杜鍇

實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測乙肝病毒DNA的價(jià)值分析與研究

杜鍇

目的探討選擇實(shí)時(shí)熒光定量PCR法對乙肝病毒DNA實(shí)施檢測的臨床價(jià)值。方法250例乙型肝炎患者作為此次實(shí)驗(yàn)對象,臨床選擇血清學(xué)標(biāo)志物的方法實(shí)施疾病檢測后最終有效確診。對所有乙型肝炎患者臨床均選擇實(shí)時(shí)熒光定量PCR法實(shí)施疾病檢測,對最終檢測結(jié)果進(jìn)行分析。結(jié)果乙型肝炎患者分別選擇熒光PCR法以及血清學(xué)標(biāo)志物方法實(shí)施疾病檢測,最終獲得的檢測結(jié)果基本表現(xiàn)一致。臨床選擇實(shí)時(shí)熒光定量PCR法完成疾病檢測后,最終獲得的病毒DNA數(shù)據(jù)更為準(zhǔn)確。實(shí)時(shí)熒光定量PCR法對大三陽臨床最終檢測陽性率達(dá)到了96%；對小三陽,臨床最終檢測陽性率達(dá)到了69%；而對HbsAg(-)、乙型肝炎表面抗體(HbsAb)(-)以及HbeAb(-)以及乙型肝炎E抗原(HbeAg)(-)最終檢測陽性率只為2.21%。對于大三陽患者以及小三陽患者的血清PCR檢測結(jié)果進(jìn)行觀察發(fā)現(xiàn),均表現(xiàn)出較高的拷貝數(shù)。結(jié)論乙型肝炎患者臨床選擇實(shí)時(shí)熒光定量PCR法實(shí)施疾病檢測,針對乙肝病毒以及相關(guān)數(shù)據(jù)完成檢測后可以獲得準(zhǔn)確結(jié)果,從而證明對乙型肝炎患者在實(shí)施疾病檢測的過程中,選擇實(shí)時(shí)熒光定量PCR法以及乙肝病毒DNA方法均可以獲得較為理想的效果,臨床均可以廣泛普及應(yīng)用。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR法；乙肝病毒；臨床價(jià)值

乙型肝為被歸屬為感染性疾病的一種,主要因?yàn)榛颊叱霈F(xiàn)了乙肝病毒感染的情況后,對患者的肝臟出現(xiàn)炎性病變的情況,最終表現(xiàn)出的一種綜合性疾病。此種疾病傳播較為廣泛,對患者會(huì)造成極為嚴(yán)重的危害,較易表現(xiàn)出持續(xù)性帶病毒狀態(tài)的情況,最終出現(xiàn)慢性感染的現(xiàn)象［1］。少數(shù)患者會(huì)表現(xiàn)出原發(fā)性肝細(xì)胞癌以及出現(xiàn)肝硬化的情況。以往臨床在對乙型肝炎病毒攜帶者進(jìn)行疾病檢測的過程中,主要選擇血清學(xué)標(biāo)志法實(shí)施疾病檢測,其主要通過對患者的血液實(shí)施檢測,最終有效完成檢測［2］。但是在實(shí)施血清學(xué)檢測的過程中,如果操作方式出現(xiàn)了失誤,最終較易導(dǎo)致工作人員出現(xiàn)感染的情況。為確保乙型肝炎患者的乙肝病毒DNA可以獲得準(zhǔn)確檢測結(jié)果,本次研究主要將本院收治的乙型肝炎患者作為主要對象,臨床分別選擇實(shí)時(shí)熒光定量PCR法以及血清學(xué)標(biāo)志物方法展開乙肝病毒DNA檢測,具體如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇本院2014年3月～2016年5月收治的乙型肝炎患者250例作為此次實(shí)驗(yàn)對象；患者年齡16～53歲,平均年齡(36.39±5.71)歲。

1.2 方法 所有乙型肝炎患者臨床分別實(shí)施實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測以及血清學(xué)標(biāo)志法針對乙肝病毒DNA數(shù)據(jù)實(shí)施檢測。之后針對兩種方法的檢測結(jié)果進(jìn)行對比。主要選擇廣州達(dá)安PCR熒光分析儀對所有乙型肝炎患者的乙肝病毒DNA數(shù)據(jù)展開實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測。臨床需要做好一次性真空采血管的準(zhǔn)備工作,清晨抽取患者5 ml靜脈血,對血清實(shí)施離心分離,于-20℃的環(huán)境中進(jìn)行凍存?zhèn)溆?；之后對所有乙型肝炎患者?shí)施集中檢測。臨床主要選擇分辨熒光免疫分析技術(shù)完成乙肝標(biāo)志物檢測；臨床選擇實(shí)時(shí)熒光定量PCR法完成乙肝病毒DNA(HBV-DNA)檢測［3］。

