溫 蕾

(北京中醫(yī)藥大學(xué),北京,100029)

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從神經(jīng)肽類相關(guān)物質(zhì)中的實(shí)驗(yàn)研究探究臟腑相關(guān)的理論內(nèi)涵

溫 蕾

(北京中醫(yī)藥大學(xué),北京,100029)

目的:以中醫(yī)臟腑相關(guān)理論為指導(dǎo)思想,通過建立肺病動(dòng)物模型與腸病動(dòng)物的模型,分別選取2個(gè)不同時(shí)間點(diǎn)(8 d、16 d)觀察12類不同的組織中相關(guān)活性物質(zhì)SP、VIP、iNOS、CGRP的表達(dá)與關(guān)聯(lián),探求臟腑相關(guān)的病理實(shí)質(zhì)。方法:本實(shí)驗(yàn)采用2批健康雌性SD大鼠,每只大鼠體重在110～120 g之間,每批35只。隨機(jī)將每批的35只大鼠分為5組,均為正常組、限食組、限水組、高氧組和低氧組,測(cè)定肺、脾、肝、膀胱、腎臟、血清、胃、心臟、空腸、回腸、結(jié)腸、直腸中CGRP、iNOS、SP和VIP等物質(zhì)的含量的變化來觀察各個(gè)臟腑在神經(jīng)肽相關(guān)物質(zhì)的相關(guān)聯(lián)系。結(jié)果:在CGRP這個(gè)指標(biāo)有關(guān)聯(lián)的組織有:肺和心臟(8 d)、肺和空腸(16 d)、腎和膀胱(8 d)、脾與肝(16 d)、心與回腸(16 d);在iNOS這個(gè)指標(biāo)有關(guān)聯(lián)的組織有:肺與膀胱(16 d)、心與直腸(16 d);在SP這個(gè)指標(biāo)有關(guān)聯(lián)的組織有:肺與肝(8 d和16 d)、肺與回腸、結(jié)腸(8 d)、脾與胃(8 d)、心臟和回腸(8 d);在VIP這個(gè)指標(biāo)有關(guān)聯(lián)的組織有:肺和肝(8 d)、心臟和結(jié)腸(8 d和16 d)。結(jié)論:通過論證肺與大腸、肝臟、膀胱、心臟的關(guān)系,豐富了“肺與大腸相表里”的觀點(diǎn),對(duì)臨床治療有指導(dǎo)意義。此外,通過CGRP、SP、iNOS、VIP等指標(biāo)發(fā)現(xiàn)心臟與腸道之間也有密切聯(lián)系。

神經(jīng)肽類物質(zhì);臟腑相關(guān)

人體是一個(gè)由臟腑、經(jīng)絡(luò)和形體官竅共同組成的整體,各臟腑、經(jīng)絡(luò)和形體官竅在生理上是相互制約、依存和相互為用,臟腑間通過經(jīng)絡(luò)聯(lián)系、氣機(jī)升降和氣血互助保持聯(lián)系,使得各個(gè)臟腑構(gòu)成了一個(gè)和諧統(tǒng)一的整體,這也體現(xiàn)了中醫(yī)學(xué)的整體觀和辨證論治的特的特色,體現(xiàn)了中醫(yī)學(xué)的優(yōu)勢(shì)和特色[1-2]。在一些比較難治愈的疾病中,根據(jù)臟腑相關(guān)理論及臟腑傳變的規(guī)律制定不同的治療方案比單純治療病變的部位效果更佳顯著,而且更具有“治未病”的前瞻性。與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)相比,中醫(yī)運(yùn)用臟腑相關(guān)理論指導(dǎo)臨床治療疾病具有不可替代的優(yōu)勢(shì)。

