDA是機體脂質過氧化的產(chǎn)物，其在組織中的含量反映了機體脂質過氧化自由基的存在和細胞的被氧化程度，所以其含量的高低不僅反映了機體脂質的氧化程度，并且間接反映了細胞的受損程度[15]。葉慧等[13]研究表明，隨著日糧中蛋氨酸水平的提高，獅頭鵝血清中MDA的含量也隨著降低。本試驗研究表明，胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸降低了血清和肝臟中的MDA含量，同葉慧等[13]的研究結果相似，這進一步說明胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸提高了機體的抗氧化能力。

4 結 論

胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸對孵化率無顯著性影響，但顯著提高了朗德鵝的初生重，提高了0～7日齡的平均日增重并降低了飼料增重比，促進了生長。

胚蛋給養(yǎng)蛋氨酸提高了機體血清和肝臟的 GSH和 GSH-Px含量，降低了 GSSG和MDA含量，在一定程度上提高了朗德鵝的抗氧化能力。

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S835.5

A

10.19556/j.0258-7033.2017-01-066

2016-06-13；

2016-07-16

國家自然科學基金（31372331）

滕戰(zhàn)偉（1988-），男，河南鄢陵人，碩士研究生，動物營養(yǎng)與飼料科學專業(yè),E-mail: tengwei416@126.com

*通訊作者：婁玉杰，教授，博士生導師，E-mail: lyjjlau@ 163.com