文│匡德春（遼寧省調(diào)兵山市畜產(chǎn)品安全檢測(cè)站）

瘦肉精酶聯(lián)免疫試劑盒的質(zhì)量評(píng)價(jià)與使用

文│匡德春（遼寧省調(diào)兵山市畜產(chǎn)品安全檢測(cè)站）

目前，動(dòng)物源性食品中瘦肉精的確證檢測(cè)主要有液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法和氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法，由于儀器及耗材昂貴，樣品提取凈化復(fù)雜，對(duì)檢測(cè)人員的素質(zhì)要求較高等原因，確證檢測(cè)法無(wú)法在縣區(qū)級(jí)畜產(chǎn)品檢測(cè)機(jī)構(gòu)的日常監(jiān)管和大規(guī)模篩查工作中使用。而酶聯(lián)免疫試劑盒可以經(jīng)濟(jì)、快速地實(shí)現(xiàn)瘦肉精的篩查工作，在基層單位得以大量使用。

瘦肉精檢測(cè)中酶聯(lián)免疫試劑盒的質(zhì)量評(píng)價(jià)方法和使用注意事項(xiàng)在實(shí)際工作中尤為重要，本文就此進(jìn)行簡(jiǎn)述，供廣大瘦肉精檢測(cè)工作者參考與借鑒。

一、質(zhì)量評(píng)價(jià)方法

評(píng)價(jià)瘦肉精酶聯(lián)免疫試劑盒質(zhì)量的關(guān)鍵指標(biāo)有標(biāo)準(zhǔn)曲線、檢出限和定量限、準(zhǔn)確度和精密度、假陽(yáng)性率和假陰性率、交叉反應(yīng)。

1.標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)準(zhǔn)曲線主要確定工作濃度范圍和IC50范圍。評(píng)價(jià)定量酶聯(lián)免疫試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)，按照試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度（一般不少于5個(gè)）進(jìn)行測(cè)試，每個(gè)濃度點(diǎn)測(cè)量5次，然后擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線，并得出50%抑制濃度（IC50）值。IC50是衡量抗體及試劑盒靈敏度的指標(biāo)，IC50越低說(shuō)明抗體和試劑盒的靈敏度越高，測(cè)定的IC50應(yīng)低于或等于試劑盒給出的值。

2.檢出限和定量限。評(píng)價(jià)酶聯(lián)免疫試劑盒的檢出限時(shí)，應(yīng)測(cè)定20份空白樣品的均值，均值加上3倍標(biāo)準(zhǔn)差所得的結(jié)果應(yīng)低于試劑盒給出的檢出限。

評(píng)價(jià)酶聯(lián)免疫試劑盒的定量限時(shí)，按照說(shuō)明書提供的定量限濃度配制6份樣品進(jìn)行測(cè)定驗(yàn)證，定量限的準(zhǔn)確度應(yīng)滿足試劑盒的要求。

3.精密度和準(zhǔn)確度。評(píng)價(jià)瘦肉精酶聯(lián)免疫試劑盒時(shí)，應(yīng)隨機(jī)選擇3個(gè)批次的試劑盒，在3個(gè)日期進(jìn)行測(cè)試評(píng)價(jià)。評(píng)價(jià)時(shí)應(yīng)分別配制定量限、2倍定量限、5被定量限3個(gè)濃度的樣品，每個(gè)濃度配制5個(gè)平行樣，按試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行測(cè)試，計(jì)算精密度和準(zhǔn)確度，所得結(jié)果應(yīng)符合試劑盒說(shuō)明書的要求。

4.假陽(yáng)性率和假陰性率。對(duì)于定性的酶聯(lián)免疫試劑盒應(yīng)評(píng)價(jià)其假陽(yáng)性率和假陰性率。配制添加檢出限濃度的50份樣品進(jìn)行測(cè)試，確定假陰性率。制備50份空白樣品進(jìn)行測(cè)試，確定假陽(yáng)性率。一般來(lái)說(shuō)假陽(yáng)性率可以控制在5%范圍內(nèi)，不得有假陰性存在。

5.交叉反應(yīng)。根據(jù)酶聯(lián)免疫試劑盒提供的信息，測(cè)定試劑盒與待測(cè)物、待測(cè)物類似物、待測(cè)物代謝物等物質(zhì)的交叉反應(yīng)率，應(yīng)滿足試劑盒提供的要求。

二、使用注意事項(xiàng)

影響瘦肉精酶聯(lián)免疫試劑盒檢測(cè)結(jié)果的因素一般有試劑盒選擇、檢測(cè)人員能力、設(shè)備狀態(tài)、環(huán)境影響等。

1.試劑盒選擇。選擇試劑盒時(shí)，應(yīng)考慮擬選試劑盒的檢測(cè)藥物類型是否滿足監(jiān)督篩查的需求，樣品前處理方法是否經(jīng)濟(jì)、快速、便于現(xiàn)場(chǎng)操作，是否需要增加新的儀器設(shè)備，試劑盒的檢出限是否滿足監(jiān)督篩查計(jì)劃的要求。

2.檢測(cè)人員能力。檢測(cè)人員能力是影響瘦肉精酶聯(lián)免疫試劑盒檢測(cè)結(jié)果的主要因素，具體體現(xiàn)在：試劑配制的準(zhǔn)確性和規(guī)范性，不得使用自來(lái)水配制試劑；樣品提取、點(diǎn)樣、洗板、孵育、顯色等操作的熟練程度；酶標(biāo)儀操作的熟練程度；移液器使用的規(guī)范程度等。

3.設(shè)備狀態(tài)。酶標(biāo)儀、移液器等涉及量值溯源的設(shè)備應(yīng)定期檢定/校準(zhǔn)，加貼狀態(tài)標(biāo)識(shí)。需要現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)時(shí)，酶標(biāo)儀等設(shè)備搬運(yùn)后使用前應(yīng)進(jìn)行核查，確保其滿足檢測(cè)的需要。

4.環(huán)境影響。環(huán)境是影響瘦肉精酶聯(lián)免疫試劑盒質(zhì)量及檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性的關(guān)鍵因素之一。

（1）試劑盒應(yīng)按要求貯存，一般貯存溫度為2～8℃。

（2）標(biāo)準(zhǔn)溶液、顯色液對(duì)光敏感，實(shí)際操作中應(yīng)避免直接暴露在光線下。

（3）使用前所有試劑應(yīng)平衡至室溫，使用后應(yīng)迅速將其放回2～8℃。

（4）孵育、顯色時(shí)應(yīng)恒溫、避光。

5.其他注意事項(xiàng)。不用手或其他物品接觸酶標(biāo)板底部；終止液具有腐蝕性，避免接觸皮膚。

三、小結(jié)

盡管酶聯(lián)免疫試劑盒法檢測(cè)瘦肉精簡(jiǎn)便快捷，但影響檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性的因素較多。除需規(guī)范的評(píng)價(jià)試劑盒本身質(zhì)量外，在實(shí)際操作中應(yīng)嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書規(guī)范操作，同時(shí)做好質(zhì)控工作，減少或避免影響因素的干擾，確保檢測(cè)數(shù)據(jù)和結(jié)果的準(zhǔn)確性，為畜產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)管提供精準(zhǔn)的數(shù)據(jù)支持。