本實(shí)驗(yàn)選取了肺、脾、肝、膀胱、腎臟、血清、胃、心臟、空腸、回腸、結(jié)腸、直腸12類臟器包括了大部分人體的五臟六腑,而且包含了消化系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)和循環(huán)系統(tǒng)等幾大人體系統(tǒng),分析這些臟器之間的關(guān)系,從更全面更深層次的角度進(jìn)行研究分析。針對(duì)于研究比較深入且應(yīng)用于臨床較多的“肺與大腸相表里”理論,本課題為了探究肺與大腸關(guān)系的特殊性,故在本次實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)里將分析肺與各個(gè)臟器的關(guān)系以便詮釋為什么只是肺與大腸相表里而不是肺與別的臟器相表里。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康雌性SD大鼠,體重在110～120 g之間,共45只,由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供,動(dòng)物許可證編號(hào):SCXK(京)2012～0001。

1.2 設(shè)備試劑 主設(shè)計(jì)的代謝籠式可變氧飼養(yǎng)箱,由凌云博際(北京)科技有限公司代為加工生產(chǎn));測(cè)氧儀(北京精微恒氧技術(shù)開發(fā)中心);實(shí)驗(yàn)用瓶裝氧氣與氮?dú)鈿怏w由北京朝紅平氣體有限公司提供;LIBROREB-280型電子天平(日本Shimadzu公司);低溫高速離心機(jī)(美國(guó)BECKMAN公司);ELISA試劑盒(酶聯(lián)免疫試劑盒,北京瑞格博科技發(fā)展有限公司提供);10%水合氯醛,0.90%生理鹽水,明膠海綿等。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 造模前準(zhǔn)備 所有大鼠均統(tǒng)一飼養(yǎng),自由飲水和進(jìn)食,飼養(yǎng)7 d后熟悉實(shí)驗(yàn)室環(huán)境后開始造模。

1.3.2 造模方法 隨機(jī)將2批健康雌性SD大鼠按體重分為若干區(qū)組,然后再分別將2批中每個(gè)體重范圍的大鼠隨機(jī)分為5組。分別為限食組、限水組、高氧組、低氧組、正常組,每組7只。1)正常組大鼠不做任何處理,正常飲水和進(jìn)食,放置在代謝籠中單籠飼養(yǎng)。7 d后取材。2)高氧組大鼠的制作：隨機(jī)抓取9只雌性SD大鼠放置在自主設(shè)計(jì)的可變氧飼養(yǎng)箱中飼養(yǎng),飼養(yǎng)箱的兩側(cè)各留一個(gè)進(jìn)氣孔和一個(gè)排氣孔,用數(shù)字式測(cè)氧儀檢測(cè)箱內(nèi)氧濃度,以10 L/min輸入氧氣,當(dāng)氧氣濃度達(dá)到40%后,持續(xù)輸入氮?dú)?～2 L/min使氧濃度維持在(40%±3%)。給予8 h/d高氧刺激。大鼠不限食水,溫度24～26 ℃,濕度40%～60%。8 d后第1批取材,16 d后第2批取材。3)低氧組大鼠的制作：隨機(jī)抓取9只雌性SD大鼠大鼠放置在自主設(shè)計(jì)的可變氧飼養(yǎng)箱中飼養(yǎng),飼養(yǎng)箱的兩側(cè)各留一個(gè)進(jìn)氣孔和一個(gè)排氣孔,用數(shù)字式測(cè)氧儀檢測(cè)箱內(nèi)氧濃度,以10 L/min輸入氧氣,當(dāng)氧氣濃度達(dá)到10%后,持續(xù)輸入氮?dú)?～2 L/min,使氧濃度維持在(10%±1%)。給予8 h/d低氧刺激。大鼠不限食水。溫度24～26 ℃,濕度40%～60%。8 d后第1批取材,16 d后第2批取材。4)限食組大鼠的制作：隨機(jī)抓取9只雌性SD大鼠放置在代謝籠中單籠飼養(yǎng),連續(xù)7 d測(cè)量其各自正常的進(jìn)食量,之后按照每日平均進(jìn)食量的一半給予飼料,飲水量不限。溫度24～26 ℃,濕度40%～60%。8 d后第1批取材,16 d后第2批取材。5)限水組大鼠的制作：隨機(jī)抓取9只雌性SD大鼠放置在代謝籠中單籠飼養(yǎng),連續(xù)7 d測(cè)量其各自正常的飲水量,之后按照每日平均飲水量的一半給予飲水,進(jìn)食量不變。溫度24～26 ℃,濕度40%～60%。8 d后第1批取材,16 d后第2批取材。

