劉 偉，袁洪燕，蘇東林，單 楊，張菊華

（1.湖南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院湖南省農(nóng)產(chǎn)品加工研究所，湖南 長沙 410125；2.中南大學(xué)隆平分院，湖南 長沙 410125）

不同柑橘品種及保健品中辛弗林含量的比較

劉 偉1,2，袁洪燕1，蘇東林1，單 楊1，張菊華1

（1.湖南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院湖南省農(nóng)產(chǎn)品加工研究所，湖南 長沙 410125；2.中南大學(xué)隆平分院，湖南 長沙 410125）

以溫州蜜柑、椪柑等多個柑橘品種幼果（皮渣）及市售減肥保健品為供試樣品，通過反相高效液相色譜（HPLC）建立了辛弗林的色譜測定方法，探討了辛弗林含量在不同柑橘品種以及不同發(fā)育時期的變化特點。結(jié)果表明：柑橘幼果中的辛弗林含量變化范圍為2.034～8.020 mg/g，平均含量為4.106 mg/g；果皮中為0.994～4.017 mg/g，平均含量為2.766 mg/g；保健品膳食補充劑中為1.323～40.772 mg/g，與標(biāo)示的含量基本相符；同一采收期的柑橘幼果辛弗林平均含量由高到低依次為溫州蜜柑＞椪柑＞尾張＞雜柑＞酸橙＞臍橙＞本地早＞朋娜＞宮川；隨著生長期的延長，柑橘幼果和果皮中辛弗林含量均呈現(xiàn)下降趨勢。

柑橘；辛弗林；保健品；變化

我國柑橘資源豐富，2014年種植面積達242萬hm2，產(chǎn)量為3 494.22 萬t，面積和年產(chǎn)量均居世界第一位。我國每年產(chǎn)生柑橘皮渣超過1 000萬t，其內(nèi)含辛弗林5.5萬t[1-2]。目前，除少量柑橘皮渣用于陳皮（涼果）等加工外，其他基本上沒有得到利用，造成資源的巨大浪費[3-6]。

辛弗林（synephrine）又名對羥福林、交感醇、脫氧腎上腺素，存在于蕓香科柑橘屬植物中[7-9]。辛弗林具有收縮血管、升高血壓的作用，還有較強的擴張氣管和支氣管的作用，臨床用于治療支氣管哮喘以及手術(shù)和麻醉時出現(xiàn)的低血壓、虛脫及休克等癥狀[10-12]。同時，辛弗林還具有提高新陳代謝、增加熱量消耗、提高能量水平等功效[13-17]。2004年4月美國FDA禁止膳食補充劑中添加麻黃堿[18]，辛弗林由于結(jié)構(gòu)和內(nèi)源性神經(jīng)遞質(zhì)與腎上腺素和去甲腎上腺素相似，已逐步替代麻黃堿廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、飲料等保健品行業(yè)。目前，國內(nèi)生產(chǎn)辛弗林或其制品的公司很少，大量依賴進口。因此，筆者以溫州蜜柑、椪柑等多種柑橘品種落果（皮渣）為原料，測定其辛弗林含量，并與市售減肥保健品中辛弗林含量進行比較，探索主要柑橘品種幼果期辛弗林活性成分含量的分布及變化規(guī)律，一方面為辛弗林生產(chǎn)企業(yè)提供更有效的原材料，促進辛弗林醫(yī)藥和保健價值的開發(fā)；另一方面提高資源綜合利用效率，推動我國柑橘產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

收集湖南、江西、四川、廣東、云南、浙江6個省不同產(chǎn)地、不同品種的柑橘幼果及果皮樣品共33個。其中，寬皮柑橘有椪柑、尾張、宮川、本地早、溫州蜜柑、小蜜橘等11個；橙類有臍橙、朋娜、廣柑等共5個；其他如酸橙、雜柑、蜜橘、葡萄柚等9個。另外，收集美國減肥保健品8個。

