陳俊宏 何雪曼 鄧海峰 李曉斌 劉 振 馬 軍 甘建榮 唐雪梅 楊開(kāi)倫

(新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)新疆肉乳用草食動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，烏魯木齊830052)

?

12月齡伊犁馬對(duì)維生素B1和維生素B2的需要量

陳俊宏 何雪曼 鄧海峰 李曉斌 劉 振 馬 軍 甘建榮 唐雪梅 楊開(kāi)倫*

(新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)新疆肉乳用草食動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，烏魯木齊830052)

本試驗(yàn)旨在研究維生素B1、維生素B2不同攝入量對(duì)12月齡伊犁馬血液、尿液相關(guān)指標(biāo)的影響，以得到12月齡伊犁馬對(duì)維生素B1、維生素B2的需要量。試驗(yàn)選取12月齡±5日齡、平均體重(245.28±18.36) kg的伊犁馬公馬35匹，隨機(jī)分為5組，每組7匹，分別為試驗(yàn)Ⅰ組、試驗(yàn)Ⅱ組、試驗(yàn)Ⅲ組、試驗(yàn)Ⅳ組、試驗(yàn)Ⅴ組，馬匹飼喂相同的基礎(chǔ)飼糧，并分別添加0、16、32、48和64 mg/(匹·d)的維生素B1和0、10、20、30和40 mg/(匹·d)的維生素B2，進(jìn)行為期20 d的飼養(yǎng)試驗(yàn)。試驗(yàn)Ⅰ組、試驗(yàn)Ⅱ組、試驗(yàn)Ⅲ組、試驗(yàn)Ⅳ組、試驗(yàn)Ⅴ組實(shí)際攝入維生素B1量分別為19.00、33.49、48.27、62.96、77.53 mg/(匹·d)，實(shí)際攝入維生素B2量分別為21.95、31.68、41.77、51.53、61.26 mg/(匹·d)。結(jié)果表明：隨著實(shí)際攝入維生素B1量的增加，伊犁馬血漿維生素B1含量、紅細(xì)胞轉(zhuǎn)酮酶活性(E-TKA)、尿液維生素B1排出量逐漸升高，焦磷酸硫胺素(TPP)效應(yīng)逐漸降低。試驗(yàn)Ⅰ組血漿維生素B1含量顯著低于試驗(yàn)Ⅲ組(P<0.05)，極顯著低于試驗(yàn)Ⅳ組、試驗(yàn)Ⅴ組(P<0.01)；試驗(yàn)Ⅰ組E-TKA極顯著低于試驗(yàn)Ⅲ組、試驗(yàn)Ⅳ組和試驗(yàn)Ⅴ組(P<0.01)；試驗(yàn)Ⅰ組TPP效應(yīng)顯著高于試驗(yàn)Ⅲ組(P<0.05)，極顯著高于試驗(yàn)Ⅳ組、試驗(yàn)Ⅴ組(P<0.01)；試驗(yàn)Ⅰ組尿液維生素B1排出量極顯著低于試驗(yàn)Ⅲ組、試驗(yàn)Ⅳ組、試驗(yàn)Ⅴ組(P<0.01)。隨著實(shí)際攝入維生素B2量的增加，伊犁馬血漿維生素B2含量出現(xiàn)波動(dòng)變化，紅細(xì)胞谷胱甘肽還原酶活性系數(shù)(E-GRAC)逐漸降低，尿液維生素B2排出量逐漸增加。試驗(yàn)Ⅰ組血漿維生素B2含量顯著低于試驗(yàn)Ⅲ組、試驗(yàn)Ⅳ組(P<0.05)，極顯著低于試驗(yàn)Ⅱ組、試驗(yàn)Ⅴ組(P<0.01)；試驗(yàn)Ⅰ組E-GRAC極顯著高于試驗(yàn)Ⅱ組、試驗(yàn)Ⅲ組、試驗(yàn)Ⅳ組、試驗(yàn)Ⅴ組(P<0.01)；試驗(yàn)Ⅰ組尿液維生素B2排出量極顯著低于試驗(yàn)Ⅲ組、試驗(yàn)Ⅳ組、試驗(yàn)Ⅴ組(P<0.01)。綜合評(píng)價(jià)各指標(biāo)，得到12月齡伊犁馬對(duì)維生素B1的需要量為48.27 mg/(匹·d)，對(duì)維生素B2的需要量為31.68 mg/(匹·d)。

伊犁馬；維生素B1；維生素B2；需要量

維生素B1、維生素B2是維持動(dòng)物正常生理功能的一類(lèi)微量有機(jī)物質(zhì)[1]。維生素B1又稱(chēng)硫胺素，在動(dòng)物體內(nèi)主要以硫胺素單磷酸(thiamine monophosphate,TMP)、焦磷酸硫胺素(thiamine pyrophosphate,TPP)、硫胺素三磷酸(thiamine triphosphate,TTP)3種形式存在[2]，維生素B1以TPP的形式存在并以輔酶的形式參與調(diào)節(jié)體內(nèi)糖、脂肪和蛋白質(zhì)的代謝[3]；維生素B2又稱(chēng)核黃素，在體內(nèi)主要以黃素單核苷酸(flavin mononucleotide,FMN)和黃素腺嘌呤二核苷酸(flavin adenine dinucleotide,FAD)的形式存在，它們是多種氧化酶的輔助因子，在生物氧化過(guò)程中參與氫的傳遞，在能量代謝中，促進(jìn)碳水化合物、蛋白質(zhì)、脂肪、核酸的代謝[4]。根據(jù)營(yíng)養(yǎng)學(xué)研究，馬匹長(zhǎng)期缺乏維生素B1出現(xiàn)生長(zhǎng)受阻現(xiàn)象、被毛光澤下降、痢疾、精神萎靡、神經(jīng)錯(cuò)亂、運(yùn)動(dòng)失調(diào)等癥狀[5]；馬匹長(zhǎng)期缺乏維生素B2出現(xiàn)眼瞼炎、食欲不振、體重減輕等癥狀[6]。伊犁馬是我國(guó)著名的培育品種之一，具有性情溫順、體質(zhì)結(jié)實(shí)緊湊、遺傳性能較穩(wěn)定、力速兼?zhèn)涞忍攸c(diǎn)。但是伊犁馬對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)明確的需要量尚不完善，特別是對(duì)于維生素類(lèi)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的適宜需要量沒(méi)有明確的參考依據(jù)。因此，本試驗(yàn)以12月齡伊犁馬公馬為研究對(duì)象，通過(guò)在飼糧中添加不同水平的維生素B1、維生素B2，綜合評(píng)定維生素B1、維生素B2攝入量對(duì)血漿中維生素B1、維生素B2的含量，紅細(xì)胞轉(zhuǎn)酮酶活性(erythrocyte transketolase activity,E-TKA)，TPP效應(yīng)，紅細(xì)胞谷胱甘肽還原酶活性系數(shù)(erythrocyte glutathione reductase activity coefficient,E-GRAC)，尿液維生素B1、維生素B2排出量的影響，從而確定12月齡伊犁馬對(duì)維生素B1、維生素B2的需要量，為今后對(duì)伊犁馬科學(xué)飼養(yǎng)提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物與試驗(yàn)設(shè)計(jì)