1.3.3 動(dòng)物取材 大鼠經(jīng)過16 d后2次造模取材:整個(gè)大鼠取材均在無菌紗布上進(jìn)行,醫(yī)用剪子鑷子均經(jīng)過蒸汽高溫消毒,腹腔麻醉大鼠,每100 g體重注射3 mL麻藥(10%水合氯醛),鼠尾疼痛反射消失后,將大鼠仰臥位固定于鼠板上,打開腹部,腹主動(dòng)脈取血后,迅速剪取鼠板上,打開腹部,腹主動(dòng)脈取血后,迅速打開胸部剪取肺、脾、肝、膀胱、腎臟、血清、胃、心臟、空腸、回腸、結(jié)腸、直腸組織,生理鹽水洗滌后,置于液氮罐中,后放置到經(jīng)過生理鹽水洗滌后,置于液氮罐中后放置-40 ℃冰箱保存。CGRP、iNOS、SP和VIP等物質(zhì)均用ELISA試劑盒(酶聯(lián)免疫試劑盒)進(jìn)行檢測(cè)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用直線相關(guān)分析,計(jì)算相關(guān)系數(shù)r,研究不同部位指標(biāo)的相關(guān)性。以P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 肺與其他組織之間的CGRP相關(guān)性分析表

2 結(jié)果

2.1 CGRP指標(biāo)相關(guān)性分析 結(jié)果證明了在CGRP這個(gè)指標(biāo)上,肺和心臟在8 d相關(guān)、肺和空腸在16 d相關(guān)。見表1。腎和膀胱在8 d相關(guān)、脾與肝在16 d相關(guān)、心與回腸在16 d相關(guān)。見表2。

表2 其他組織之間的CGRP相關(guān)性分析表

2.2 iNOS指標(biāo)相關(guān)性分析 結(jié)果證明在iNOS這個(gè)指標(biāo)上肺與膀胱在16 d相關(guān)。見表3。心與直腸在16 d相關(guān)。見表4。

2.3 SP指標(biāo)相關(guān)性分析 結(jié)果表明在SP這個(gè)指標(biāo)上肺與肝在8 d和16 d都有關(guān)、肺與回腸、結(jié)腸在8 d都有關(guān)。見表5。脾與胃在8 d相關(guān)、心臟和回腸在8 d相關(guān)。見表6。