1.2 儀器與試劑

主要試驗儀器有：高效液相色譜儀，型號1100，配有四元泵及自動進樣器、DAD 檢測器（美國安捷倫公司）；KQ-600DB 型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；FZ-102型微型植物粉碎機（天津泰斯特儀器有限公司）；KDC-160HR 型離心機（科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司）；FA2104 型電子天平（上海倫捷機電儀表有限公司）。

主要試驗試劑有：乙腈（色譜純，F(xiàn)isher Scientific公司）、甲醇（分析純，F(xiàn)isher Scientific公司）、辛弗林標(biāo)準(zhǔn)品（94-07-5）（純度98.0%，美國sigma公司）。

1.3 試驗方法

1.3.1樣品制備樣品粉碎、篩分、烘干，備用。平行稱取兩份試料，每份試料1.00 g（精確到0.01 g），置于50 mL離心管中，加入40%甲醇水溶液10.0 mL，50℃下超聲處理30 min，以10 000 r/min離心10 min，收集上清液，殘渣均以10 mL提取劑重復(fù)提取兩次。合并上清液，定容至50 mL，用0.45 μm微孔濾膜過濾，待測。

1.3.2對照品制備精密稱取辛弗林標(biāo)準(zhǔn)品10 mg，置10 mL 容量瓶中，加40%甲醇至刻度作為對照品溶液。

1.3.3色譜條件Agilent Poroshell 120 Bonus-RP C18色譜柱（3 mm×150 mm，2.7 μm）。流動相為0.1%乙酸水溶液（A）和乙腈 （B）；流速 0.3 mL/min。梯度洗脫程序條件：0～2 min 0%～5% B；2～25 min 5%～35% B；25～35 min 35%～75% B；35～38 min 75%～95% B；38～48 min 95%～100% B。檢測波長 225 nm，柱溫20 ℃，進樣量2 μL，保留時間定性，外標(biāo)法定量。

1.3.4結(jié)果計算試樣中辛弗林含量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)ω計，單位mg/g。計算公式：

式中：ρ，樣液中辛弗林的質(zhì)量濃度（mg/L）；V，樣液體積（mL）；m，試料質(zhì)量（g）；n，稀釋倍數(shù)。計算結(jié)果小數(shù)點后保留3位有效數(shù)字。

1.3.5檢測方法驗證（1）線性關(guān)系及檢出限：按1.3.2方法配制一系列不同稀釋度的辛弗林標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照1.3.3的色譜條件進樣分析，重復(fù)測定5次。以峰面積為縱坐標(biāo)（Y），質(zhì)量濃度（X）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程及相關(guān)系數(shù)。（2）精密度：精密吸取200 mg/L標(biāo)準(zhǔn)品溶液，按1.3.3 的色譜條件連續(xù)進樣6 次，測定各自的峰面積，根據(jù)測定結(jié)果計算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD。（3）重現(xiàn)性：精密稱取同一供試樣品6份，按1.3.1 的方法平行制備6 份樣品溶液，按1.3.3的色譜條件進樣，記錄峰面積，并計算辛弗林含量。（4）穩(wěn)定性：精密稱取同一供試樣品，按1.3.1 方法制備的樣品溶液，在1.3.3的色譜條件下，分別于0、2、4、6、8、12、16、20、24、48 h 進樣，測定供試品中辛弗林的含量。（5）回收率：精密稱取已知含量的SRM（酸橙提取物標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì)0.65%）3份（約100 mg每份），按照1.3.1 的方法制備供試品溶液，各份中加入200 mg/L辛弗林標(biāo)準(zhǔn)品溶液對照品溶液0.4、2、10 mL，按1.3.3的色譜條件進樣，依法平行測定3次，計算回收率。

2 結(jié)果與分析

2.1 檢測方法的驗證

2.1.1線性關(guān)系考察及檢出限如圖1所示，辛弗林的保留時間為8.731 min，由辛弗林標(biāo)準(zhǔn)品溶液獲得回歸方程Y=3.586 6 X-1.202 5，R2=0.999 5（圖2）。這表明辛弗林在5.00～800 mg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。經(jīng)試驗驗證，辛弗林的最低檢出限為0.01 mg/L。