1.3 療效判斷標(biāo)準(zhǔn)［4］顯效：臨床選擇實(shí)時(shí)熒光定量PCR法對乙肝病毒完成檢測的數(shù)據(jù),同血清學(xué)標(biāo)志法檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行對比,檢測結(jié)果較為一致,并且選擇實(shí)時(shí)熒光定量PCR法完成檢測后,能夠獲得更為準(zhǔn)確的乙肝病毒檢測數(shù)據(jù),大三陽者［乙型肝炎表面抗原(HbsAg)(+)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)(+)及乙型肝炎核心抗體(HbcAb)(+)］以及小三陽者［HbsAg(+)、HbcAb(+)及乙型肝炎肝炎E抗體(HbeAb)(+)］表現(xiàn)出更高的拷貝數(shù)；效果不明顯：臨床選擇實(shí)時(shí)熒光定量PCR法對乙肝病毒完成檢測的數(shù)據(jù),同血清學(xué)標(biāo)志法檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行對比,表現(xiàn)出少許的差別,并且實(shí)時(shí)熒光定量PCR法完成檢測后,在最終獲得的準(zhǔn)確度以及其他方面無突出表現(xiàn)。無效：臨床選擇實(shí)時(shí)熒光定量PCR法對乙肝病毒完成檢測的數(shù)據(jù),同血清學(xué)標(biāo)志法檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行對比,表現(xiàn)出的差別較大,并且選擇實(shí)時(shí)熒光定量PCR法完成檢測后的數(shù)據(jù)更為準(zhǔn)確。

2 結(jié)果

選擇熒光PCR方法對乙型肝炎患者的病毒DNA數(shù)據(jù)實(shí)施檢測,同選擇普通方法血清學(xué)標(biāo)志法實(shí)施檢測的乙型肝炎病毒DNA數(shù)據(jù)結(jié)果進(jìn)行比較,較為一致,但是選擇實(shí)時(shí)熒光定量PCR法獲得的檢測結(jié)果準(zhǔn)確性更高。對大三陽臨床最終檢測陽性率達(dá)到了96%；對小三陽,臨床最終檢測陽性率達(dá)到了69%；而對HbsAg(-)、乙型肝炎表面抗體(HbsAb)(-)以及HbeAb(-)以及乙型肝炎E抗原(HbeAg)(-)最終檢測陽性率只為2.21%。從而證明在實(shí)施乙肝病毒DNA檢測的過程中,實(shí)時(shí)熒光定量PCR法的應(yīng)用可以獲得更為顯著的效果。

3 討論

乙型肝炎屬于消化內(nèi)科較為普遍的一種疾病。其主要于患者的肝臟位置出現(xiàn),此種疾病的出現(xiàn)對人們會(huì)造成嚴(yán)重的影響。作為一種嚴(yán)重的傳染病,在眾多傳播途徑中血液傳播屬于較為常見的一種,對此需要禁止同患者的血液進(jìn)行接觸；此外還能夠通過母嬰傳播,所有乙型肝炎患者禁止生育,避免新生兒為乙肝病毒攜帶者。此外皮膚黏膜破損傳播以及性傳播均會(huì)導(dǎo)致乙型肝炎患者出現(xiàn)乙肝傳染的情況。依據(jù)疾病病程的長短,主要將乙肝疾病分為急性乙型肝炎疾病以及慢性乙型肝炎疾病。于字面意思進(jìn)行解釋發(fā)現(xiàn),同慢性乙型肝炎進(jìn)行比較,急性乙型肝炎對患者造成的影響更為嚴(yán)重,甚至?xí)颊叩纳踩a(chǎn)生較為嚴(yán)重的影響。依據(jù)患者疾病的嚴(yán)重程度,主要分為乙肝攜帶者、活動(dòng)性乙型肝炎患者、重型肝炎患者以及肝炎肝硬化患者［5-9］。

當(dāng)前在對血清HBV-DNA實(shí)施檢測的過程中,選擇實(shí)時(shí)熒光定量PCR法實(shí)施檢測可以獲得顯著效果,表現(xiàn)出較優(yōu)的檢測重復(fù)性,其針對抗病毒藥物療效在實(shí)施觀察過程中的相關(guān)問題可以加以有效解決。此種方法臨床應(yīng)用檢測原理為：對于PCR反應(yīng)體系,除了包括普通PCR需要的引物、還包括熒光染料以及熒光基團(tuán),對于此類熒光物質(zhì)存在特定波長,可以有效作為臨床檢測過程中的熒光探針［10-15］。對于儀器能夠有效自動(dòng)檢出,通過將熒光信號(hào)進(jìn)行積累,針對PCR進(jìn)程可以做到實(shí)時(shí)監(jiān)測。在PCR循環(huán)過程中對測量的信號(hào)可以作為實(shí)驗(yàn)熒光閾值的坐標(biāo)。選擇實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測的方法,即使患者表現(xiàn)出微量HBV-DNA的情況,則也可以獲得準(zhǔn)確的檢測結(jié)果［16］。

綜上所述,對于乙型肝炎患者的乙肝病毒DNA選擇實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法實(shí)施檢測,同選擇血清學(xué)標(biāo)志法檢測結(jié)果進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn),可以獲得更為顯著的測定結(jié)果,并且獲得的綜合內(nèi)容更為全面,進(jìn)而為乙型肝炎疾病患者臨床治療方案的研究提供可靠依據(jù),從而證明對乙型肝炎患者臨床選擇實(shí)時(shí)熒光定量PCR法完成乙肝病毒DNA檢測,最終可以為檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性做出有效保證。

［1］肖曉光,王晶,林琳,等.應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光PCR方法檢測乙肝病毒1896位點(diǎn)變異及臨床意義.中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),2014,9(11):1829-1832.