表3 肺與其他組織之間的iNOS相關(guān)性分析表

表4 其他組織之間的iNOS相關(guān)性分析表

2.4 VIP指標(biāo)相關(guān)性分析 結(jié)果表明在VIP這個(gè)指標(biāo)上肺和肝在8 d相關(guān)。見表7。心臟和結(jié)腸在8 d和16 d相關(guān)。見表8。

表5 肺與其他組織之間的SP相關(guān)性分析表

表6 其他組織之間的SP相關(guān)性分析表

表7 肺與其他組織之間的VIP相關(guān)性分析表

表8 其他組織之間的VIP相關(guān)性分析表

3 討論

臟腑間的關(guān)系有臟與臟之間的關(guān)系、六腑之間的關(guān)系和五臟六腑之間的關(guān)系;臟腑之間的傳病有臟與臟之間的傳變、臟與腑之間的傳病以及腑與腑之間的[3]。臟與臟之間的傳變包含了母子傳變和乘侮傳變:母子傳變又叫做“間臟傳”,包括“母病及子”和“子病及母”,如腎屬水,肝屬木,水能生木,腎為母臟,肝為子臟。腎病及肝,就是“母病及子”。臨床上的“水不涵木”,因?yàn)槟I水不足不能涵養(yǎng)肝木,從而引起肝陽上亢的癥狀[4]。肝屬木,心屬火,木能生火,所以肝為母臟,心為子臟,心病及肝即是“子病及母”。臨床上的肝血虛和肝火旺之證皆由心血虛或是心火旺而導(dǎo)致肝也出現(xiàn)相應(yīng)的癥狀。乘侮傳病又叫做“不間臟”傳變,包括“相乘”與“相侮”,如肝木太旺克伐脾土太過或是脾土太弱不能耐受肝木相乘,出現(xiàn)“木旺乘土”或是“土虛木乘”2種情況即為“相乘”;肺金克制肝木,如肝火亢盛肺金無力制約,反遭肝火反克稱為“木火刑金”[5]。臟與腑之間的關(guān)系包括:肺和大腸、心和小腸、脾和胃、腎與膀胱、肝和膽互為表里。腑與腑的傳變是指六腑(膽、胃、大腸、小腸、三焦和膀胱)它們都共同參與了飲食物的消化代謝和津液代謝過程,如果其中的一腑發(fā)生病變,肯定會(huì)影響別的腑出現(xiàn)功能失常,例如大腸如果傳導(dǎo)功能失調(diào),腑氣不通將會(huì)引起胃氣上逆[6]。

本實(shí)驗(yàn)選取了神經(jīng)肽物質(zhì)作為相關(guān)指標(biāo),是因?yàn)樯窠?jīng)肽是存在于神經(jīng)組織而且參與神經(jīng)系統(tǒng)功能的內(nèi)源性活性物質(zhì),是一類特殊的信息物質(zhì)。特點(diǎn)為含量低、活性高、作用廣泛復(fù)雜,調(diào)節(jié)體內(nèi)的多種生理功能。研究發(fā)現(xiàn)腸道神經(jīng)肽超過50多種,其中胃腸神經(jīng)肽研究比較多的有血管活性腸肽(VIP)、降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)、P物質(zhì)(SP)、胃泌素釋放肽(GRP)和蛙皮素(BBS)等物質(zhì),研究證明SP、VIP參與炎性反應(yīng)的釋放過程,并且神經(jīng)肽能影響上皮細(xì)胞的增殖、細(xì)胞因子的分泌以及營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收,而對(duì)胃腸道作用影響明顯的神經(jīng)肽物質(zhì)為VIP、SP、CGRP?，F(xiàn)代研究表明,除腎上腺素能和膽堿能神經(jīng)系統(tǒng)之外,另外還有非腎上腺素能、非膽堿能神經(jīng)系統(tǒng)(Non-adrenergic,Non-cholinergic,NANC),在人體的呼吸系統(tǒng)中起著關(guān)鍵作用。NANC神經(jīng)包括非腎上腺素能抑制性神經(jīng)和非膽堿能興奮性神經(jīng)[7]。e-NANC神經(jīng)釋放的SP、CGRP等神經(jīng)肽物質(zhì)主要通過使氣道平滑肌收縮以及促使炎性反應(yīng)遞質(zhì)釋放等作用參與呼吸系統(tǒng)的病理生理過程。

一氧化氮合成酶(Inducible Nitric Oxide Synthase,iNOS)可使機(jī)體產(chǎn)生大量NO,對(duì)組織細(xì)胞具有損傷作用,參與許多疾病的發(fā)病過程。iNOS生成的NO可使組織受損和氣道發(fā)生炎性反應(yīng)[8];iNOS廣泛分布于胃腸道黏膜、黏膜下層、肌層等。在NO的合成過程中,NOS是唯一的酶,NO在平滑肌舒張過程中起著重要作用,可以保護(hù)胃腸道黏膜并調(diào)節(jié)胃腸道和胰腺等臟器的分泌功能,說明了iNOS這類神經(jīng)肽物質(zhì)在呼吸系統(tǒng)和消化系統(tǒng)中都起著重要的作用[9]。

