范曉飛，劉貴京，王穎穎

桂枝湯預處理對急性心肌缺血兔血清TNF-α、IL-6含量的影響

范曉飛，劉貴京，王穎穎

目的 觀察桂枝湯預處理對急性心肌缺血兔血清腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細胞介素-6(IL-6)含量的影響，探討其對缺血心肌的保護作用。方法 將36只新西蘭大白兔隨機分為假手術(shù)組、模型組、藥物組。藥物組用桂枝湯灌胃2周，假手術(shù)組和模型組給予等量蒸餾水灌胃2周。采用結(jié)扎左冠狀動脈前降支法復制心肌缺血模型(藥物組和模型組)，假手術(shù)組只穿線不結(jié)扎。采用ELISA法檢測血清TNF-α和IL-6水平，彩色多普勒超聲心動圖檢測心臟射血分數(shù)(EF)。結(jié)果 與假手術(shù)組比較，模型組結(jié)扎后各時間點TNF-α、IL-6表達均升高(P<0.05)，分別于結(jié)扎2 h、4 h達到高峰；與模型組各時間點比較，桂枝湯組結(jié)扎后各時間點TNF-α和IL-6表達均下降，結(jié)扎后6 h心臟射血分數(shù)增高(P<0.05)。結(jié)論 心肌缺血后炎性介質(zhì)TNF-α、IL-6水平明顯升高，桂枝湯復合方劑可能通過減少其釋放，改善缺血損傷，從而保護心肌。

心肌缺血；桂枝湯；腫瘤壞死因子-α；白細胞介素-6

急性心肌缺血是由于心肌供血不足和(或)心肌耗氧增加，引起心肌血氧供需失衡。近年來，大量研究[1-3]表明，缺血性心肌損傷是一種炎癥反應。心肌缺血后，受損的心肌組織啟動固有性免疫應答和適應性免疫應答，介導炎癥細胞活化、炎癥介質(zhì)釋放，誘導缺血區(qū)炎癥反應發(fā)生[4-6]。因此，減少炎癥介質(zhì)釋放可保護缺血心肌。

桂枝湯是由桂枝、白芍、炙甘草、生姜和大棗組成的中藥復方制劑。研究表明，桂枝湯可抑制氧化應激反應、降低血脂及血管內(nèi)皮活性因子[7-9]，對高脂血癥、冠心病等有重要防治意義。本實驗擬通過結(jié)扎兔冠狀動脈前降支法建立心肌缺血模型，觀察桂枝湯預處理對急性心肌缺血兔血漿腫瘤壞死因子α(TNF-α)和白細胞介素-6(IL-6)的影響，為桂枝湯防治心肌缺血提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥物及試劑 桂枝湯由河北工程大學附屬醫(yī)院提供，桂枝、白芍、炙甘草、生姜、大棗按原方比例10∶10∶7∶10∶10院內(nèi)煎藥室統(tǒng)一加工配置，濃度為2 g/mL。TNF-α、IL-6 ELISA試劑盒購置于北京鼎國昌盛生物技術(shù)有限公司。

1.2 動物及分組 健康清潔級新西蘭大白兔36只，體重0.9 kg～1.2 kg，雌雄各半，由河北醫(yī)科大學實驗動物研究中心提供。適應性飼養(yǎng)1周后，按隨機數(shù)字表法分為3組：假手術(shù)組、模型組、藥物組，每組12只。藥物組術(shù)前給予桂枝湯6 g/(kg·d)，換算成容積3 mL/(kg·d)灌胃2周；假手術(shù)組和模型組給予等量蒸餾水灌胃2周。