本試驗(yàn)選擇12月齡±5日齡、平均體重為(245.28±18.36) kg的伊犁馬公馬35匹，隨機(jī)分為5組，分別為試驗(yàn)Ⅰ組、試驗(yàn)Ⅱ組、試驗(yàn)Ⅲ組、試驗(yàn)Ⅳ組、試驗(yàn)Ⅴ組，每組7匹。每天每匹馬飼喂2 kg精料補(bǔ)充料，自由采食粗飼料(苜蓿干草)。試驗(yàn)Ⅰ組、試驗(yàn)Ⅱ組、試驗(yàn)Ⅲ組、試驗(yàn)Ⅳ組、試驗(yàn)Ⅴ組每天每匹馬分別添加0、16、32、48和64 mg的維生素B1(純度為99.1%，購(gòu)自江西天新藥業(yè)有限公司)和0、10、20、30和40 mg的維生素B2(純度為99%，購(gòu)自廣濟(jì)藥業(yè)有限公司)，進(jìn)行為期20 d的飼養(yǎng)試驗(yàn)。

1.2 飼養(yǎng)管理

在試驗(yàn)期所有試驗(yàn)馬匹采用分槽分欄飼喂，自由采食粗飼料，自由飲水；將精料補(bǔ)充料平均分為4份，分別進(jìn)行補(bǔ)喂；將每匹馬需要添加的維生素B1、維生素B2分別裝入膠囊，補(bǔ)喂精料補(bǔ)充料的同時(shí)進(jìn)行添加。在試驗(yàn)第15～20天記錄每匹馬每天的采食量及收集每匹馬每天的尿樣，并在試驗(yàn)第20天采集血樣。試驗(yàn)馬匹的飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

表1 飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))

預(yù)混料為每千克飼糧提供The premix provided the following per kg of the diet:VA 480 IU，VB648.96 mg，VD 70.4 IU，VE 21 333.36 IU，泛酸 pantothenic acid 20.46 mg，煙酰胺 nicotinamide 484.85 mg，Cu (as copper sulfate) 10.58 mg，F(xiàn)e (as ferrous sulfate) 35.56 mg，Mn (as manganese sulfate) 33.54 mg，Zn (as zinc sulfate) 30.92 mg，I (as potassium iodide) 2.46 mg，Se (as sodium selenite) 5.93 mg，Co (as cobalt chloride) 1.11 mg。

1.3 樣品、數(shù)據(jù)的采集

1.3.1 數(shù)據(jù)的采集

在試驗(yàn)第15～20天，分別記錄每天每匹馬的采食量及排尿量。

1.3.2 樣品的采集及保存

1.3.2.1 飼草料樣品的采集及保存

在第14天采集馬匹精料補(bǔ)充料樣品及粗飼料樣品各1 kg，將風(fēng)干的樣品經(jīng)粉碎機(jī)40目粉碎，待測(cè)。

1.3.2.2 尿樣的采集及保存

在試驗(yàn)第15～20天全天收集馬匹尿液，將全天尿液充分混勻，量取尿液總體積的10%為待測(cè)樣品，記錄、-20 ℃冷凍保存。最終將同一匹馬6 d的尿樣全部混勻，于-20 ℃避光冷凍保存，待測(cè)。

1.3.2.3 血樣的采集及保存

在試驗(yàn)第20天早晨空腹頸部靜脈采用肝素鈉抗凝管采集血樣，將血樣迅速以1 500×g離心15 min后分離血漿，于-20 ℃避光冷凍保存。

1.3.2.4 血紅細(xì)胞樣的采集及保存

在試驗(yàn)第20天早晨空腹頸部靜脈采用肝素鈉抗凝管采集血樣，將血樣迅速以1 500×g離心15 min后棄去血漿層，在管中加入10 mL生理鹽水，用塑料滴管輕輕吹吸混勻，再以429×g離心10 min，棄上清液得到紅細(xì)胞，以此方法重復(fù)2次后得到紅細(xì)胞，于-20 ℃避光冷凍保存。