圖1 辛弗林單標(biāo)圖譜

圖2 辛弗林標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.1.2精密度精密度試驗的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD =0.91%，表明該檢測方法的精密度良好。

2.1.3重現(xiàn)性重現(xiàn)性試驗的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD＜1%。

2.1.4穩(wěn)定性穩(wěn)定性試驗的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD＜3%。

2.1.5回收率如表1所示，低、中、高添加水平的平均回收率分別為97.40%，100.06%，101.24%，回收率符合GB/T27404—2008標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的回收范圍95%～105%。

表1 加樣回收率試驗

2.2 不同樣品辛弗林含量的比較

2.2.1不同柑橘品種及保健品中辛弗林含量的比較從表2中可以看出，柑橘幼果中的辛弗林含量變化范圍為2.034～8.020 mg/g，平均含量為4.106 mg/g；果皮中的含量變化范圍為0.994～4.017 mg/g，平均含量為2.766 mg/g；保健品膳食補充劑中辛弗林的含量變化范圍為1.323～40.772 mg/g，與標(biāo)示的含量基本相符，除3號補充劑（標(biāo)簽寫明是中草藥）中辛弗林含量低于柑橘落果外，其他6個保健品中的辛弗林含量均較高，平均含量為25.426 mg/g。

2.2.2不同柑橘品種間辛弗林含量的比較如圖3所示，不同柑橘品種之間辛弗林含量存在較大差異。同一采收期（6月28日）的柑橘幼果辛弗林平均含量由高到低依次為溫州蜜柑＞椪柑＞尾張＞雜柑＞酸橙＞臍橙＞本地早＞朋娜＞宮川。其中，溫州蜜柑中辛弗林含量最高，平均為8.020 mg/g（DW，下同）；其次是酸橙和雜柑，辛弗林平均含量為4.647～4.829 mg/g；本地早和朋娜排第三，辛弗林平均含量為2.696～2.973 mg/g；宮川的辛弗林含量最低，平均為2.034 mg/g；不同等級間辛弗林含量的差異達顯著水平。寬皮橘類柑橘幼果中辛弗林的平均含量較高，甜橙類次之，與張文娟[19]、毛華榮等[20]的研究報道一致。

表2 不同柑橘品種及保健品中辛弗林含量的比較

圖3 不同柑橘品種辛弗林含量的比較

2.2.3不同采摘時間對辛弗林含量的影響柑橘幼果在發(fā)育過程中，辛弗林作為生理代謝物其含量會發(fā)生變化。通過掌握辛弗林含量隨生長期的變化規(guī)律，可以指導(dǎo)原料的采摘和收購。由圖4可知，不同采集時間同一品種的辛弗林含量差異較大，隨著生長期的延長，柑橘幼果和果皮中辛弗林含量均呈現(xiàn)下降趨勢。6月28日采摘的椪柑、臍橙及雜柑幼果中辛弗林含量較高，8月之后含量均不同程度的降低。辛弗林在3個品種中的變化趨勢略有不同，6月28日的椪柑幼果中辛弗林含量高達7.578 mg/g，而8月4日的椪柑中含量僅為2.250 mg/g，下降了70.31%，椪柑中的辛弗林含量隨生長期的延長持續(xù)降低，下降幅度最大；臍橙幼果從最初的3.482 mg/g下降至2.071 mg/g，下降了40.52%，臍橙中的辛弗林含量隨生長期的延長緩慢降低，是3個品種中辛弗林含量下降幅度最小的；6月28日的雜柑中辛弗林含量為4.829 mg/g，到8月7日下降到2.686 mg/g，下降了44.38%，雜柑中辛弗林含量隨生長期的延長初期變化平緩，至8月4日后急劇降低，后期變化波動較大。韋正等[21]在研究陳皮時發(fā)現(xiàn)，7月采摘的橘皮中辛弗林含量較高，12月以后采摘的橘皮中辛弗林含量變化趨于穩(wěn)定；毛華榮等[20]的研究表明，柑橘第二次生理落果辛弗林含量均較第一次有所降低。該試驗與上述報道在辛弗林含量最高的采摘時期不盡相同，但是在辛弗林的變化趨勢上是一致的。因此，6月的椪柑、臍橙、雜柑等柑橘品種中辛弗林含量較高，可以將6月確定為辛弗林提取原料的適宜采集時間。

