張利杰，劉霞，馮蕊，楊艷麗

（云南農(nóng)業(yè)大學云南省植物病理重點實驗室，云南昆明650201）

云南省部分馬鈴薯產(chǎn)區(qū)晚疫病菌抗藥性測定

張利杰，劉霞，馮蕊，楊艷麗*

（云南農(nóng)業(yè)大學云南省植物病理重點實驗室，云南昆明650201）

由致病疫霉菌（Phytophthora infestans）引起的馬鈴薯晚疫病是嚴重危害馬鈴薯生長和產(chǎn)量的主要病害之一。在馬鈴薯晚疫病的化學防治過程中，幾乎所有馬鈴薯主產(chǎn)區(qū)都有馬鈴薯晚疫病菌抗藥性的報道。對云南省馬鈴薯主產(chǎn)區(qū)晚疫病菌抗藥性進行檢測，明確云南省馬鈴薯產(chǎn)區(qū)晚疫病菌的抗藥性情況。通過抑菌試驗檢測馬鈴薯晚疫病菌對甲霜靈、銀法利和大生M-45的抗性，測定來自云南省5個馬鈴薯產(chǎn)區(qū)的53個菌株。結(jié)果表明，中甸、麗江、劍川、石林和小哨未發(fā)現(xiàn)對甲霜靈、銀法利和大生M-45的抗性馬鈴薯晚疫病菌，上述藥劑仍可以有效防治馬鈴薯晚疫病。

馬鈴薯；晚疫病菌；抗藥性

馬鈴薯是世界第四大糧食作物，僅次于水稻、小麥和玉米。中國是一個馬鈴薯生產(chǎn)大國，其產(chǎn)量和種植面積均居世界第一位[1]。馬鈴薯晚疫病由致病疫霉菌[Phytophthora infestans（Mont.）de Bary]引起，造成的危害性、防治難度及對社會影響已超過了水稻稻瘟病和小麥銹病，被視為國際第一大作物病害[2]，中國馬鈴薯因感染晚疫病造成的經(jīng)濟損失約80億元人民幣[3]。馬鈴薯晚疫病已經(jīng)成為限制中國馬鈴薯生產(chǎn)和實現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化的第一大障礙。

目前，生產(chǎn)上防治馬鈴薯晚疫病主要是應用化學防治[4-6]，主要有甲霜靈、銀法利和大生M-45等。但隨著治療性殺菌劑的廣泛使用，且其對病原菌的作用位點比較單一，病菌容易產(chǎn)生抗藥性[7,8]，且抗藥性逐漸增強，導致治療效果降低，甚至完全失效，因此需要更換防治馬鈴薯晚疫病的藥劑。許多國家和地區(qū)相繼報道了馬鈴薯晚疫病菌對甲霜靈、銀法利、大生M-45產(chǎn)生了抗藥性。在中國的河北、福建、重慶和云南等地也有類似報道[9-15]。為此，本試驗通過測定云南省馬鈴薯部分主產(chǎn)區(qū)的晚疫病菌對甲霜靈、銀法利和大生M-45的抗藥性，為馬鈴薯晚疫病化學防治提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

供試馬鈴薯晚疫病菌菌株共計53個，分別為2010年采集自中甸的10個菌株（ZD），2011年采集自劍川的16個菌株（JC）、麗江的2個菌株（LJ）、石林的6個菌株（SL）、小哨的19個菌株（XS）。

抗藥性標準菌株（PE84006）和敏感性標準菌株（Pox-67）由黑龍江省農(nóng)業(yè)科學院生物技術研究所提供。

1.2 供試藥劑

68%甲霜靈（瑞士先正達股份有限公司）、銀法利（德國拜耳作物科學公司）、大生M-45（美國羅門斯公司）。

供試培養(yǎng)基：黑麥-番茄汁培養(yǎng)基。

1.3 試驗方法

1.3.1 黑麥-番茄汁培養(yǎng)基的制備

黑麥粒浸泡12 h后，煮沸10～15 min，冷卻后，紗布過濾并棄去殘渣，將濾液與150 mL番茄汁混合，加入17 g瓊脂條，加水至1 000 mL，并混入1.2 g CaCO3，混勻后用NaOH調(diào)pH至6.5～7.0，將制備好的培養(yǎng)基裝于三角瓶中，高溫高壓滅菌30 min，倒平板培養(yǎng)基，冷卻后待用。

1.3.2 藥劑培養(yǎng)基的制備

將68%甲霜靈按使用濃度配制藥液質(zhì)量濃度為0.058 g/L。將配制好的甲霜靈供試藥按濃度和黑麥-番茄汁培養(yǎng)基混合，最終配成0.058 g/L的藥劑培養(yǎng)基。