1.4 指標(biāo)測(cè)定

1.4.1 維生素B1含量的測(cè)定

血漿的處理：取完全解凍、混勻后的血漿樣品500 μL，加入100 μL 3 mol/L三氯乙酸溶液，充分混合均勻，4 286×g離心10 min后吸取上清液300 μL加入900 μL水飽和乙醚混勻，混勻后4 286×g離心5 min，吸取下層液200 μL進(jìn)行衍生[7]。取室溫解凍、充分混勻后的尿原液，用針頭式過(guò)濾器過(guò)濾后稀釋100倍，吸取200 μL進(jìn)行衍生[8]。稱(chēng)取飼草料樣品1.00 g置于50 mL棕色容量瓶中，加入0.1 mol/L鹽酸溶液35 mL，超聲波水浴中超聲3 min，在高壓滅菌鍋內(nèi)121 ℃保持30 min，取出后輕搖數(shù)次，加入混合酶液(淀粉酶和木瓜蛋白酶各3 g溶于100 mL 2 mol/L乙酸鈉溶液中)37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中12 h，取出冷卻至室溫后加水定容至50 mL，樣品經(jīng)4 286×g離心3 min，取上清液200 μL進(jìn)行衍生[9]。衍生時(shí)在處理液中加入40 μL 12 mmol/L的堿性鐵氰化鉀溶液，渦旋使其充分混勻15 s；加入8 μL 5 mol/L磷酸終止反應(yīng)。色譜條件[7]：PRP-1反相柱(250 mm×4.6 mm，10 μm)；流動(dòng)相為15 mmol/L磷酸二氫鈉∶四氫呋喃=90∶10(V/V)；柱溫25 ℃；流速0.5 mL/min；一元等梯度洗脫。檢測(cè)波長(zhǎng)：激發(fā)波長(zhǎng)(λex)=365 nm，發(fā)射波長(zhǎng)(λem)=435 nm。進(jìn)樣量10 μL。

1.4.2 E-TKA及TPP效應(yīng)的測(cè)定

參照Takeuchi等[10]的方法，分別在540、510 nm的波長(zhǎng)下比色，利用7-景天庚酮糖的含量表示E-TKA；TPP效應(yīng)是通過(guò)體外試驗(yàn)測(cè)定加入TPP前后的E-TKA，兩者之差占基礎(chǔ)活性的百分率。

1.4.3 維生素B2含量的測(cè)定

取充分解凍、混勻后的血漿樣品0.2 mL，加入等體積的15 mmol/L 10%乙酸鎂，充分混勻靜置5 min，65 ℃水浴15 min，加0.1 mL 10%三氯乙酸，4 286×g離心10 min后取上清液，避光放置于4 ℃冰箱，供高效液相色譜(HPLC)分析[11]。取室溫解凍、充分混勻后的尿原液，用針頭式過(guò)濾器過(guò)濾，濾液稀釋5倍后進(jìn)行HPLC分析[12]。色譜條件[11]：XB-C18(4.6 mm×100 mm，5 μm)色譜柱；流動(dòng)相為10 mmol/L pH 3.4的磷酸鉀緩沖液∶乙腈=85∶15(V/V)；柱溫25 ℃；流速1 mL/min；一元等梯度洗脫。檢測(cè)波長(zhǎng)：λex=445 nm，λem=530 nm。進(jìn)樣量10 μL。

1.4.4 E-GRAC的測(cè)定

參照李麗花[13]的方法進(jìn)行。

1.5 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)結(jié)果均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示。試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 18.0軟件的單因素方差分析(one-way ANOVA)進(jìn)行方差分析，各組間的多重比較采用Duncan氏法進(jìn)行。

2 結(jié)果與分析

2.1 維生素B1不同攝入量對(duì)12月齡伊犁馬血漿維生素B1含量、E-TKA、TPP效應(yīng)及尿液維生素B1排出量的影響

由表2可知，隨著實(shí)際攝入維生素B1量的增加，12月齡伊犁馬血漿維生素B1含量逐漸升高，以試驗(yàn)Ⅰ組血漿維生素B1含量(6.18 μg/L)最低，顯著低于試驗(yàn)Ⅲ組(P<0.05)，極顯著低于試驗(yàn)Ⅳ組、試驗(yàn)Ⅴ組(P<0.01)；當(dāng)實(shí)際攝入維生素B1量達(dá)到或超過(guò)33.49 mg/d(試驗(yàn)Ⅱ組)時(shí)，血漿維生素B1含量達(dá)到較高水平(7.04～8.12 μg/L)，試驗(yàn)Ⅱ組、試驗(yàn)Ⅲ組、試驗(yàn)Ⅳ組、試驗(yàn)Ⅴ組之間差異均不顯著(P>0.05)，即血漿維生素B1含量從試驗(yàn)Ⅱ組之后逐漸趨于穩(wěn)定。以血漿維生素B1含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，得到12月齡伊犁馬對(duì)維生素B1的需要量為33.49 mg/(匹·d)。

隨著實(shí)際攝入維生素B1量的增加，12月齡伊犁馬E-TKA逐漸提高，以試驗(yàn)Ⅰ組E-TKA(10.20 U/mL紅細(xì)胞)最低，極顯著低于試驗(yàn)Ⅲ組、試驗(yàn)Ⅳ組和試驗(yàn)Ⅴ組(P<0.01)；當(dāng)實(shí)際攝入維生素B1達(dá)到或超過(guò)48.27 mg/d(試驗(yàn)Ⅲ組)時(shí)，E-TKA達(dá)到較高水平(17.43～21.29 U/mL紅細(xì)胞)，試驗(yàn)Ⅲ組、試驗(yàn)Ⅳ組、試驗(yàn)Ⅴ組之間差異不顯著(P>0.05)，即E-TKA從試驗(yàn)Ⅲ組之后逐漸趨于穩(wěn)定。以E-TKA為評(píng)價(jià)指標(biāo)，得到12月齡伊犁馬對(duì)維生素B1的需要量為48.27 mg/(匹·d)。

隨著實(shí)際攝入維生素B1量的增加，12月齡伊犁馬TPP效應(yīng)逐漸降低，以試驗(yàn)Ⅰ組TPP效應(yīng)(53.83%)最高，顯著高于試驗(yàn)Ⅲ組(P<0.05)，極顯著高于試驗(yàn)Ⅳ組、試驗(yàn)Ⅴ組(P<0.01)；當(dāng)實(shí)際攝入維生素B1量達(dá)到或超過(guò)48.27 mg/d(試驗(yàn)Ⅲ組)時(shí)，TPP效應(yīng)達(dá)到較低水平(6.62%～30.05%)。以TPP效應(yīng)為評(píng)價(jià)指標(biāo)，得到12月齡伊犁馬對(duì)維生素B1的需要量為48.27 mg/(匹·d)。

