王建國(guó)，史春云，王建飛，曹麗，鐘理

(1河北大學(xué)附屬醫(yī)院，河北保定071000；2保定市兒童醫(yī)院；3河北大學(xué)生命科學(xué)院)

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癌組織TTF-1、CK7及p63蛋白檢測(cè)對(duì)不同病理類型NSCLC的鑒別診斷價(jià)值

王建國(guó)1，史春云2，王建飛3，曹麗3，鐘理3

(1河北大學(xué)附屬醫(yī)院，河北保定071000；2保定市兒童醫(yī)院；3河北大學(xué)生命科學(xué)院)

目的 探討癌組織甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子1(TTF-1)、細(xì)胞角蛋白7(CK7)及p63蛋白檢測(cè)對(duì)不同病理類型非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)的鑒別診斷價(jià)值。方法 收集NSCLC組織標(biāo)本106例份,106例患者中鱗癌39例、腺癌56例、腺鱗細(xì)胞癌11例，采用免疫組化SP法檢測(cè)診斷TTF-1、CK7及p63蛋白在NSCLC組織中的表達(dá)，并分析其與臨床病理特征的關(guān)系。計(jì)算三者單獨(dú)或聯(lián)合檢測(cè)診斷NSCLC的敏感性、特異性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值。結(jié)果 TTF-1及CK7在肺癌細(xì)胞中定位于細(xì)胞核，呈棕黃色；p63定位于胞質(zhì)，呈棕黃色。TTF-1、CK7、p63蛋白表達(dá)均與患者病理類型、性別有關(guān)(χ2分別為53.972、57.691、52.051,7.832、6.171、8.715；P<0.01或<0.05)。TTF-1(+)、CK7(+)對(duì)肺腺癌診斷的敏感性為96.1%，特異性為79.5%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為87.1%，陰性預(yù)測(cè)值為93.9%，均較單獨(dú)檢測(cè)提高。p63(+)、 TTF-1(-)或p63(+)、CK7(-)對(duì)肺鱗癌診斷的敏感性和特異性均較單獨(dú)檢測(cè)高。結(jié)論 NSCLC組織中TTF-1、CK7和p63蛋白的表達(dá)均與肺癌病理類型密切相關(guān)，TTF-1和CK7主要表達(dá)于肺腺癌中，而p63則主要表達(dá)于肺鱗癌中，聯(lián)合檢測(cè)TTF-1、CK7及p63蛋白有助于提高肺腺癌和鱗癌診斷的準(zhǔn)確性。

非小細(xì)胞肺癌；甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子1；細(xì)胞角蛋白7；p63蛋白

肺癌早期缺乏有效的診療手段，超過(guò)70%的患者確診時(shí)已經(jīng)處于晚期[1，2]；另外，晚期肺癌特別是非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)對(duì)化療的敏感性差，故其病死率較高。目前診斷肺癌有很多手段，包括痰細(xì)胞學(xué)檢查、支氣管鏡檢查、經(jīng)胸腔的細(xì)針穿刺活檢、縱膈鏡檢查、開(kāi)胸活檢、其他細(xì)胞或病理檢查(胸腔積液、淋巴結(jié)等)、胸腔鏡檢查、腫瘤標(biāo)志物等[3]。肺癌的腫瘤標(biāo)志物很多，如癌胚抗原(CEA)、神經(jīng)烯醇酶(NSE)、鐵蛋白等，但缺乏特異性及敏感性。甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子1(TTF-1)、細(xì)胞角蛋白7(CK7)和抑癌基因p63蛋白作為新的免疫組化生物學(xué)標(biāo)志物，對(duì)肺癌均具有較高的敏感性及特異性。本文通過(guò)檢測(cè)TTF-1、CK7及p63蛋白在不同NSCLC中的表達(dá)情況，探討了它們與NSCLC病理特征的關(guān)系及其對(duì)不同病理類型肺癌患者的鑒別診斷價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集2013年7月～2015年6月河北大學(xué)附屬醫(yī)院手術(shù)切除或活檢的肺癌組織標(biāo)本106例份，均經(jīng)病理檢查確診為NSCLC。標(biāo)本均為肺部原發(fā)病例且在獲得標(biāo)本前均未經(jīng)過(guò)放化療。106例患者中男77例、女29例，年齡38～87歲、中位年齡60歲。根據(jù)2004年WHO制定的腫瘤分型標(biāo)準(zhǔn)及分期，病理分型中鱗癌39例，腺癌56例，腺鱗癌11例。其中高分化6例，中分化44例，低分化66例；Ⅰ期29例，Ⅱ期29例，Ⅲ期23例，Ⅳ期25例。