通過相關(guān)分析法分析不同組織的相關(guān)性得出:在CGRP這個(gè)指標(biāo)有關(guān)聯(lián)的組織有:肺和心臟(8 d)、肺和空腸(16 d)、腎和膀胱(8 d)、脾與肝(16 d)、心與回腸(16 d)。心和肺的關(guān)系主要是心主血和肺主氣、心主行血和肺主呼吸的關(guān)系。所以肺心之間的關(guān)系主要是氣血互相為用的關(guān)系。肺主宣發(fā)肅降和朝百脈可以使心行血,而只有心主血脈的功能正常,血液循環(huán)正常,才能維持肺的正常呼吸功能。因肝屬木,脾屬土,木能克土;肝木旺盛,則克脾土,肝脾兩臟在生理和病理上緊密相連。肝失疏泄,則脾胃升降失常,形成肝脾不調(diào),肝胃不和等[10]。葉天士曰:“補(bǔ)脾必以疏肝,疏肝即以補(bǔ)脾?！薄督饏T要略》指出:“見肝之病,知肝傳脾,當(dāng)先實(shí)脾”,故肝病“實(shí)脾”謂之上工之舉,指導(dǎo)后世醫(yī)家的肝病治療[11]。

《黃帝內(nèi)經(jīng)》有云“腎開竅于二陰”,是指腎與膀胱相表里:腎是作強(qiáng)之官,腎精充盈則體健身強(qiáng);膀胱是州都之官,有貯存水液和排小便的功能,本實(shí)驗(yàn)論證了該理論;而本實(shí)驗(yàn)為了驗(yàn)證“心與小腸相表里”中的“小腸”相當(dāng)于西醫(yī)中哪個(gè)腸段,特意將心臟和空腸、回腸、結(jié)腸、直腸分別作了比較,得出心與回腸有關(guān)聯(lián),而肺與空腸有關(guān)聯(lián)。

在iNOS這個(gè)指標(biāo)有關(guān)聯(lián)的組織有:肺與膀胱(16 d)、心與直腸(16 d);“肺與膀胱相通”出自明代李梴《醫(yī)學(xué)入門·臟腑總論》,書中引《臟腑疏鑿論》“肺與膀胱相通,肺病宜清利膀胱水,后用分清利濁,膀胱病宜清肺氣為主,兼用吐法?！焙沃俑拊凇杜K腑通》提到:“太陽與肺合表,分明水氣連天,相傳下達(dá)州都官,儼若江河淮漢?！闭f明了肺與膀胱相通的關(guān)系。太陽主一身之表,膀胱為足太陽之腑,為水臟。加之肺主衛(wèi)氣也主表皮,通過肺的宣發(fā)肅降功能將水液下輸至膀胱達(dá)到“水精四布,五經(jīng)并行”的目的。肺與膀胱通是臟腑間氣化相通的一種形式,和肺與大腸的表里相合的關(guān)系還是有所不同的,在臨床上“肺病治膀胱”或者“膀胱病治肺”對(duì)臨床具有重要的指導(dǎo)意義[12]。目前針對(duì)心與直腸的研究并不多,有待更進(jìn)一步的研究。

在SP這個(gè)指標(biāo)有關(guān)聯(lián)的組織有:肺與肝(8 d和16 d)、肺與回腸、結(jié)腸(8 d)、脾與胃(8 d)、心臟和回腸(8 d);肺與回腸、結(jié)腸有關(guān)聯(lián)這個(gè)結(jié)論與劉聲博士《在論文中提到的關(guān)于“肺”與“大腸”相表里中的“大腸”應(yīng)定位于“回腸、結(jié)腸”的結(jié)論是一致的。關(guān)于心臟和回腸相關(guān)的理論研究和實(shí)驗(yàn)研究均比較少,有待進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)。