隨著實(shí)際攝入維生素B1量的增加，12月齡伊犁馬尿液維生素B1排出量逐漸增加，以試驗(yàn)Ⅰ組尿液維生素B1排出量(2.03 mg/d)最少，極顯著低于試驗(yàn)Ⅲ組、試驗(yàn)Ⅳ組、試驗(yàn)Ⅴ組(P<0.01)；當(dāng)實(shí)際攝入維生素B1量達(dá)到或超過(guò)48.27 mg/d(試驗(yàn)Ⅲ組)時(shí)，尿液維生素B1排出量達(dá)到較高水平(6.41～7.34 mg/d)。以尿液維生素B1排出量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，得到12 月齡伊犁馬對(duì)維生素B1的需要量為48.27 mg/(匹·d)。

表2 維生素B1不同攝入量對(duì)12月齡伊犁馬血漿維生素B1含量、E-TKA、TPP效應(yīng)以及尿液維生素B1排出量的影響

Table 2 Effects of different intakes of VB1on plasma VB1content, E-TKA, TPP-effect and urinary VB1content of 12-month-oldYilihorses

項(xiàng)目Items試驗(yàn)Ⅰ組TrialgroupⅠ試驗(yàn)Ⅱ組TrialgroupⅡ試驗(yàn)Ⅲ組TrialgroupⅢ試驗(yàn)Ⅳ組TrialgroupⅣ試驗(yàn)Ⅴ組TrialgroupⅤ維生素B1添加量VB1supplementation/[mg/(匹·d)]016324864干物質(zhì)采食量DMI/(kg/d)9.22±0.879.04±0.899.10±0.789.10±0.378.99±0.42實(shí)際攝入維生素B1量PracticalintakeofVB1/[mg/(匹·d)]19.00±1.0833.49±1.1048.27±0.9762.96±0.4677.53±0.52血漿維生素B1含量PlasmaVB1content/(μg/L)6.18±0.26Bb7.04±0.68ABab7.59±0.83ABa8.39±1.08Aa8.12±1.51Aa紅細(xì)胞轉(zhuǎn)酮酶活性E-TKA/(U/mL紅細(xì)胞)10.20±2.76Cb12.13±3.83CBb17.43±5.66ABa20.81±2.33Aa21.29±3.2AaTPP效應(yīng)TPP-effect/%53.83±13.63Aa41.87±18.06Aab30.05±16.53ABbc12.25±11.9Bcd6.62±6.11Bd尿液維生素B1排出量UrinaryVB1output/(mg/d)2.03±0.30Bc3.07±0.49Bc6.41±1.21Ab6.53±2.00Ab7.34±1.77Aa

同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)不同小寫(xiě)字母表示差異顯著(P<0.05)，不同大寫(xiě)字母表示差異極顯著(P<0.01)，相同或無(wú)字母表示差異不顯著(P>0.05)。下表同。

Values in the same row with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05), and with different capital letter superscripts mean extremely significant difference (P<0.01), while with the same or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05). The same as below.

2.2 維生素B2不同攝入量對(duì)12月齡伊犁馬血漿維生素B2含量、E-GRAC及尿液維生素B2排出量的影響

由表3可知，隨著實(shí)際攝入維生素B2量的增加，12月齡伊犁馬血漿維生素B2含量出現(xiàn)波動(dòng)變化，以試驗(yàn)Ⅰ組血漿維生素B2含量(11.79 μg/L)最低，顯著低于試驗(yàn)Ⅲ組、試驗(yàn)Ⅳ組(P<0.05)，極顯著低于試驗(yàn)Ⅱ組、試驗(yàn)Ⅴ組(P<0.01)；當(dāng)實(shí)際攝入維生素B2量達(dá)到或超過(guò)31.68 mg/d(試驗(yàn)Ⅱ組)時(shí)，血漿維生素B2含量達(dá)到較高水平(14.12～15.19 μg/L)，試驗(yàn)Ⅱ組、試驗(yàn)Ⅲ組、試驗(yàn)Ⅳ組和試驗(yàn)Ⅴ組之間差異均不顯著(P>0.05)，即血漿維生素B2含量從試驗(yàn)Ⅱ組之后逐漸趨于穩(wěn)定。以血漿維生素B2含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，得到12月齡伊犁馬對(duì)維生素B2的需要量為31.68 mg/(匹·d)。

隨著實(shí)際攝入維生素B2量的增加，12月齡伊犁馬E-GRAC逐漸降低，以試驗(yàn)Ⅰ組E-GRAC(1.03)最高，極顯著高于試驗(yàn)Ⅱ組、試驗(yàn)Ⅲ組、試驗(yàn)Ⅳ組、試驗(yàn)Ⅴ組(P<0.01)；當(dāng)實(shí)際攝入維生素B2量達(dá)到或超過(guò)31.68 mg/d(試驗(yàn)Ⅱ組)時(shí)，E-GRAC達(dá)到較低水平(0.68～0.72)，試驗(yàn)Ⅱ組、試驗(yàn)Ⅲ組、試驗(yàn)Ⅳ組、試驗(yàn)Ⅴ組之間差異均不顯著(P>0.05)，即E-GRAC從試驗(yàn)Ⅱ組之后逐漸趨于穩(wěn)定。以E-GRAC為評(píng)價(jià)指標(biāo)，得到12月齡伊犁馬對(duì)維生素B2的需要量為31.68 mg/(匹·d)。

隨著實(shí)際攝入維生素B2量的增加，12月齡伊犁馬尿液維生素B2排出量逐漸增加，以試驗(yàn)Ⅰ組尿液維生素B2排出量(3.6 mg/d)最少，極顯著低于試驗(yàn)Ⅲ組、試驗(yàn)Ⅳ組、試驗(yàn)Ⅴ組(P<0.01)；當(dāng)實(shí)際攝入維生素B2量達(dá)到或超過(guò)31.68 mg/d(試驗(yàn)Ⅱ組)平時(shí)，尿液維生素B2排出量達(dá)到較高水平(5.23～7.10 mg/d)，試驗(yàn)Ⅲ組、試驗(yàn)Ⅳ組、試驗(yàn)Ⅴ組之間差異均不顯著(P>0.05)，即尿液維生素B2排出量從試驗(yàn)Ⅱ組之后逐漸趨于穩(wěn)定。以尿液維生素B2排出量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，得到12月齡伊犁馬對(duì)維生素B2的需要量為31.68 mg/(匹·d)。