1.3 動物模型制備 采用結(jié)扎左冠狀動脈前降支方法復制兔急性心肌缺血模型。將兔以2%戊巴比妥鈉(50 mg/kg)耳緣靜脈注射麻醉，待其呼吸平穩(wěn)，角膜反射消失和肌張力減弱后固定于手術(shù)臺上。RM6200型多導生理記錄儀(日本島津公司)同步監(jiān)視標準Ⅱ?qū)?lián)心電圖。判斷合適切口(胸骨左緣切口)并畫線。75%酒精消毒切口部分，于胸骨左側(cè)0.5 cm～1.0 cm處做與胸骨平行的縱形切口，各層肌肉分層打開，剪斷第3、4肋骨及肋間肌，盡量撐開，剪開心包，暴露心臟，用圓形無創(chuàng)縫合針于左心耳下前降支上1/3處穿3/0號線備用，假手術(shù)組只穿線不結(jié)扎，模型組和藥物組將結(jié)扎左冠狀動脈前降支，造成急性心肌缺血模型(以ST段明顯抬高作為冠狀動脈結(jié)扎成功標志)，造模成功后關(guān)閉胸腔，縫合刀口，預防感染。

注：a結(jié)扎前；b結(jié)扎后。

1.4 指標檢測方法 假手術(shù)組、模型組和藥物組(見圖1)分別在結(jié)扎前，結(jié)扎后0.5 h、1 h、2 h、4 h、6 h開腹進行腹主動脈采血，肝素抗凝。以3 000 r/min離心10 min后，取上清，-20 ℃保存待用。采用ELISA法測血清TNF-α和IL-6含量。

1.5 心功能測定 于結(jié)扎前和結(jié)扎后立即行無創(chuàng)心功能檢測，即彩色多普勒超聲心動圖。觀察心臟射血分數(shù)(EF)變化。

2 結(jié) 果

2.1 3組血清TNF-α水平比較 假手術(shù)組各時間點比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。與假手術(shù)組比較，模型組結(jié)扎后各時間點TNF-α表達均升高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。模型組各時間點比較，TNF-α含量于結(jié)扎后0.5 h開始升高，結(jié)扎后2 h達到高峰，結(jié)扎后4 h開始下降。與模型組比較，藥物組結(jié)扎后各時間點TNF-α表達均下降，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。詳見表1。

表1 3組血清TNF-α水平比較 pg/mL

2.2 3組血清IL-6表達比較 假手術(shù)組各時間點比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。與假手術(shù)組比較，模型組結(jié)扎后各時間點IL-6表達均升高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。模型組各時間點比較，IL-6含量于結(jié)扎后0.5 h開始升高，結(jié)扎后4 h達到高峰，結(jié)扎后6 h開始下降。與模型組比較，藥物組結(jié)扎后各時間點IL-6表達均下降，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。詳見表2。

表2 3組血清IL-6表達比較 pg/mL

2.3 3組結(jié)扎6 h后心臟射血分數(shù)比較 結(jié)扎前各組兔心臟射血分數(shù)比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。結(jié)扎6 h后，與假手術(shù)組比較，模型組心臟射血分數(shù)降低，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；與模型組比較，藥物組心臟射血分數(shù)升高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。詳見表3。

表3 3組結(jié)扎6 h后心臟射血分數(shù)比較±s) %

3 討 論

研究表明，缺血性心肌損傷是一個多環(huán)節(jié)級聯(lián)反應過程，主要涉及氧化應激、鈣離子超載、免疫炎癥反應和心肌細胞凋亡等，炎癥反應是急性心肌缺血損傷和心肌細胞凋亡的主要原因[10]。本研究證實，急性心肌缺血后血清TNF-α、IL-6含量增加，而桂枝湯可減少血清TNF-α、IL-6含量，減少炎癥反應發(fā)生，從而保護心肌。

