●王健 何繼宏 何曉清 李偉強(qiáng) 唐躍華

1例中間型β地中海貧血的基因診斷與臨床表現(xiàn)

●王健 何繼宏 何曉清 李偉強(qiáng) 唐躍華

目的：分析1例中間型β地中海貧血的基因檢測結(jié)果與臨床表現(xiàn)。方法：資料選取我院2014年-2016年期間收治的1例中間型β地中海貧血患兒，采用常規(guī)PCR技術(shù)以及DNA序列測定進(jìn)行基因診斷。結(jié)果：常規(guī)PCR檢測技術(shù)結(jié)果為β41/42雜合子，提示為輕型β地中海貧血；DNA序列測定結(jié)果發(fā)現(xiàn)患兒β珠蛋白基因還存在PolyA(A＞G)突變，為βPolyA(A＞G)/β41/42雙重雜合子。結(jié)論：臨床診斷為中間型β地中海貧血需要結(jié)合臨床表現(xiàn)和基因檢測結(jié)果綜合分析，對于常規(guī)基因檢測與地中海貧血表型篩查結(jié)果不符時，應(yīng)考慮為罕見或未知突變類型，進(jìn)一步檢測非常見類型α或β地中海貧血基因，以防漏診或誤診。

中間型β地中海貧血；基因診斷；臨床表現(xiàn)

α珠蛋白基因位于人體的16號染色體，而α地中海貧血為基因連接中-α3.7、α4.2、--SEA缺失基因的超過95%，且α地中海貧血主要由于超過5%的α基因缺失導(dǎo)致，且近些年有較少報道α四聚體、α三聚體。β珠蛋白基因位于11號染色體，且此基因鏈為1%基因缺失或99%點突變?；仡櫹嚓P(guān)外國文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)數(shù)百種β珠蛋白基因突變，而我國僅發(fā)現(xiàn)20多種。臨床研究發(fā)現(xiàn)地中海貧血的主要臨床表現(xiàn)為肽鏈α/β平衡因素、β基因表現(xiàn)β0與β+、α基因表現(xiàn)α1與α2等相關(guān)因素影響。而目前臨床診斷地中海貧血的實驗方法有以下幾種∶（1）采用外周血紅蛋白電泳檢測血紅蛋白定量和定性[1]；（2）疑似地中海貧血患者應(yīng)給予α地中海貧血Gap-PCR基因缺失檢測法，β地中海貧血反向斑點雜交檢測法；（3）α與β珠蛋白基因全長測序。本文就如何提高基因檢測技術(shù)和統(tǒng)計臨床表現(xiàn)和影響因素進(jìn)行詳細(xì)討論，為今后臨床治療提供有利參考和證據(jù)，現(xiàn)將報告闡述如下∶

1 資料與方法

一般資料∶

患兒∶女；年齡∶4歲；患者由于面色蒼白，且患者消瘦、體弱無力?；純杭覍僦髟V∶患兒11月時開始面色蒼白，消瘦、右上腹包塊逐步增大。生化檢驗發(fā)現(xiàn)∶WBC∶9.2×109/L，Hb∶72.0g/L，MCV69.0fl，MCH∶19.6pg，MCHC∶32.1%，PLT∶301×109/L。且發(fā)病半年時共 2次紅細(xì)胞懸液輸入，每次個1單位，且患兒輸入紅細(xì)胞懸液后很快出現(xiàn)面色蒼白，且家長攜患兒前去當(dāng)?shù)蒯t(yī)院就診，經(jīng)生化檢查發(fā)現(xiàn)Hb浮動性較大，且當(dāng)患感冒時可出現(xiàn)Hb下降至50-60g/L，當(dāng)正規(guī)、有效、對癥治療發(fā)現(xiàn)可逐漸恢復(fù)至80-90g/L，且此期間可不予以相關(guān)處理。而近1年內(nèi)患者右上腹逐漸增大，但無明顯腹脹和疼痛，但患兒出現(xiàn)體型消瘦但在標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)。患兒家屬出具以往病歷，發(fā)現(xiàn)患兒出生時并無貧血，但多日后黃疸不退，經(jīng)診斷為“新生兒膽紅素”，臨床予以藍(lán)光照射治療后黃疸消退。與患兒家屬溝通發(fā)現(xiàn)∶患兒目前既往有輕度貧血，而患兒外公為中度貧血，而其余家屬是否患有貧血和程度尚不明確。而本次經(jīng)我院常規(guī)檢驗發(fā)現(xiàn)∶WBC∶6.38×109/L、Hb82g/L、MCV63.1fl、MCH20.2pg、MCHC32.8%、PLT189×109/L、ALT∶18U/L、TBIL64.1umol/L、IBIL56.2umol/L，而測定血清鐵元素11.8umol/L；不飽和鐵結(jié)合19.3umol/L，經(jīng)腹部彩超檢查發(fā)現(xiàn)，患兒肝、脾部出現(xiàn)明顯增大，但并未出現(xiàn)結(jié)構(gòu)性變異以及占位性異常病變；且經(jīng)檢測發(fā)現(xiàn)患兒抗人球蛋白陰性；而外周血紅蛋白電泳結(jié)果顯示HbF9.1%，HbA24.2%。

