胡榮

（山西藥科職業(yè)學(xué)院，山西太原030031）

酒制山茱萸的炮制工藝研究

胡榮

（山西藥科職業(yè)學(xué)院，山西太原030031）

為了優(yōu)選酒制山茱萸的炮制工藝，采用單因素考察法，對(duì)炮制工藝中的加酒量、悶潤(rùn)時(shí)間、蒸制時(shí)間3個(gè)因素進(jìn)行優(yōu)選，以馬錢苷、熊果酸、齊墩果酸的含量為考察指標(biāo)，建立RP-HPLC-ELSD測(cè)定方法。結(jié)果表明，最佳炮制工藝為黃酒用量25%、悶潤(rùn)時(shí)間1 h、蒸制時(shí)間3 h。炮制工藝合理可行，經(jīng)方法學(xué)考察，RP-HPLC-ELSD法準(zhǔn)確、重復(fù)性好，適用于山茱萸飲片的質(zhì)量控制。

酒制；山茱萸；炮制工藝

中藥山茱萸是植物山茱萸（Comus officinalisSieb.et Zucc）的干燥成熟果肉。山茱萸中含有多種化學(xué)成分，研究表明，其主要有效成分為馬錢苷、熊果酸、齊墩果酸[1-6]。山茱萸是臨床常用藥物，常用炮制方法為酒制[7-12]。但酒制工藝的不同，會(huì)導(dǎo)致有效成分的含量差異較大，影響療效，因此，酒制山茱萸炮制工藝需要進(jìn)一步研究[13-18]。

本研究通過(guò)單因素試驗(yàn)研究山茱萸的酒制工藝，建立RP-HPLC-ELSD法，比較不同酒制工藝對(duì)山茱萸中馬錢苷、熊果酸、齊墩果酸含量的影響，以優(yōu)化飲片酒制工藝，旨在建立更佳山茱萸飲片的質(zhì)量控制方法。

1 材料和方法

1.1 材料及儀器試劑

山茱萸藥材購(gòu)自浙江臨安，經(jīng)山西藥科職業(yè)學(xué)院裴慧蓉教授鑒定為山茱萸科植物山茱萸ComusofficinalisSieb.et Zucc的成熟果肉。

Waters2420型蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（美國(guó)）；Waters1525型高效液相色譜儀（美國(guó)）；電子分析天平（Satorius BS124S，0.1 mg，德國(guó)；METTLER TOLEDO AB135-S，0.01 mg）；電熱恒溫水浴鍋（北京市長(zhǎng)風(fēng)儀器儀表公司）；微孔濾膜（希波式，0.45 μm）。

熊果酸、馬錢苷、齊墩果酸對(duì)照品（批號(hào)分別為110742－200313，111640－200503，110709－200304）購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所；水為純凈水；甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純，高純氮?dú)狻?/p>

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 含量測(cè)定

1.2.1.1 液相色譜條件和系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)色譜條件：色譜柱為L(zhǎng)ichrospher C18柱（德國(guó)），流動(dòng)相為甲醇-0.04%醋酸溶液（A）-水-0.04%醋酸溶液（B），梯度洗脫的程序?yàn)? min（38%A）→11 min（38%A）→11 min（90%A）→45 min（90%A）→46 min（38%A），流速1.0 mL/min，柱溫27℃。理論塔板數(shù)按馬錢苷峰計(jì)算，應(yīng)不低于3 000。

ELSD參數(shù)：漂移管溫度90℃；霧化氣體N2壓力172 375 p；光電倍增管電壓70 V。

1.2.1.2 對(duì)照品及供試品溶液的制備分別精密稱取熊果酸、馬錢苷（在真空干燥器中干燥24 h）和齊墩果酸對(duì)照品10.21，10.05，10.19 mg，用甲醇定容于10 mL容量瓶中，之后用甲醇稀釋100倍作為對(duì)照品溶液。

將干燥至恒質(zhì)量的山茱萸樣品粉碎成細(xì)粉過(guò)0.177 mm篩，精密稱取0.5 g左右，倒入50 mL具塞錐形瓶中，加入15 mL分析純甲醇，稱質(zhì)量，超聲提取30 min，取出，用分析純甲醇補(bǔ)足原質(zhì)量，搖勻，0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