圖4 不同柑橘品種不同生長期辛弗林含量的動態(tài)變化

3 結(jié) 論

研究表明，辛弗林含量在不同柑橘品種之間具有顯著差異，不同采集時間的同一品種的辛弗林含量差異也很大。柑橘幼果中的辛弗林含量變化范圍為2.034～8.020 mg/g，平均含量為4.106 mg/g；果皮中的含量變化范圍為0.994～4.017 mg/g，平均含量為2.766 mg/g；保健品膳食補充劑中辛弗林的含量變化范圍為1.323～40.772 mg/g，與標(biāo)示的含量基本相符，除3號補充劑（標(biāo)簽寫明是中草藥）的辛弗林含量低于柑橘落果中的含量，其他6個保健品中辛弗林含量均較高，平均為25.426 mg/g；同一采收期的柑橘幼果辛弗林平均含量由高到低依次為溫州蜜柑＞椪柑＞尾張＞雜柑＞酸橙＞臍橙＞本地早＞朋娜＞宮川，其中溫州蜜柑、椪柑、尾張、臍橙、宮川等品種間辛弗林含量的差異達顯著水平，酸橙和雜柑、本地早和朋娜之間的差異不顯著；隨著生長期的延長，柑橘幼果和果皮中辛弗林含量均呈下降趨勢。

辛弗林是柑橘屬植物中主要的生物堿成分，對不同的柑橘品種不同時期進行分析比較，分析其含量的差異性和規(guī)律性，有利于柑橘類產(chǎn)品加工時原料的選擇及地方柑橘資源的開發(fā)利用，并為柑橘品種選育及遺傳親緣關(guān)系研究提供科學(xué)依據(jù)。

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（責(zé)任編輯：成 平）

Comparison on the Content of Synephrine in Different Varieties of Citrus and Dietary Supplements

LIU Wei1,2，YUAN Hong-yan1，SU Dong-lin1，SHAN Yang1，ZHANG Ju-hua1
（1. Hunan Agricultural Product Processing Institute, Hunan Academy of Agricultural Sciences, Changsha 410125, PRC; 2. Longping Branch Graduate School, Central South University, Changsha 410125, PRC）

This study aims to analyze the changes of synephrine in the different young fruit (peel) and dietary supplements during different growing periods for the utilization of citrus resources. Reversed phase high performance liquid chromatography (HPLC) is established for determination of synephrine. The results were as follows: The synephrine content in young fruit of citrus ranged from 2.034 to 8.02 mg/g, the average is 4.106 mg/g; and ranged from 0.994-4.017 mg/g in citrus peel, the average of 2.766 mg/g; and ranged from 1.323 to 40.772 mg/g in dietary supplements, basically consistent with the actual content marked. The order of average content in different citrus varieties at the same harvest was Wenzhou Satsuma ＞ Ponkan ＞ Owari ＞ Miscellaneous Citrus＞ lime ＞ Navel Orange ＞ Bendizao mandarin ＞Navelina navel ＞ Miyagawa, signifcant difference among Wenzhou Satsuma, Ponkan, Owari, Navel Orange and Miyagawa. With the fruits growing, the contents of synephrine in young fruit and peel showed a signifcant downward trend.

citrus; synephrine; dietary supplements; changes

book=61,ebook=69

Q946.88

A

1006-060X（2016）12-0061-05

10.16498/j.cnki.hnnykx.2016.012.020

2016-10-07

湖南省自然科學(xué)聯(lián)合培養(yǎng)基金項目（14JJ6066）

劉 偉（1983-），男，陜西寶雞市人，助理研究員，主要從事農(nóng)產(chǎn)品精深加工研究。

張菊華