表3 維生素B2不同攝入量對(duì)12月齡伊犁馬血漿維生素B2含量、E-GRAC及尿液維生素B2排出量的影響

Table 3 Effects of different intakes of VB2on plasma VB2content, E-GRAC and urinary VB2output of 12-month-oldYilihorses

項(xiàng)目Items試驗(yàn)Ⅰ組TrialgroupⅠ試驗(yàn)Ⅱ組TrialgroupⅡ試驗(yàn)Ⅲ組TrialgroupⅢ試驗(yàn)Ⅳ組TrialgroupⅣ試驗(yàn)Ⅴ組TrialgroupⅤ維生素B2添加量VB2supplementation/[mg/(匹·d)]010203040干物質(zhì)采食量DMI/(kg/d)9.22±0.879.04±0.899.10±0.789.10±0.378.99±0.42實(shí)際攝入維生素B2量PracticalintakeofVB2/[mg/(匹·d)]21.95±1.3731.68±1.3941.77±1.2351.53±0.4861.26±0.12血漿維生素B2含量PlasmaVB2content/(μg/L)11.79±1.53Bb15.19±0.99Aa14.12±1.27ABa14.29±2.24ABa15.01±2.77Aa紅細(xì)胞谷胱甘肽還原酶活性系數(shù)E-GRAC1.03±0.30Aa0.72±0.22Bb0.72±0.05Bb0.69±0.10Bb0.68±0.04Bb尿液維生素B2排出量UrinaryVB2output/(mg/d)3.60±0.39Bb5.23±0.71Bb6.39±1.42Aa6.72±0.64Aa7.10±1.79Aa

3 討 論

3.1 維生素B1不同攝入量對(duì)血漿維生素B1含量、E-TKA、TPP效應(yīng)以及尿液維生素B1排出量的影響

維生素B1是一種維持正常糖代謝以及保證神經(jīng)、消化系統(tǒng)功能正常的物質(zhì)，對(duì)維持動(dòng)物的生長(zhǎng)、健康、發(fā)育、繁殖、免疫均具有十分重要的意義。馬屬動(dòng)物維生素B1缺乏的臨床表現(xiàn)是食欲不振、心率降低，慢性癥狀表現(xiàn)為腹瀉、厭食癥、心搏過(guò)緩、肌肉松弛抽搐、感覺(jué)過(guò)敏、共濟(jì)失調(diào)和痙攣等[14-15]。因此，維生素B1是馬屬動(dòng)物維持機(jī)體正常代謝不可缺少的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。維生素B1在機(jī)體的營(yíng)養(yǎng)狀況評(píng)價(jià)常用指標(biāo)有血漿維生素B1含量、E-TKA、TPP效應(yīng)及尿液維生素B1排出量等，根據(jù)不同維生素B1攝入量對(duì)血漿維生素B1含量、E-TKA、TPP效應(yīng)及尿液維生素B1排出量等指標(biāo)的影響，從而確定動(dòng)物機(jī)體對(duì)維生素B1的適宜需要量。Tallaksen等[16]以血漿維生素B1含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，得到30位酒精肝患者對(duì)維生素B1的需要量為52.50 mg/d；Reinken等[17]通過(guò)E-TKA和TPP效應(yīng)評(píng)價(jià)了1月齡至14周歲兒童的維生素B1營(yíng)養(yǎng)狀況。Ziporin等[18]研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)大量攝入維生素B1時(shí)，尿液中維生素B1的含量迅速增加，當(dāng)維生素B1攝入量在0.6～2.0 mg/d時(shí)，根據(jù)維生素B1攝入量對(duì)尿液維生素B1排出量的影響，得到8位健康的男青年對(duì)維生素B1的需要量為0.81 mg/d。

本試驗(yàn)測(cè)得5組12月齡伊犁馬血漿中維生素B1的含量分別為6.18、7.04、7.59、8.39、8.12 μg/L，Hünsche等[19]研究表明馬匹血漿維生素B1的含量范圍為5.05～23.8 μg/L，本試驗(yàn)中各組試驗(yàn)馬匹血漿維生素B1含量均在此范圍內(nèi)，隨著實(shí)際攝入維生素B1量的增加，血漿中維生素B1的含量先增加最后逐漸趨于穩(wěn)定，因此，根據(jù)不同維生素B1攝入量對(duì)血漿維生素B1含量的影響，得到12月齡伊犁馬對(duì)維生素B1的需要量為48.27 mg/(匹·d)。

轉(zhuǎn)酮酶(transketolase，TK)是動(dòng)物紅細(xì)胞中的一種酶，其輔酶成分是維生素B1的磷酸衍生物TPP，維生素B1的滿足程度將影響到紅細(xì)胞中轉(zhuǎn)酮酶活性的高低，因此，動(dòng)物E-TKA經(jīng)常用于判定動(dòng)物機(jī)體的維生素B1營(yíng)養(yǎng)狀況；TPP效應(yīng)是通過(guò)體外試驗(yàn)測(cè)定加入TPP前后的E-TKA的差值得到的，加入TPP后，E-TKA增加越多說(shuō)明維生素B1缺乏越嚴(yán)重，TPP效應(yīng)是目前評(píng)價(jià)維生素B1營(yíng)養(yǎng)狀況較為常用的指標(biāo)[20]。在本試驗(yàn)中，增加維生素B1攝入量增加了E-TKA，降低了TPP效應(yīng)，因此，根據(jù)不同維生素B1攝入量對(duì)E-TKA、TPP效應(yīng)的影響，得到12月齡伊犁馬對(duì)維生素B1的需要量為48.27 mg/(匹·d)。

飼糧中攝入的維生素B1經(jīng)小腸吸收進(jìn)入血液后主要從腎臟系統(tǒng)中排出，當(dāng)額外添加大量的維生素B1時(shí)，可通過(guò)腎小球過(guò)濾作用將機(jī)體中多余的維生素B1隨尿液排出體外[21]。由本試驗(yàn)結(jié)果可知，以尿液維生素B1排出量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，得到12月齡伊犁馬對(duì)維生素B1的需要量為48.27 mg/(匹·d)。