在肺的水液代謝過程中,除了依賴肺、脾、腎三臟的綜合作用,還依賴于肝的疏泄。肝主疏泄,主氣機(jī)調(diào)暢,氣行則津行,促進(jìn)津液輸布環(huán)流。如果肝氣郁滯,血行不暢,血液瘀滯,可導(dǎo)致津液輸布障礙,飲邪聚集,聚而為痰,或溢于肌膚,成為水腫。趙獻(xiàn)可《醫(yī)貫·喘論》提到:“七情內(nèi),郁而生痰”[13]。而《類證治裁·郁證》亦云:“七情內(nèi)起之郁,始則傷氣,繼降及血”[14]。氣機(jī)郁滯可造成痰滯和血瘀,使肺氣升降出入的功能受阻造成哮喘?！督饏T要略·水氣病》對(duì)氣滯血瘀導(dǎo)致津液輸布失常引起水腫也有論述,“肝水者,其腹大,不能自轉(zhuǎn)側(cè),脅下腹痛,時(shí)時(shí)津液微生,小便續(xù)通”,強(qiáng)調(diào)了氣、血、水在生理上的聯(lián)系,氣行則血行津散;在病理上也相互影響,氣滯則血結(jié)水停。脾與胃通過經(jīng)脈相互絡(luò)屬而形成表里關(guān)系,他們之間的表里關(guān)系是“脾為胃行其津液”[15]。本實(shí)驗(yàn)也證實(shí)了這個(gè)觀點(diǎn)。在VIP這個(gè)指標(biāo)有關(guān)聯(lián)的組織有:肺和肝(8 d)、心臟和結(jié)腸(8 d和16 d)。肺臟在SP指標(biāo)中是和回腸、結(jié)腸有關(guān)聯(lián),在CGRP這個(gè)指標(biāo)上是和空腸有關(guān)聯(lián),在iNOS指標(biāo)上是和膀胱有關(guān)聯(lián)的。

本實(shí)驗(yàn)不但論證了肺與大腸的關(guān)系,而且論證了肺與肝臟以及肺與膀胱、肺與心臟的關(guān)系,豐富了“肺與大腸相表里”這個(gè)觀點(diǎn),在以后的臨床治療上有著指導(dǎo)意義。在CGRP和SP這2個(gè)指標(biāo)中,都得出了心與回腸有關(guān)聯(lián)的結(jié)論,而iNOS指標(biāo)下發(fā)現(xiàn)心與直腸有關(guān)、VIP指標(biāo)下發(fā)現(xiàn)心與結(jié)腸有關(guān)聯(lián),由此可見心臟與腸道之間的聯(lián)系還是很密切的,這也是今后研究的一個(gè)方向。

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(2015-05-24收稿 責(zé)任編輯：王明)

An Experimental Study of “Interconnection of Zang-fu Viscera” Theory: Based on Neuropeptide Correlative Substances

Wen Lei

(BeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing100029，China)

Objective:To explore the pathology of “interconnection of zang-fu viscera” theory with the guide of it, building pulmonary disease animal models and intestinal disease ones and observing the expression and correlation of SP, VIP, iNOS and CGRP in 12 different types of tissue at 12 various chosen time (8 d, 16 d).Methods:Two suites of healthy female SD rats were adopted, 35 rates per suite, and the body weight of each rat is between 110 to 120 g. Every suite was randomized into 5 groups: normal group, food restriction group, water limiting group, high oxygen group and low oxygen group, and the content of CGRP, iNOS, SP and VIP in the lung, spleen, liver, bladder, kidney, serum, stomach, heart, jejunum, ileum, colon, rectum were tested.Results:The tissues related to CGRP were: the lung and the heart(8 d),the lung and the jejunum(16 d), the kidney and the the bladder (8 d), the spleen and the liver (16 d), the heart and the ileum (16 d); The tissues related to iNOS were: the lung and the bladder (16 d), the heart and the rectum (16 d); The tissues related to SP were: the lung and the liver (8 d and 16 d), the lung, the colon and the ileum(8 d), the spleen and the stomach (8 d), the heart and the ileum (8 d); The tissues related to VIP were: the lung and the liver (8 d), the heart and the colon (8 d and 16 d).Conclusion:By illustrating the relationship between the lung and the large intestine, liver, bladder and heart, the theory “the lung and the large intestine being interior-exteriorly related” were enriched, which had great guiding significance to clinical treatment. In addition, CGRP, SP, iNOS, VIP and other indicators showed a close relationship between the heart and the intestine.

“Interconnection of zang-fu viscera”； Neuropeptide correlative substances

溫蕾(1983.09—),女,碩士,研究方向:中醫(yī)基礎(chǔ)理論四時(shí)五臟陰陽,E-mail:nature960186@163.com

R223.1

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2016.11.050