將銀法利按使用濃度配制藥液質(zhì)量濃度為0.77 g/L。將配制好的銀法利供試藥按濃度和黑麥-番茄汁培養(yǎng)基混合，最終配成0.77 g/L的藥劑培養(yǎng)基。

將大生M-45按使用濃度配制藥液質(zhì)量濃度為1.70 g/L。將配制好的大生M-45供試藥按濃度和黑麥-番茄汁培養(yǎng)基混合，最終配成1.70 g/L的藥劑培養(yǎng)基。

1.3.3 馬鈴薯晚疫病菌的培養(yǎng)

將采集自中甸、麗江、劍川、石林、小哨的菌株，分離純化后共得到的53個菌株，抗藥性標準菌株（PE84006）和敏感性標準菌株（Pox-67），轉(zhuǎn)到固體培養(yǎng)基中，置于恒溫培養(yǎng)箱中17℃黑暗條件下培養(yǎng)10 d。

1.3.4 馬鈴薯晚疫病菌的接種

在無菌條件下，將預培養(yǎng)10 d的馬鈴薯晚疫病菌用1.2 cm的打孔器沿菌落邊緣打取菌餅，然后把菌餅接種到含有0.058 g/L甲霜靈、0.77 g/L銀法利、1.70 g/L大生M-45的藥劑培養(yǎng)基上和加入滅菌蒸餾水的培養(yǎng)基上，菌面向下置于不同藥劑培養(yǎng)基和加入滅菌蒸餾水的培養(yǎng)基的中心，每皿一塊，每個處理重復3次。將接種后的培養(yǎng)基平板放入17℃恒溫培養(yǎng)箱中，黑暗培養(yǎng)10 d左右。

1.3.5 馬鈴薯晚疫病菌的菌落直徑測量

將接種培養(yǎng)10 d的培養(yǎng)基平板在無菌條件下，采用生長速率法測定，用十字交叉法測量菌落生長直徑。

2 結(jié)果與分析

2.1 馬鈴薯晚疫病菌在含不同殺菌劑培養(yǎng)基中生長狀況

供試的53個菌株在含甲霜靈的培養(yǎng)基中均不生長，而在不加入藥劑的對照培養(yǎng)基中正常生長（圖1）。供試的53個菌株在含銀法利的培養(yǎng)基中均不生長，而在不加入藥劑的對照培養(yǎng)基中正常生長（圖2）。供試的53個菌株在含大生M-45的培養(yǎng)基中均不生長，而在不加入藥劑的對照培養(yǎng)基中正常生長（圖3）。

2.2 馬鈴薯晚疫病菌對不同農(nóng)藥的抗性

圖1 馬鈴薯晚疫病菌對甲霜靈的抗性測定Figure1 Determination ofP.infestansresistance to Metalaxyl

圖2 馬鈴薯晚疫病菌對銀法利的抗性測定Figure2 Determination ofP.infestansresistance to Fluopicolide

圖3 馬鈴薯晚疫病菌對大生M-45的抗性測定Figure3 Determination ofP.infestansresistance to Ditane M-45

測定53個菌株對甲霜靈、銀法利和大生M-45的抗性，并與抗藥性標準菌株（PE84006）和敏感性標準菌株（Pox-67）進行對比。結(jié)果表明，被測53個菌株對3個藥劑均表現(xiàn)敏感，未發(fā)現(xiàn)抗性菌株。其中，采自中甸的10個菌株（ZD）在空白培養(yǎng)基中的菌落直徑在6.63～8.43 cm，平均值為7.66 cm；劍川的16個菌株（JC）在空白培養(yǎng)基中的菌落直徑在3.13～5.80 cm，平均值為4.70 cm；麗江的2個菌株（LJ）在空白培養(yǎng)基中的菌落直徑在8.23 cm和8.47 cm，平均值為8.35 cm；石林的6個菌株（SL）在空白培養(yǎng)基中的菌落直徑在7.00～8.50 cm，平均值為7.96 cm；小哨的19個菌株（XS）在空白培養(yǎng)基中的菌落直徑在5.70～8.23 cm，平均值為7.10 cm；而53個菌株在含甲霜靈、銀法利和大生M-45的培養(yǎng)基中菌落直徑均為1.20 cm。PE84006在空白培養(yǎng)基的平均菌落直徑為4.47 cm，在含甲霜靈、銀法利和大生M-45的培養(yǎng)基中平均菌落直徑分別為3.50，3.60和3.30 cm；Pox-67在空白培養(yǎng)基中的菌落直徑為4.40 cm，在含甲霜靈、銀法利和大生M-45的培養(yǎng)基中平均菌落直徑均為1.20 cm（圖4）。