1.2 組織TTF-1、CK7、p63蛋白表達(dá)的檢測(cè) 采用免疫組化SP法。肺活檢或手術(shù)切除組織標(biāo)本，經(jīng)10%中性甲醛固定；常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)切5～6張4 μm切片，使用多聚賴氨酸作為防脫片劑，并將切片置于烤箱中2 h，使切片緊密黏附，取1張HE染色并核實(shí)組織病理學(xué)診斷，其他切片用于免疫組化染色。嚴(yán)格按照美國(guó)Leica公司免疫組化試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，抗體稀釋倍數(shù)1∶400，組織切片常規(guī)脫蠟、水化后，用PBS緩沖液連續(xù)沖洗2次，每次3 min；切片經(jīng)乙醇脫水干燥后用中性樹(shù)膠封片，置于40倍光鏡下觀察結(jié)果；用PBS緩沖液取代一抗作陰性對(duì)照。

陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)：TTF-1蛋白定位于細(xì)胞核，陽(yáng)性染色為棕黃色顆粒；p63定位于細(xì)胞核，陽(yáng)性染色為棕黃色或棕褐色顆粒；CK7定位于細(xì)胞質(zhì)，陽(yáng)性染色為黃色或棕黃色顆粒。由經(jīng)驗(yàn)豐富的病理科醫(yī)生對(duì)染色結(jié)果進(jìn)行判定。無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞或陽(yáng)性細(xì)胞所占百分?jǐn)?shù)<1%為陰性,≥1%為陽(yáng)性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件。TTF-1蛋白表達(dá)率與臨床病理資料的比較采用χ2檢驗(yàn)或Fisher′s確切概率法。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 癌組織TTF-1、CK7、p63蛋白表達(dá)與NSCLC患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系 TTF-1蛋白表達(dá)于細(xì)胞核，CK7蛋白表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)，陽(yáng)性染色均為棕黃色顆粒；p63蛋白表達(dá)于細(xì)胞核，為棕黃色或棕褐色。TTF-1、CK7、p63蛋白表達(dá)均與病理類型、性別有關(guān)(χ2分別為53.972、57.691、52.051, 7.832、6.171、8.715；P<0.01或<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 癌組織TTF-1、CK7、p63蛋白表達(dá)與NSCLC患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系[例(%) ]

2.2 TTF-1、CK7、p63蛋白在NSCLC鑒別診斷中的價(jià)值 TTF-1、CK7和p63蛋白單獨(dú)或聯(lián)合檢測(cè)在肺腺癌和鱗癌鑒別診斷中的價(jià)值見(jiàn)表2。

表2 TTF-1和CK7、p63蛋白在NSCLC診斷中的價(jià)值(%)