1.2.1.3 線性關(guān)系考察取對(duì)照品溶液，依次進(jìn)樣5，10，15，20 μL，按1.2.1.1色譜條件測(cè)定熊果酸、馬錢苷、齊墩果酸峰面積。以進(jìn)樣量X為自變量，峰面積A為因變量，得線性方程。

1.2.1.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一份供試品溶液，一天之內(nèi)每隔3 h進(jìn)一針樣，連續(xù)進(jìn)5針，測(cè)定3種成分的峰面積，計(jì)算RSD。同一個(gè)樣品溶液4℃冷藏，每天進(jìn)樣10 μL，連續(xù)5 d測(cè)定3種成分的峰面積，計(jì)算RSD。

1.2.1.5 精密度試驗(yàn)精確吸取對(duì)照品溶液A 3，7，12 μL和一份樣品溶液10 μL，分別進(jìn)樣3次，測(cè)定熊果酸、馬錢苷、齊墩果酸的峰面積，計(jì)算RSD。

1.2.2 單因素考察試驗(yàn)精密稱取山茱萸9份，每份約10 g，按單因素考察試驗(yàn)選取的因素水平進(jìn)行炮制，將炮制后的飲片置70℃烘箱中干燥至恒質(zhì)量，粉碎成細(xì)粉，過(guò)0.177 mm篩。精密稱取待測(cè)樣品約5 g，按1.2.1.2供試品溶液的制備方法制備并進(jìn)樣10 μL，記錄峰面積，計(jì)算馬錢苷、齊墩果酸、熊果酸的含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 液相色譜條件確定

按照1.2.1.1的色譜條件分析對(duì)照品溶液和樣品溶液，得色譜圖（圖1-A，B）。從圖1-A可以看出，馬錢苷和齊墩果酸、熊果酸的色譜峰相距甚遠(yuǎn)，而且后二者的峰也達(dá)到基線分離，故對(duì)三者的含量測(cè)定不會(huì)互相干擾。從圖1-B可以看出，3種成分的出峰不受其他成分影響，故該色譜條件可用于同時(shí)測(cè)定山茱萸中馬錢苷、齊墩果酸和熊果酸的含量。

2.2 線性關(guān)系

經(jīng)測(cè)定，馬錢苷、齊墩果酸、熊果酸的線性方程分別為：馬錢苷A＝15 281 684.456X＋877 852.280，R＝0.999 9，線性范圍為0.150 9～2.013 9 μg；齊墩果酸A＝25 709 818.899X－3 298 461.601，R＝0.999 9，線性范圍為0.204 8～1.334 1 μg；熊果酸A＝26 313 989.101X－3 595 768.602，R＝0.999 9，線性范圍為0.202 8～1.329 1 μg。

2.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)

馬錢苷、齊墩果酸和熊果酸一天內(nèi)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）值分別為0.12%，0.53%，0.74%，日間的RSD值分別為0.17%，0.76%，0.82%。試驗(yàn)結(jié)果表明，樣品溶液在5 d內(nèi)穩(wěn)定。

2.4 精密度試驗(yàn)

試驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)對(duì)照品進(jìn)樣量為3 μL時(shí)，3種成分的RSD值分別為0.57%，0.79%，0.56%；當(dāng)進(jìn)樣量為7 μL時(shí)，3種成分的RSD值分別為0.31%，0.70%，0.73%，在進(jìn)樣量為12 μL時(shí)，3種成分的RSD值分別為0.54%，0.95%，0.18%。當(dāng)樣品進(jìn)樣量為10 μL時(shí)，3種成分的RSD值分別為0.62%，0.45%，0.89%。RSD值均低于1%，表明儀器及進(jìn)樣精密度良好。

2.5 單因素考察試驗(yàn)

2.5.1 黃酒量的考察從表1可以看出，黃酒量為20%，25%時(shí)，所測(cè)得的齊墩果酸和熊果酸的含量有顯著性差異，而黃酒量為25%，30%所測(cè)得的3種成分的含量均無(wú)顯著性差異。從節(jié)約成本的角度考慮，故選擇黃酒量為25%。