圖4 采自云南省5個地區(qū)的53個馬鈴薯晚疫病菌株在含甲霜靈、銀法利和大生M-45培養(yǎng)基上的菌落直徑Figure4 Colony diameter of 53 isolates ofP.infestanscollected from five areas in Yunnan Province in medium containing Metalaxyl,Fluopicolide and Ditane M-45

3 討論

該研究表明2010～2011年采集自中甸（ZD）、劍川（JC）、麗江（LJ）、石林（SL）和小哨（XS）的53個馬鈴薯晚疫病菌株對甲霜靈、銀法利、大生M-45均表現(xiàn)為敏感，這與楊志輝等[16]測定的1998～2003年采自河北、云南、四川和黑龍江馬鈴薯晚疫病菌對甲霜靈的敏感性是一致的，而與曹繼芬等[17]測定的2003～2005年采自云南的馬鈴薯晚疫病菌對甲霜靈的產(chǎn)生抗性有差異，其測定了11個地區(qū)共167個馬鈴薯晚疫病菌，甲霜靈高抗、中抗、敏感菌株分別為20.4%、7.2%和72.4%，其中采自香格里拉、麗江的菌株抗性與本試驗一致。本試驗測定的采自云南省5個地區(qū)的馬鈴薯晚疫病菌均未發(fā)現(xiàn)抗藥性菌株。這可能與病菌采集時間、采集地點有關，具體原因有待進一步研究。

中國馬鈴薯晚疫病防治方面藥劑使用歷史較長，且長期大量連續(xù)使用會產(chǎn)生抗性，但本研究對采自云南省5個馬鈴薯產(chǎn)區(qū)的晚疫病菌的抗藥性進行測定，檢測的53個菌株均不能在含有藥劑使用濃度范圍的藥劑培養(yǎng)基上生長，對3種藥劑都表示敏感，沒有產(chǎn)生抗性，其頻率為100%。因此，甲霜靈、銀法利、大生M-45仍可以繼續(xù)使用。但為了不使云南省馬鈴薯晚疫病菌產(chǎn)生抗性，還是應當交換使用一些其他藥劑，避免抗藥性的產(chǎn)生。

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辰翔礦業(yè)有限公司

專業(yè)生產(chǎn)馬鈴薯育種-膨脹蛭石

河北靈壽縣辰翔礦業(yè)有限公司位于河北省石家莊市靈壽縣，是一家專業(yè)生產(chǎn)蛭石片、膨脹蛭石、珍珠巖的企業(yè)，已有30多年的發(fā)展歷史。辰翔公司根據(jù)馬鈴薯育種特點，研發(fā)了育種專用膨脹蛭石。本公司生產(chǎn)的馬鈴薯專用膨脹蛭石性價比高，已在國內(nèi)十幾家馬鈴薯育種公司應用，并得到一致好評。本公司蛭石產(chǎn)品型號齊全，也可根據(jù)客戶需求訂制生產(chǎn)。

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Determination of Fungicide Resistance of Phytophthora infestans Collected from a Part of Potato Producing Areas in Yunnan Province

ZHANG Lijie,LIU Xia,FENG Rui,YANG Yanli*
(Key Laboratory for Plant Pathology of Yunnan Province,Yunnan Agricultural University,Kunming,Yunnan 650201,China)

Potato late blight,caused byP.infestans,is one of the main diseases which is seriously harmful to potato growth and production.Chemical is an effective means to control potato late blight,and there are reports aboutP.infestansresistant to fungicides in almost all of the main potato production areas.The purpose of this study was to detectP.infestans, which might have resistance to fungicides,in major production areas of Yunnan Province.The antibacterial test was used to test the resistance ofP.infestansto Metalaxyl,Fluopicolide and Ditane M-45.Fifty-three isolates collected from the five production areas of Zhongdian,Lijiang,Jianchuan,Shilin and Xiaoshao were tested and no isolates were found resistant to Metalaxyl, Fluopicolide and Ditane M-45.These data suggest that the fungicides tested are still effective to control potato late blight in Yunnan Province.

potato;Phytophthora infestans;fungicide resistance

S532

B

1672－3635（2016）06-0362-05

2015-03-23

云南省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)馬鈴薯產(chǎn)業(yè)技術體系建設項目（2016KJTX003）；云南省科技計劃項目（2013ZA006）。

張利杰（1989-），男，碩士，從事馬鈴薯病害研究。

楊艷麗，教授，主要從事真菌與馬鈴薯病害研究，E-mail:843151872@qq.com。