嚴(yán)廣友

【摘要】丙型肝炎首次檢測(cè)方法丙肝病毒-HCV檢測(cè)法于1989年正式被提出，丙型肝炎病毒（HCV）醫(yī)學(xué)檢測(cè)研究和實(shí)踐越來(lái)越深入。該研究為了解丙肝病毒檢驗(yàn)技術(shù)發(fā)展與研究現(xiàn)狀，對(duì)近年來(lái)的相關(guān)研究報(bào)道進(jìn)行了綜述，此類(lèi)病毒的檢驗(yàn)手段主要涵蓋了HCV抗原檢測(cè)技術(shù)、HCV-RNA核算擴(kuò)增檢測(cè)技術(shù)、抗-HCV檢測(cè)以及HCV核心抗原和抗-HCV檢測(cè)等類(lèi)。了解不同HCV檢驗(yàn)技術(shù)研究和應(yīng)用現(xiàn)狀、進(jìn)展，是加快HCV檢驗(yàn)技術(shù)研究改良以及更好地運(yùn)用HCV檢驗(yàn)技術(shù)、改善HCV臨床診療水平與效益的關(guān)鍵所在。

【關(guān)鍵詞】抗原檢測(cè)；核心抗原；核酸檢測(cè)技術(shù)（NAT）

丙型肝炎是丙型肝炎病毒（HCV）感染所致的典型全球性傳染性疾病，HCV傳播途徑較多，并且有許多綜合途徑或隱性途徑。由于目前臨床上尚未研制出專(zhuān)門(mén)有效的丙型肝炎疫苗，因而需找靈敏的HCV檢驗(yàn)途徑、積極預(yù)防并及早發(fā)現(xiàn)HCV感染是避免丙型肝炎發(fā)病、影響人類(lèi)健康的最佳方式。該研究為尋求有效可靠的HCV檢驗(yàn)方式，對(duì)近年來(lái)研究較多的HCV抗原檢測(cè)技術(shù)、HCV-RNA核算擴(kuò)增檢測(cè)技術(shù)、抗-HCV檢測(cè)以及HCV核心抗原和抗-HCV檢測(cè)手段應(yīng)用現(xiàn)狀及研究進(jìn)展進(jìn)行了綜述。

1抗-HCV檢驗(yàn)技術(shù)

抗-HCV檢測(cè)技術(shù)是最早出現(xiàn)、研究和應(yīng)用時(shí)間最久的HCV檢測(cè)技術(shù)，此種方式是歷經(jīng)十幾年不斷嘗試、改良得到的有效檢測(cè)方式，并進(jìn)一步演變出ELISA、雙抗原加薪、充足免疫印跡法（RIBA）、蛋白芯片檢測(cè)法、間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)f間接ELISA）、免疫層析法等多種實(shí)用可靠的方式。提及的這些各類(lèi)檢測(cè)手段中，重組免疫印跡法（RIBA）尤以極高的靈敏度得到一致認(rèn)可，并且已經(jīng)成為抗體檢測(cè)的最佳標(biāo)準(zhǔn)：蛋白芯片的正確使用可靈敏得出準(zhǔn)確的抗-HCV分型；ELISA則因其簡(jiǎn)單的操作、成本較低的設(shè)備材料和較滿(mǎn)意的檢測(cè)結(jié)果而成為目前應(yīng)用最廣、最實(shí)用的抗-HCV檢測(cè)技術(shù)。

2 HCV-RNA核酸擴(kuò)增檢測(cè)技術(shù)（NAT）

有一項(xiàng)HCV復(fù)制活躍相對(duì)準(zhǔn)確的指標(biāo)，即為外周血中檢出HCVRNA，HCV感染發(fā)生的14 d內(nèi)即可檢測(cè)發(fā)現(xiàn)HCVRNA，而感染恢復(fù)之前的血清改物質(zhì)水平再次達(dá)到新高峰。當(dāng)前，NAT檢測(cè)技術(shù)已經(jīng)成為部分臨床工作者使用的HCV感染確認(rèn)途徑使用。HCV RNA水平會(huì)隨飲食情況發(fā)生變化，當(dāng)攝入食物蛋白、脂肪含量高時(shí)，其更易因結(jié)合脂蛋白、脂質(zhì)而導(dǎo)致檢出水平遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于日常水平，這也是導(dǎo)致檢查不準(zhǔn)確的一種常見(jiàn)原因一。此外，NAT檢測(cè)技術(shù)操作過(guò)程需要高標(biāo)準(zhǔn)的設(shè)備予以支持、經(jīng)驗(yàn)豐富的操作人員予以配合，而且檢查結(jié)果可能因?yàn)闄z查過(guò)程意外污染而呈現(xiàn)假陽(yáng)性而影響檢查結(jié)果準(zhǔn)確度，因而此種檢驗(yàn)方式在實(shí)際臨床工作中或?qū)嶒?yàn)室研究中都難以真正大范圍推廣應(yīng)用，普及難度較高。NAT檢驗(yàn)技術(shù)的不同廠商研發(fā)出的方法和相關(guān)設(shè)備不盡相同，PCR測(cè)定方式相對(duì)適用于更多的條件及患者，使用效果最被認(rèn)可，目前尤以套式PCR技術(shù)最佳，目前應(yīng)用較多、效果最滿(mǎn)意的當(dāng)屬熒光定量PCR技術(shù)，此種技術(shù)檢測(cè)HCV感染時(shí)，有較高靈敏度，而且有自動(dòng)定量檢測(cè)手段更方便使用，近年來(lái)關(guān)于NAT技術(shù)應(yīng)用的最新研究先后發(fā)現(xiàn)了基因芯片技術(shù)、環(huán)介導(dǎo)等溫基因擴(kuò)增技術(shù)（LAMP），前者操作簡(jiǎn)單、對(duì)儀器設(shè)備和材料要求不高，應(yīng)用前景廣闊。