［2］惠小夏,王東霞.實(shí)時(shí)熒光PCR檢測乙型肝炎患者HBV-DNA的臨床意義.臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2012,11(18):1483,1485.

［3］張滿娥,張洪彬,明燕,等.實(shí)時(shí)熒光定量PCR和ELISA在乙型肝炎病毒檢測中的應(yīng)用.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2012,9(2):190-191.

［4］葉儒軍,魏威.乙肝病毒DNA與乙肝病毒標(biāo)志物的相關(guān)性研究.國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2012,33(23):2932-2933.

［5］張衛(wèi)云,任廣立,伍令燦,等.乙肝患者HBsAg定量與乙肝病毒DNA定量及谷丙轉(zhuǎn)氨酶水平的相關(guān)性研究.生物技術(shù)通訊,2015,26(6):846-848.

［6］俞安清,陳效琴,蘇麗萍,等.實(shí)時(shí)熒光PCR檢測乙肝病毒DNA的臨床意義.中國臨床實(shí)用醫(yī)學(xué),2010,4(1):88-89.

［7］賴新華,呂娜,彭艷輝.實(shí)時(shí)熒光定量PCR對乙肝DNA檢測的影響因素.中外醫(yī)學(xué)研究,2014(5):127-128.

［8］陳海雁,張桂花,羅錦彬,等.熒光定量 PCR 法檢測乙肝病毒DNA 和乙肝病毒標(biāo)志物檢測的臨床價(jià)值分析.國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2014,18(16):2216-2217.

［9］周玉林,鄭金川,吳旭耀.熒光定量PCR法檢測乙肝病毒DNA與乙肝病毒標(biāo)志物相關(guān)性.中國農(nóng)村衛(wèi)生事業(yè)管理,2013,33(10):1191-1192.

［10］汪圣強(qiáng),耿合員,殷鵬飛,等.實(shí)時(shí)熒光PCR在乙肝病毒DNA檢測中的臨床意義.中國醫(yī)學(xué)工程,2015(3):29-30.

［11］杜清標(biāo).實(shí)時(shí)熒光PCR檢測乙肝病毒DNA的臨床意義探析.醫(yī)學(xué)信息,2015(45):73-74.

［12］王春翠,何素梅.實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測HBV-DNA臨床指導(dǎo)意義的研究.臨床醫(yī)藥文獻(xiàn)電子雜志,2014,1(9):1489-1490.

［13］王金梅.探討實(shí)時(shí)熒光PCR法檢測乙肝病毒DNA在臨床中的應(yīng)用.中國醫(yī)藥指南,2013,19(25):173.

［14］馬星.熒光定量PCR檢測乙型肝炎病毒DNA的研究.臨床合理用藥雜志,2014(32):39-40.

［15］柴舟.熒光定量PCR檢測220例乙肝病毒DNA結(jié)果分析.湖北科技學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2007,21(1):63-64.

［16］蔡曉嬋,湯建新,彭明,等.ELISA法和DNA熒光定量PCR法檢測乙肝病毒的結(jié)果分析.醫(yī)學(xué)信息旬刊,2011,24(4):277.

Analysis and research of value by real-time fluorescence quantification PCR method in detection of hepatitis B virus DNA

DU Kai.Department of Nuclear Medicine,Henan Nanyang City First People’s Hospital,Nanyang 473000,China

ObjectiveTo investigate clinical value by real-time fluorescence quantification PCR method in detection of hepatitis B virus DNA.MethodsThere were 250 patients with hepatitis B as study subjects.All patients received real-time fluorescence quantification PCR method for disease detection,and their final detection outcomes were analyzed.ResultsThe hepatitis B patients received real-time fluorescence quantification PCR method and serologic markers for disease detection,with basically the same outcomes.Clinical implement of real-time fluorescence quantification PCR method showed more accurate data on virus DNA.Realtime fluorescence quantification PCR method had final positive detection rate of big three positive as 96% and 69% of small three positive,while its final positive detection rate was 2.21% of HbsAg(-),hepatitis B surface antibody(HbsAb)(-),HbeAb(-) and hepatitis B e antigen(HbeAg)(-).Serum PCR detection in patients with big three positive and small three positive all showed high copy number.ConclusionClinical selection of real-time fluorescence quantification PCR method for disease detection in hepatitis B patients can provide accurate outcome after complete detection of hepatitis B virus and related data.Therefore,implement of real-time fluorescence quantification PCR method and hepatitis B virus DNA for disease detection in hepatitis B patients can both show ideal effect,and they are worth widely clinical promotion and application.

Real-time fluorescence quantification PCR method; Hepatitis B virus; Clinical value

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2017.01.022

2016-12-06］

473000 河南省南陽市第一人民醫(yī)院核醫(yī)學(xué)科