3.2 維生素B2不同攝入量對(duì)血漿維生素B2含量、E-GRAC及尿液維生素B2排出量的影響

根據(jù)營(yíng)養(yǎng)學(xué)研究，機(jī)體內(nèi)長(zhǎng)期缺乏維生素B2會(huì)影響機(jī)體基礎(chǔ)代謝，出現(xiàn)生長(zhǎng)受阻現(xiàn)象、嚴(yán)重缺乏會(huì)導(dǎo)致被毛粗亂、脫落，皮質(zhì)溢性皮膚等癥狀。Mc Dowell[22]研究表明，瘤胃發(fā)育不全的犢牛和羔羊會(huì)發(fā)生維生素B2缺乏癥，主要表現(xiàn)為口腔黏膜充血、口角發(fā)炎、流涎、流淚及厭食、腹瀉及生長(zhǎng)不良等非特異性癥狀。因此，維生素B2對(duì)于動(dòng)物機(jī)體有至關(guān)重要的作用。對(duì)動(dòng)物機(jī)體維生素B2營(yíng)養(yǎng)狀況的評(píng)價(jià)指標(biāo)有血漿維生素B2、FAD、FMN的含量、紅細(xì)胞中維生素B2、FAD、FMN的含量，E-GRAC以及尿液維生素B2排出量等指標(biāo)[23]，這些指標(biāo)是評(píng)價(jià)動(dòng)物機(jī)體維生素B2營(yíng)養(yǎng)狀況的敏感指標(biāo)，已經(jīng)被廣泛用于評(píng)價(jià)畜禽維生素B2需要量的研究中。Hustad等[24]研究發(fā)現(xiàn)，以血漿維生素B2含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，大于60歲的維生素B2缺乏的老人，補(bǔ)充維生素B2的量為16 mg/d。陳金文等[25]在肉用仔雞維生素B2需要量研究中，以E-GRAC為評(píng)價(jià)指標(biāo)得到肉用仔雞維生素B2需要量為6.4 mg/d；Bates等[26]研究表明，以E-GRAC為評(píng)價(jià)指標(biāo)，非洲哺乳期女性需額外添加2.0 mg/d。郭長(zhǎng)江等[27]以尿液維生素B2排出量為評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，得到重度勞動(dòng)軍人對(duì)維生素B2的需要量為1.8 mg/d；Lo[28]研究報(bào)道，以尿液維生素B2排出量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，得到1～19歲青年對(duì)維生素B2的需要量為1.5～2.0 mg/d。

血漿中維生素B2的含量可以直接反映機(jī)體維生素B2的營(yíng)養(yǎng)狀況[29]。本試驗(yàn)中，隨著實(shí)際攝入維生素B2量的增加，血漿中維生素B2含量出現(xiàn)了波動(dòng)變化；以血漿維生素B2含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，得到12月齡伊犁馬對(duì)維生素B2的需要量為31.68 mg/(匹·d)。

谷胱甘肽還原酶(glutathione reductase，GR)主要存在于紅細(xì)胞中，額外加入FAD，把未活化的GR激活，可測(cè)的GR的總活性。總的GR消耗煙酰胺腺嘌呤二核苷磷酸(NADPH)比活化型GR消耗的多，在反應(yīng)體系中，將額外加入FAD的吸光度值和未加入FAD的吸光度值的比值稱(chēng)為E-GRAC[30]。在本試驗(yàn)中，隨著實(shí)際攝入維生素B2量的增加，E-GRAC逐漸降低，以E-GRAC為評(píng)價(jià)指標(biāo)，得到12月齡伊犁馬對(duì)維生素B2的需要量為31.68 mg/(匹·d)。

尿液中維生素B2的排出量是評(píng)價(jià)動(dòng)物機(jī)體較常用的指標(biāo)，一般常用方法有4 h尿負(fù)荷試驗(yàn)、24 h尿液維生素B2排出量等方法，在本試驗(yàn)中利用24 h尿液維生素B2排出量測(cè)定12月齡伊犁馬對(duì)維生素B2的需要量。以24 h尿液維生素B2排出量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，得到12月齡伊犁馬對(duì)維生素B2的需要量為31.68 mg/(匹·d)。

3.3 伊犁馬對(duì)維生素B1和維生素B2需要量的探討

在本試驗(yàn)條件下，以血漿維生素B1含量、E-TKA、TPP效應(yīng)以及尿液維生素B1排出量和，綜合評(píng)價(jià)得到12月齡伊犁馬對(duì)維生素B1的需要量為48.27 mg/(匹·d)；以血漿維生素B2含量、E-GRAC以及尿液維生素B2排出量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，綜合評(píng)價(jià)得到12月齡伊犁馬對(duì)維生素B2的需要量為31.68 mg/(匹·d)。而NRC(2007)[31]標(biāo)準(zhǔn)中以成熟體重為400 kg計(jì)算，12月齡馬匹對(duì)維生素B1的需要量為19.30 mg/(匹·d)，對(duì)維生素B2的需要量為12.80 mg/(匹·d)；以成熟體重為500 kg計(jì)算，12月齡馬匹對(duì)維生素B1的需要量為24.10 mg/(匹·d)，對(duì)維生素B2的需要量為16.1 mg/(匹·d)，本試驗(yàn)結(jié)果比NRC(2007)標(biāo)準(zhǔn)需要量偏高。這可能與本試驗(yàn)馬匹能量、蛋白質(zhì)攝入量高有關(guān)。李麗花[13]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中糖類(lèi)物質(zhì)含量的增加顯著提高動(dòng)物對(duì)維生素B1的需要量。Ferraris等[32]研究發(fā)現(xiàn)，高糖、高蛋白質(zhì)會(huì)增加機(jī)體對(duì)維生素B2的需要量。在本試驗(yàn)中，12月齡伊犁馬粗蛋白質(zhì)(CP)攝入量為970.0 g/d，無(wú)氮浸出物(NFE)為3 670 g/d、消化能(DE)攝入量為114.68 MJ/d，而NRC(2007)標(biāo)準(zhǔn)提供的成熟體重為400 kg的12月齡馬匹對(duì)CP的需要量為677 g/d、DE為62.76 MJ/d，成熟體重為500 kg的12月齡馬匹對(duì)CP的需要量為846 g/d、DE為78.66 MJ/d。本試驗(yàn)12月齡馬匹攝入的是高能量、高蛋白質(zhì)飼糧，提高了機(jī)體對(duì)維生素B1、維生素B2的需要量，這可能是導(dǎo)致本試驗(yàn)所得12月齡伊犁馬維生素B1、維生素B2需要量高于NRC(2007)標(biāo)準(zhǔn)的主要原因。