TNF-α是一種單核因子主要由活性巨噬細胞產(chǎn)生，是炎癥、免疫反應的重要介質(zhì)。研究表明，TNF-α在動脈粥樣硬化發(fā)生、發(fā)展過程中起著重要作用。TNF-α可作用于血管壁引起血管壁損傷，促進血管內(nèi)皮細胞和血管平滑肌細胞增生[11]。IL-6是一種具有多種生物活性的細胞炎癥介質(zhì)，是炎癥急性期細胞因子基因表達的主要調(diào)節(jié)因子，主要由T淋巴細胞、單核細胞、內(nèi)皮細胞等產(chǎn)生。大量炎性細胞浸潤至缺血或壞死的心肌組織，使其產(chǎn)生抗原并刺激免疫系統(tǒng)，引起強烈免疫應答，致使T淋巴細胞、B淋巴細胞、單核巨噬細胞等激活，從而產(chǎn)生大量IL-6[12]，IL-6可刺激血管活性物質(zhì)釋放、促進血管內(nèi)皮細胞和平滑肌細胞增殖、激活凝血酶原，促使血小板釋放聚集，進而引起級聯(lián)性炎癥反應發(fā)生。本實驗結(jié)果顯示，與假手術(shù)組比較，模型組結(jié)扎后各時間點TNF-α、IL-6含量顯著升高(P<0.05)，說明TNF-α、IL-6參與心肌缺血發(fā)生、發(fā)展過程。桂枝湯出自漢代張仲景的《傷寒論》，被譽為“群方之冠”，由桂枝、白芍、炙甘草、生姜和大棗組成，具有解肌發(fā)表，調(diào)和營衛(wèi)的功能[13]。方中桂枝散寒解肌、溫通經(jīng)脈、助陽化氣為君藥；白芍斂陰合營、利血、益氣為臣藥；生姜散寒以消痞滿助桂枝解肌祛邪；大棗助芍藥合營里，并為佐藥；炙甘草補氣以助陽氣、益氣和中調(diào)和諸藥為使。諸藥配伍具有活血化瘀、益氣通脈作用。近年來臨床研究表明，桂枝湯在防治冠心病方面發(fā)揮重要作用。焦宏等[14]研究表明，桂枝湯可降低低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)，升高高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)，減少動脈粥樣硬化形成，對冠心病的防治起到一定作用。牛鶴麗等[15]證實，聯(lián)合使用桂枝湯治療冠心病穩(wěn)定型心絞痛比單純使用西藥療效顯著。本研究結(jié)果表明，急性心肌缺血時炎癥介質(zhì)TNF-α、IL-6表達增加，心臟射血分數(shù)減少，而桂枝湯預處理可降低急性心肌缺血時血清TNF-α、IL-6含量，提高心臟射血分數(shù)，改善心臟功能。

綜上所述，桂枝湯可能通過減少炎癥介質(zhì)TNF-α和IL-6釋放，降低炎癥反應發(fā)生，從而改善缺血心肌，起到保護心臟的作用，其詳細作用機制仍需進一步深入研究。

[1] Kim JY，Kawabori M，Yenari MA.Innate infammatory responses in stroke：mechanisns and potential therapeutic targets[J].Curr Med Chem，2014，21(18)：2076-2097.

[2] 譚代林，陳安平.急性缺血性腦卒中患者血清超敏C反應蛋白和炎性細胞因子水平變化及臨床意義[J].微循環(huán)學雜志，2010，20(2)：55-56.

[3] Famakin BM.The immune response to acute focal cerebral ischemia and associated post-stroke immunodepression：a focused review[J].Aging and Disease，2014，5(5)：307-326.

[4] Laren JE，Michael DR，Ashlin TG，etal.Cytokines，macrophage lipid metabolism and foam cells：implications for cardiovascular disease therapy[J].Prog Lipid Res，2011，50(4)：331-347.

[5] 焦宏，陳彥靜，金春亭，等.桂枝湯對高血脂心肌缺血大鼠脂代謝紊亂的調(diào)節(jié)作用[J].中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學雜志，2012，18(1)：55-57.

[6] 張雪寧，鞠鵬.IL-6和TNF-α水平與急性冠脈綜合征的關(guān)系及臨床意義[J].吉林醫(yī)學，2014，35(27)：5990-5991.