3 HCV抗原檢測(cè)技術(shù)

隨著HCV抗原檢測(cè)技術(shù)的不斷更新和相關(guān)研究的不斷深入，有學(xué)者提出抗原抗體復(fù)合物解離劑、單克隆抗體的加緊研究和應(yīng)用是改良HCV抗原檢測(cè)現(xiàn)有技術(shù)的關(guān)鍵所在。近些年，西方一些研究嘗試推出定量、定性法相關(guān)的雙抗體夾心法對(duì)血清標(biāo)本中游離HCV或總HCV核心抗原ELISA試劑盒。上述新型檢驗(yàn)技術(shù)相比RT-PCR技術(shù)進(jìn)一步簡(jiǎn)化了操作、增強(qiáng)了環(huán)境適應(yīng)性、縮短了檢驗(yàn)所需時(shí)間，假陽(yáng)性率也進(jìn)一步得到控制，可以說(shuō)，此種新的檢驗(yàn)技術(shù)很大程度上克服了原有技術(shù)的短板，尤其適用于HCV血清學(xué)轉(zhuǎn)換前期的抗-HCV陽(yáng)性感染病毒血癥分析、急性丙型肝炎診斷工作和HCV感染者就醫(yī)過(guò)程中病毒血癥跟蹤觀察等工作。另外，HCV核心區(qū)基因變異與HCV核心抗原檢測(cè)結(jié)果有直接而復(fù)雜的聯(lián)系，抗原檢測(cè)敏感度并非一成不變。因而，對(duì)當(dāng)前推廣的試劑盒進(jìn)行改良，就需要著重提升單克隆抗體的天然抗原構(gòu)象表位親和力。

4同時(shí)檢測(cè)抗-HCV與HCV核心抗原技術(shù)

抗原抗體聯(lián)合檢驗(yàn)技術(shù)是臨床專(zhuān)家經(jīng)過(guò)反復(fù)實(shí)踐分析，探索出的血清學(xué)、HCV篩查試劑盒聯(lián)合檢測(cè)新技術(shù)，當(dāng)前相對(duì)成熟的成果是HCV核心抗原和外周蛋白抗體及部分核心抗體相結(jié)合的檢測(cè)試劑盒。HCV核心抗原是HCV感染者體內(nèi)出現(xiàn)的早期感染指標(biāo)，幾乎與HCVRNA同時(shí)出現(xiàn)，這體現(xiàn)了核心抗原和HCV RNA的動(dòng)力學(xué)變化密切相關(guān)。

HCV核心抗原側(cè)測(cè)定分析主要依靠血清樣品HCV核心抗原水平定量檢測(cè)或雙抗體夾心法定性檢測(cè)。此種檢驗(yàn)技術(shù)極少因樣品內(nèi)所含抗-HCV影響而出現(xiàn)精確度降低現(xiàn)象，結(jié)果相對(duì)可靠靈敏，此種技術(shù)可應(yīng)用于HCV早期急性丙型肝炎的臨床診斷。不久的將來(lái)，市場(chǎng)上將會(huì)出現(xiàn)越來(lái)越多的聯(lián)合檢測(cè)類(lèi)試劑盒，通過(guò)兩步檢測(cè)實(shí)現(xiàn)篩查、診斷和輔助治療工作，縮短檢驗(yàn)所需時(shí)間是日后亟需解決的難題。

5總結(jié)

綜上所述，HCV檢驗(yàn)技術(shù)主要有HCV抗原檢測(cè)技術(shù)、HCV-RNA核算擴(kuò)增檢測(cè)技術(shù)、抗-HCV檢測(cè)以及HCV核心抗原和抗-HCV檢測(cè)共4種類(lèi)型，各有優(yōu)劣，且都在不斷改良和發(fā)展中。日后，臨床上除了需要研究更多新的檢驗(yàn)技術(shù)，還需要解決檢驗(yàn)用時(shí)長(zhǎng)、靈敏度低、結(jié)果易受影響等問(wèn)題。