4 結(jié) 論

在本試驗(yàn)條件下，以血漿維生素B1含量、E-TKA、TPP效應(yīng)及尿液維生素B1排出量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，綜合評(píng)價(jià)得到12月齡馬對(duì)維生素B1的需要量為48.27 mg/(匹·d)；以血漿維生素B2含量、E-GRAC及尿液維生素B2排出量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，綜合評(píng)價(jià)得到12月齡伊犁馬對(duì)維生素B2的需要量為31.68 mg/(匹·d)。

[1] 孫遠(yuǎn)明,余群力.食品營(yíng)養(yǎng)學(xué)[M].北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社,2002:95-100.

[2] MANZETTI S,ZHANG J,VAN DER SPOEL D.Thiamin function,metabolism,uptake,and transport[J].Biochemistry,2014,53(5):821-835.

[3] MAKARCHIKOV A F,LAKAYE B,GULYAI I E,et al.Thiamine triphosphate and thiamine triphosphatase activities:from bacteria to mammals[J].Cellular and Molecular Life Sciences CMLS,2003,60(7):1477-1488.

[4] MORIYAMA Y.Riboflavin transporter is finally identified[J].Journal of Biochemistry,2011,150(4):341-343.

[5] EVANS E T R,EVANS W C,ROBERTS H E,et al.The treatment of a naturally occurring outbreak of bracken staggers in ponies[J].British Veterinary Journal,1951,107:399-411.

[6] CARROLL F D,GROSS H,HOWELL C E.The synthesis of B vitamins in the horse[J].Journal of Animal Science,1949,8(2):290-299.

[7] TALLAKSEN C M E,B?HMER T,BELL H.Concomitant determination of thiamin and its phosphate esters in human blood and serum by high-performance liquid chromatography[J].Journal of Chromatography B:Biomedical Sciences and Applications,1991,564(1):127-136.

[8] ROSER R L,ANDRIST A H,HARRINGTON W H,et al.Determination of urinary thiamine by high-pressure liquid chromatography utilizing the thiochrome fluorescent method[J].Journal of Chromatography B:Biomedical Sciences and Applications,1978,146(1):43-53.

[9] 陳福華.飼料檢驗(yàn)化驗(yàn)員手冊(cè)[M].長(zhǎng)沙:湖南科學(xué)技術(shù)出版社,2013:202-205.

[10] TAKEUCHI T,NISHINO K,ITOKAWA Y.Improved determination of transketolase activity in erythrocytes[J].Clinical Chemistry,1984,30(5):658-661.

[11] CAPO-CHICHI C D,GUéANT J L,FEILLET F,et al.Analysis of riboflavin and riboflavin cofactor levels in plasma by high-performance liquid chromatography[J].Journal of Chromatography B:Biomedical Sciences and Applications,2000,739(1):219-224.

[12] SHIBATA K,SUGITA C,SANO M,et al.Urinary excretion of B-group vitamins reflects the nutritional status of B-group vitamins in rats[J].Journal of Nutritional Science,2013,2:e12.

[13] 李麗花.硫胺素、核黃素和煙酰胺對(duì)肥胖大鼠能量代謝和空間學(xué)習(xí)記憶能力的影響[D].碩士學(xué)論文.青島:青島大學(xué),2014.

[14] CYMBALUK N F,FRETZ P B,LOEW F M.Amprolium-induced thiamine deficiency in horses:clinical features[J].American Journal of Veterinary Research,1978,39(2):255-261.

[15] 潘曉花,王夢(mèng)芝,付聰,等.飼糧精粗比和添加硫胺素對(duì)奶牛體外瘤胃發(fā)酵參數(shù)及菌群結(jié)構(gòu)的影響[J].動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào),2013,25(1):88-99.

[16] TALLAKSEN C M E,B?HMER T,BELL H.Blood and serum thiamin and thiamin phosphate esters concentrations in patients with alcohol dependence syndrome before and after thiamin treatment[J].Alcoholism:Clinical and Experimental Research,1992,16(2):320-325.

[17] REINKEN L,STOLLEY H,DROESE W.Biochemical assessment of thiamine nutrition in childhood[J].European Journal of Pediatrics,1979,131(4):229-235.

[18] ZIPORIN Z Z,NUNES W T,POWELL R C,et al.Thiamine requirement in the adult human as measured by urinary excretion of thiamine metabolites[J].The Journal of Nutrition,1965,85(3):297-304.

[19] HüNSCHE K,WOLF P,LANGE G,et al.Investigations on adverse effects of feeding dried marsh horsetail (Equisetumpalustre) to ruminants and horses[J].Proceedings of the Nutrition Society Physiol,2010,19(2):132-139.

[20] LONSDALE D.Red cell transketolase studies in a private practice specializing in nutritional correction[J].Journal of the American College of Nutrition,1988,7(1):61-67.

[21] FUKUWATARI T,YOSHIDA E,TAKAHASHI K,et al.Effect of fasting on the urinary excretion of water-soluble vitamins in humans and rats[J].Journal of Nutritional Science and Vitaminology,2010,56(1):19-26.

[22] MC DOWELL L R.Riboflavin[M]//MCDOWELL L R,CUNHA T J.Vitamins in animal nutrition:comparative aspects to human[M].Florida:Academic Press,1989:183-209.

[23] EUSSEN S J P M,VOLLSET S E,HUSTAD S,et al.Plasma vitamins B2,B6,and B12,and related genetic variants as predictors of colorectal cancer risk[J].Cancer Epidemiology Biomarkers & Prevention,2010,19(10):2549-2561.