3 討論

TTF-1的表達(dá)多與腫瘤組織來(lái)源有關(guān)。有文獻(xiàn)[4]研究顯示肺癌中TTF-1在小細(xì)胞肺癌中陽(yáng)性表達(dá)率最高，為82.5%～95%，其余依次為腺癌、大細(xì)胞癌、鱗癌。本文中TTF-1在肺鱗癌中的表達(dá)率僅為20.5%，在肺腺癌中的表達(dá)率高達(dá)91.1%，與文獻(xiàn)報(bào)道一致。這些差異性可以用來(lái)鑒別肺鱗癌和肺腺癌。對(duì)肺腺癌診斷的敏感性為91.1%，特異性 為79.5%，陽(yáng)性和陰性預(yù)測(cè)值分別為86.4%和86.1%，與文獻(xiàn)[5]報(bào)道一致。另有文獻(xiàn)[6]報(bào)道，TTF-1蛋白在女性、不吸煙及無(wú)癥狀者肺癌患者中升高，主要表達(dá)于肺腺癌(191/227)，其診斷敏感性和特異性分別達(dá)84.1%和89.8%，陽(yáng)性表達(dá)率隨著腺癌分化程度的增加而增加。本研究發(fā)現(xiàn)，TTF-1在女性患者陽(yáng)性表達(dá)率為86.2%，高于男性57.1%。也有報(bào)道[7]認(rèn)為T(mén)TF-1的表達(dá)與患者的性別無(wú)關(guān)。TTF-1的表達(dá)在年齡、TNM分期及腫瘤分化程度方面均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，與報(bào)道[8，9]一致。有報(bào)道[10]認(rèn)為T(mén)TF-1表達(dá)與腫瘤分化程度有關(guān)，高分化腺癌組表達(dá)率高于低分化腺癌組。這些差別需要通過(guò)進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量，嚴(yán)格篩選臨床病例資料進(jìn)行驗(yàn)證。劉翼軍等[10]研究結(jié)果表明TTF-1在小細(xì)胞肺癌中表達(dá)率為90.5%，鱗癌中表達(dá)率為18.2%。認(rèn)為T(mén)TF-1在小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)高于低分化鱗癌；同時(shí)聯(lián)合p63蛋白的檢測(cè)(鱗癌表達(dá)高于小細(xì)胞肺癌)在區(qū)分小細(xì)胞肺癌和低分化鱗癌中具有重要的鑒別診斷意義。本研究結(jié)果只用于鑒別NSCLC中肺腺癌及肺鱗癌，而TTF-1在小細(xì)胞肺癌中表達(dá)率最高，亦可用于鑒別小細(xì)胞肺癌及低分化鱗癌。

CK多表達(dá)于上皮細(xì)胞質(zhì)中，構(gòu)成角質(zhì)細(xì)胞的骨架蛋白，主要維持上皮組織的連續(xù)性及完整性。CK7多表達(dá)于肺臟、乳腺、卵巢、子宮內(nèi)膜、胰腺等上皮細(xì)胞中，而其在胃腸道多不表達(dá)。有文獻(xiàn)報(bào)道，CK7在涎腺惡性多形性腺瘤(MPA)及傳統(tǒng)肺腺癌中表達(dá)率均較高，CK7在MPA中陽(yáng)性表達(dá)率為100%(15/15)，在傳統(tǒng)肺腺癌中表達(dá)率為96%(48/50)，而TTF-1在MPA中陰性表達(dá)率較高，因此，當(dāng)CK呈陽(yáng)性表達(dá)的同時(shí)，TTF-1呈陰性表達(dá)，可診斷為MPA。亦有研究表明，在不吸煙的女性肺癌組織中CK7陽(yáng)性表達(dá)率明顯增高。

p63并不是單純的抑癌基因，不表現(xiàn)為基因突變，在腫瘤中常表現(xiàn)為表達(dá)異常。有文獻(xiàn)報(bào)道,p63多在肺鱗癌中呈陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性表達(dá)率為97.0%，并具有較高的敏感性(97.0%)和特異性(74．8%)，診斷的準(zhǔn)確性為85.5%，本研究與其一致。

TTF-1、CK7和p63作為診斷、鑒別診斷腫瘤的標(biāo)志物，單獨(dú)檢測(cè)均不具備良好的敏感性及特異性。本研究結(jié)果顯示，TTF-1(+)、CK7(+)對(duì)肺腺癌診斷的敏感性為96.1%，特異性為79.5%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為87.1%，陰性預(yù)測(cè)值為93.9%，均較單獨(dú)檢測(cè)高。p63(+)、TTF-1(-)或p63(+)、CK7(-)對(duì)肺鱗癌診斷的敏感性和特異性均較單獨(dú)檢測(cè)高。兩種聯(lián)合表達(dá)可提高診斷的準(zhǔn)確性，可用于診斷及鑒別診斷肺腺癌及肺鱗癌。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)，在NSCLC中，TTF-1、CK7、p63蛋白的表達(dá)與腫瘤病理類型密切相關(guān)，TTF-1、CK7蛋白在肺腺癌中的表達(dá)高于肺鱗癌，p63蛋白在鱗癌中的表達(dá)高于肺腺癌，均對(duì)肺腺癌和鱗癌的鑒別診斷有一定價(jià)值。

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史春云(E-mail：Scyun2011@163.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.45.019

R734.2

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1002-266X(2016)45-0060-03

2016-07-19)