2 檢測方法

2.1 α與β珠蛋白常見突變基因型檢測

提取外周靜脈血白細(xì)胞基因組DNA后，利用反向斑點雜交技術(shù)(reverse dotblot，RDB)檢測17種β地貧點突變類型∶41-42、43、654、-32、-28、-29、71-72、-30、17、14-15、βE、CAP、31、InT、27/28、IVS1-1、IVS1-5，與3種α地貧點突變類型∶aCS、aQS、aWS；利用多重PCR技術(shù)（Multiplex PCR）檢測3種α地貧缺失型突變類型-a3.7、-a4.2、--SEA。

2.2 珠蛋白基因全長測序。

3 結(jié)果

（1）依據(jù)血常規(guī)與血紅蛋白電泳結(jié)果分析，此患兒應(yīng)為中間型地中海貧血。

（2）經(jīng)地中海貧血基因檢測發(fā)現(xiàn)∶患兒的基因型為β基因41/42雜合子而α基因未檢測出異常。患兒母親的地貧基因檢測未見異常，父親的地貧基因檢測結(jié)果也為β基因41/42雜合子。患兒基因型結(jié)果提示為輕型β－地中海貧血，與篩查結(jié)果不符。

（3）進(jìn)一步采用PCR測序方法分析202種非常見點突變型β地中海貧血（深圳亞能公司完成），結(jié)果發(fā)現(xiàn)患兒β珠蛋白基因還存在Poly A(A＞G)突變，為βPoly A(A＞G)/β41/42雙重雜合子。

4 討論

本次調(diào)查的患兒為中度貧血，且患兒發(fā)病前已輸血2次，每次各1個單位，但本次感染時患兒彩超下已出現(xiàn)肝脾增大以及生化檢查小細(xì)胞低色素貧血和膽紅素升高等結(jié)果，所有檢查符合溶血性貧血特點；且患兒經(jīng)鐵代謝檢查發(fā)現(xiàn)排除缺鐵性貧血，以及采用電泳檢查HbF、HbA2都增高，同時回訪患兒家屬發(fā)現(xiàn)，家屬人群中存在數(shù)人貧血，且癥狀符合中間型β-地中海貧血，但α與β珠蛋白常見突變基因型檢測結(jié)果提示為輕型，與篩查結(jié)果不符。進(jìn)一步采用PCR測序方法分析202種非常見點突變型β地中海貧血，結(jié)果發(fā)現(xiàn)患兒β珠蛋白基因還存在Poly A(A＞G)突變，為βPoly A(A＞G)/β41/42雙重雜合子。

綜上所述，臨床診斷為中間型地中海貧血，首要應(yīng)排除患者患有其他方面原因?qū)е仑氀俨捎醚t蛋白電泳和基因分析，同時進(jìn)行家族病史分析，聯(lián)合各項結(jié)果綜合分析病情。對于常規(guī)基因檢測與地中海貧血表型篩查結(jié)果不符時，應(yīng)考慮為罕見或未知突變類型，進(jìn)一步檢測非常見類型α或β地中海貧血基因，以防漏診或誤診。因此，對于罕見類型β地中海貧血，如果不進(jìn)行血液學(xué)表型篩查，而只進(jìn)行常規(guī)基因檢測，會造成假陰性結(jié)果。（

作者單位：惠州市第三人民醫(yī)院）

[1]黃莉,姚紅霞.羥基脲治療中間型β地中海貧血的療效觀察[J].中國實驗血液學(xué)雜志,2016,24(3):806-809.

[2]楊金玲,鄭敏.β地中海貧血實驗室診斷的研究進(jìn)展[J].中國優(yōu)生與遺傳雜志,2016(4):7-8.

[3]劉新顏,王靜,曾艷紅,等.β地中海貧血基因檢測結(jié)合HLA配型的胚胎植入前遺傳學(xué)診斷技術(shù)的臨床應(yīng)用[J].中華婦產(chǎn)科雜志,2016,51(7):491-497.

課題名稱：廣東惠州地區(qū)中間型β地中海貧血的基因多樣性及其臨床表現(xiàn)的研究課題編號：20140806；惠州市科學(xué)技術(shù)局