[24] HUSTAD S,MCKINLEY M C,MCNULTY H,et al.Riboflavin,flavin mononucleotide,and flavin adenine dinucleotide in human plasma and erythrocytes at baseline and after low-dose riboflavin supplementation[J].Clinical Chemistry,2002,48(9):1571-1577.

[25] 陳金文,馬振凱,顧景范.肉用仔雞核黃素需要量的研究[J].營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào),1990,12(4):349-354.

[26] BATES C J,PRENTICE A M,PAUL A A,et al.Riboflavin status in Gambian pregnant and lactating women and its implications for Recommended Dietary Allowances[J].The American Journal of Clinical Nutrition,1981,34(5):928-935.

[27] 郭長(zhǎng)江,韋京豫,楊繼軍,等.我軍重度勞動(dòng)部隊(duì)推薦的核黃素?cái)z入量[J].解放軍預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志,2010,28(4):238-241.

[28] LO C S.Riboflavin status of adolescent southern Chinese:riboflavin saturation studies[J].Human Nutrition Clinical Nutrition,1985,39(4):297-301.

[29] MADIGAN S M,TRACEY F,MCNULTY H,et al.Riboflavin and vitamin B6 intakes and status and biochemical response to riboflavin supplementation in free-living elderly people[J].The American Journal of Clinical Nutrition,1998,68(2):389-295.

[30] PRASAD A P,LAKSHMI A V,BAMJI M S.Interpretation of erythrocyte glutathione reductase activation test values for assessing riboflavin status[J].European Journal of Clinical Nutrition,1992,46(10):753-758.

[31] NRC.Nutrient requirements of horses[S].6th ed.WashingtonDC:National Academies Press,2007:296-299.

[32] FERRARIS R P,DIAMOND J.Crypt-villus site of glucose transporter induction by dietary carbohydrate in mouse intestine[J].The American Journal of Physiology,1992,262(61):1069-1073.

*Corresponding author, professor, E-mail： yangkailun2002@aliyun.com

(責(zé)任編輯 菅景穎)

Requirements of Vitamin B1and Vitamin B2of 12-Month-OldYiliHorses

CHEN Junhong HE Xueman DENG Haifeng LI Xiaobin LIU Zhen MA Jun GAN Jianrong TANG Xuemei YANG Kailun*

(XinjiangKeyLaboratoryofMeat&MilkProductionHerbivoreNutrition,XinjiangAgriculturalUniversity,Urumqi830052,China)

In order to get the vitamin B1and vitamin B2requirements ofYilihorses, the effects of different intakes of vitamin B1and vitamin B2on blood and urinary related indices of 12-month-oldYilihorses were studied. Thirty-five healthy maleYilihorses with the age of 12 months±5 days and the average body weight of (245.28±18.36) kg were randomly divided into 5 groups (trial groups Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ, Ⅳ and Ⅴ), and each group had 7 horses. The horses in trail groups Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ, Ⅳ and Ⅴ were fed the same basal diet added 0, 16, 32, 48 and 64 mg/(horse·d) of vitamin B1and 0, 10, 20, 30 and 40 mg/(horse·d) of vitamin B2for 20 days, respectively. The practical intakes of vitamin B1and vitamin B2in trail groups Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ, Ⅳ and Ⅴ were 19.00, 33.49, 48.27, 62.96, 77.53 mg/(horse·d) and 21.95, 31.68, 41.77, 51.53, 61.26 mg/(horse·d), respectively. The results showed as follows: with the practical intake of vitamin B1increasing, plasma vitamin B1content, erythrocyte transketolase activity (E-TKA) and urinary vitamin B1output increased gradually, while the thiamin pyrophosphate effect (TPP-effect) decreased gradually. The plasma vitamin B1content in trail group Ⅰ was significantly lower than that in trail group Ⅲ (P<0.05), and extremely significantly lower than that in trail groups Ⅳ and Ⅴ (P<0.01). The E-TKA in trail group Ⅰ was extremely significantly lower than that in trail groups Ⅲ, Ⅳ and Ⅴ (P<0.01). The TPP-effect in trail group Ⅰ was significantly higher than that in trail group Ⅲ (P<0.05), and extremely significantly higher than that in trail groups Ⅳ and Ⅴ (P<0.01). The urinary vitamin B1output in trail group Ⅰ was extremely significantly lower than that in trail groups Ⅲ, Ⅳ and Ⅴ (P<0.01). With the practical intake of vitamin B2increasing, the plasma vitamin B2content showed a fluctuating change, the erythrocyte glutathione reductase activity coefficient (E-GRAC) decreased gradually, and the urinary vitamin B1output increased gradually. The plasma vitamin B2content in trail group Ⅰ was significantly lower than that in trail groups Ⅲ and Ⅳ (P<0.05), and extremely significantly lower than that in trail group Ⅴ (P<0.01). The E-GRAC in trail group Ⅰ was extremely significantly higher than that in trail groups Ⅱ, Ⅲ,Ⅳ and Ⅴ (P<0.01). The urinary vitamin B2output in trail group Ⅰ was extremely significantly lower than that in trail groups Ⅲ, Ⅳ and Ⅴ (P<0.01). Base on the results of this study, the optimal requirements of vitamin B1and vitamin B2are 48.27 and 31.68 mg/(horse·d) for 12-month-oldYilihorses, respectively.[ChineseJournalofAnimalNutrition, 2017, 29(1)：118-126]

Yilihorses; vitamin B1; vitamin B2; requirement

10.3969/j.issn.1006-267x.2017.01.014

2016-07-12

“十二五”農(nóng)村領(lǐng)域國(guó)家科技計(jì)劃課題(2012BAD45B02)

陳俊宏(1991—)，男，甘肅張掖人，碩士研究生，研究方向?yàn)椴菔硠?dòng)物動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)代謝。E-mail： 63793760@qq.com

*通信作者：楊開(kāi)倫，教授，博士生導(dǎo)師，E-mail： yangkailun2002@aliyun.com

S816

A

1006-267X(2017)01-0118-09