[7] 郝薔薇，麻春杰，邸彥清，等.經(jīng)方桂枝湯及其類方治療心腦血管疾病研究進展[J].世界中醫(yī)藥，2015，10(1)：131-134.

[8] 許源，宿樹蘭，王團結(jié)，等.桂枝的化學成分和藥理研究[J].中藥材，2013，36(4)：674-678.

[9] 許波華，許立.中藥抗心肌缺血作用機制的研究進展[J].中國實驗方劑學雜志，2011，17(15)：265-269.

[10] 王鋒劍，李保，王馨.Toll樣受體4和單核細胞趨化蛋白1與急性冠狀動脈綜合征的相關(guān)性研究[J].中國心血管雜志，2013，18(2)：89-92.

[11] Ridker PM，Rifai N，Pfeffer M，etal.Elevation of tumor necrosis factor-alph and increased risk of recurrent coronary events after myocardial infarction[J].Circulation，2000，101(18)：2149-2153.

[12] 邵杉，胡司淦，盧冬雨，等.TNF-α和IL-6水平與不同類型冠心病的相關(guān)性研究[J].中華全科醫(yī)學，2011，9(9)：1355-1356.

[13] 陳霽榮.《傷寒論》營衛(wèi)學說思想及其與桂枝湯相關(guān)性研究[D].北京：北京中醫(yī)藥大學，2005.

[14] 焦宏，陳彥靜，鞠大宏，等.桂枝湯對高脂血癥心肌缺血大鼠心肌缺血損傷的保護作用[J].中國中藥雜志，2011，17(3)：279-281.

[15] 牛鶴麗，劉東方.桂枝湯治療冠心病穩(wěn)定型心絞痛的療效觀察[J].中國衛(wèi)生產(chǎn)業(yè)，2012，9(21)：164.

(本文編輯薛妮)

The Influence of Guizhi Decoction Pretreatment on Serum TNF-α and IL-6 in Rabbit with Acute Myocardial Ischemia

Fan Xiaofei,Liu Guijing,Wang Yingying

Chengde Medical College,Chengde 067000,Hebei,China

Liu Guijing

Objective To investigate the protective effect of Guizhi decoction (GZD) pretreatment on serum tumor necrosis factor-α(TNF-α) and interleukin-6(IL-6) in rabbit with acute myocardial ischemia (AMI).Methods Tirty-six New Zealand white rabbits were randomLy divided into sham group， model group and drug group.Drug group was given GZD two weeks before ligation， the other two groups were given equal amount of distilled water.The rabbit model was established by ligaturing the left anterior descending coronary artery(drug group and model group)， control group only thread ligation.TNF-α and IL-6 expressions were detected by ELISA.Color Doppler Echocardiography was performed to measure ejection fraction(EF).Results Compared to sham group，The expression of TNF-α and IL-6 increased in the model group at different time points after myocardial ischemia(P<0.05)， reached their peak at the time point of ligation on 2th， 4th hour respectively.Compared to model group， the expression levels of TNF-α and IL-6 were decreased to varying degrees at each time point in drug group(P<0.05).Conclusion The serum levels of TNF-α and IL-6 increased after myocardial ischemia.The cardioprotective effect of GZD may be related to the decreasing of inflammation cytokines TNF-α and IL-6.

myocardial ischemia；Guizhi decoction；tumor necros factor-α；interleukin-6

河北省衛(wèi)生廳省級重大醫(yī)學科研項目(No.zd2013094)

承德醫(yī)學院(河北承德 067000)

劉貴京，E-mail：13333006956@163.com

R542.2 R285.5

A

10.3969/j.issn.1672-1349.2016.23.011

1672-1349(2016)23-2754-04

2016-05-10)

引用信息：范曉飛，劉貴京，王穎穎.桂枝湯預處理對急性心肌缺血兔血清TNF-α、IL-6含量的影響[J].中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2016，14(23)：2754-2757.