表1 不同黃酒量測(cè)得的馬錢苷、齊墩果酸和熊果酸的含量（n＝3）mg/g

2.5.2 悶潤(rùn)時(shí)間的考察從表2可以看出，悶潤(rùn)時(shí)間為0.5，1 h所測(cè)得的3種成分的含量有顯著性差異，而悶潤(rùn)時(shí)間為1，1.5 h所測(cè)得的3種成分的含量均無(wú)顯著性差異。從時(shí)間成本的角度考慮，故選擇悶潤(rùn)時(shí)間為1 h。

表2 不同悶潤(rùn)時(shí)間所測(cè)得的馬錢苷、齊墩果酸和熊果酸的含量（n＝3）mg/g

2.5.3 蒸制時(shí)間的考察從表3可以看出，蒸制時(shí)間為2，3 h所測(cè)得的3種成分的含量有顯著性差異，而蒸制時(shí)間為3，4 h所測(cè)得的3種成分的含量均無(wú)顯著性差異。從時(shí)間成本的角度考慮，故選擇蒸制時(shí)間為3 h。

表3 不同蒸制時(shí)間所測(cè)得的馬錢苷、齊墩果酸和和熊果酸的含量（n＝3）mg/g

3 結(jié)論與討論

本研究通過(guò)RP-HPLC-ELSD法同時(shí)測(cè)定山茱萸藥材中的馬錢苷、齊墩果酸和熊果酸的含量來(lái)優(yōu)選山茱萸的酒制工藝為首次報(bào)道。馬錢苷、齊墩果酸和熊果酸均為山茱萸的有效成分，同時(shí)測(cè)定3種成分的含量，能夠更加全面地反映不同炮制工藝對(duì)飲片質(zhì)量的影響。方法學(xué)考察結(jié)果顯示，RP-HPLCELSD法線性關(guān)系良好，精密度和穩(wěn)定性較高，而且簡(jiǎn)便、快捷，故該方法適用于山茱萸飲片的質(zhì)量控制。

馬錢苷屬于環(huán)烯醚萜苷，齊墩果酸和熊果酸屬于有機(jī)酸，二者分子極性差異很大，故要同時(shí)測(cè)定難度較大。預(yù)試驗(yàn)經(jīng)過(guò)比較甲醇、乙醇、乙酸乙酯、氯仿4種溶劑對(duì)3種成分的提取效果，結(jié)果顯示，甲醇對(duì)3種成分提取效果均較好，故以甲醇作為提取溶劑。本試驗(yàn)中為了避免分析時(shí)間過(guò)長(zhǎng)而采用梯度洗脫。熊果酸和齊墩果酸屬于同分異構(gòu)體，色譜行為相似，為了達(dá)到較好的分離效果，本試驗(yàn)創(chuàng)新性地在流動(dòng)相水和甲醇中同時(shí)加入少量醋酸溶液，既可以達(dá)到分離的目的，又可以避免因梯度洗脫而造成流動(dòng)相pH值波動(dòng)。由于CH3COOH在250 nm以下有末端吸收，所以，如果用紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)必須在250 nm以上，測(cè)定結(jié)果才不會(huì)受流動(dòng)相影響。而熊果酸、齊墩果酸、馬錢苷在250 nm以上無(wú)紫外吸收，故不能用紫外檢測(cè)器。

本研究選用另一種通用檢測(cè)器蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（ELSD）來(lái)檢測(cè)，基于它的測(cè)定原理，ELSD幾乎不受洗脫溶劑的影響，故在梯度洗脫全程，色譜基線穩(wěn)定。

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Study on the Processing Technology of Wine of Comus officinalis

HU Rong
（Shanxi Pharmaceutical College，Taiyuan 030031，China）

To optimize processing technology of wine of Comus officinalis,the paper using the single factor investigation method to determine the dosage of wine,stuffy in run time,steamed time in processing technology,taking the content of glycosides,ursolic acid and oleanolic acid as examining index,established RP-HPLC-ELSD determination method.The results showed that the best processing technology was wine consumption 25%,boring time of1 h,steaming time 3 h.The processing technology was reasonable,the methodology investigation,the RP-HPLC-ELSD method was accurate and reproducible,suitable to the quality control of cut crude drug of Comus officinalis.

wine processing;fructus corni;processing technology

R283

A

1002-2481（2016）01-0077-04

10.3969/j.issn.1002-2481.2016.01.22

2015-09-15

胡榮（1982-），女，山西大同人，助教，主要從事中藥材教學(xué)及質(zhì)檢研究工作。