王姝

LKB1 VEGFR2 ARK5在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及意義

王姝

目的探討LKB1、VEGFR2、ARK5在人非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）發(fā)生、發(fā)展中的作用。方法應(yīng)用免疫組化S-P法檢測LKB1、VEGFR2、ARK5在50例非小細(xì)胞肺癌標(biāo)本和10例癌旁正常肺組織標(biāo)本中的表達(dá)。結(jié)果LKB1在癌旁正常肺組織中的陽性表達(dá)率明顯高于NSCLC組織（P＜0.05）；VEGFR2、ARK5在NSCLC組織中的陽性表達(dá)率明顯高于癌旁正常肺組織（P＜0.05）。LKB1、VEGFR2、ARK5在NSCLC組織中的表達(dá)與患者的年齡、性別、組織學(xué)類型無關(guān)（P＞0.05）；與臨床分期存在相關(guān)性（P＜0.05），與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有相關(guān)性（P＜0.05）；在組織學(xué)分級(jí)中，NSCLC高分化組與低分化組比較，三者陽性表達(dá)率均有顯著性差異（P＜0.05）。結(jié)論LKB1、VEGFR2、ARK5均在NSCLC中表達(dá)，與NSCLC臨床病理特征密切相關(guān)，共同參與NSCLC的發(fā)生發(fā)展。

非小細(xì)胞肺癌 LKB1 VEGFR2 ARK5

肺癌是呼吸系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤，非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）是肺癌的主要類型，發(fā)病率和病死率均較高。目前的研究熱點(diǎn)之一是從蛋白表達(dá)層面來判斷腫瘤的進(jìn)展和預(yù)后。LKB1具有促進(jìn)細(xì)胞凋亡作用，其失活可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞無節(jié)制的生長及促進(jìn)腫瘤新生血管的形成；VEGF是目前公認(rèn)的腫瘤血管生成的重要刺激因子，與VEGFR2結(jié)合后可促進(jìn)腫瘤血管生成、浸潤和轉(zhuǎn)移。另外，當(dāng)腫瘤細(xì)胞處于代謝應(yīng)激狀態(tài)時(shí)，ARK5被激活，可以暫緩細(xì)胞生長以降低能量消耗、抑制細(xì)胞凋亡及炎癥反應(yīng)。本文探討LKB1、VEGFR2、ARK5在NSCLC發(fā)生、發(fā)展中的作用。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選擇2010年1月至2012年12月本院手術(shù)切除非小細(xì)胞肺癌標(biāo)本50例，所有病例術(shù)前均未作放療、化療、生物治療等抗腫瘤治療。男33例，女17例；年齡35～74歲，平均年齡（57.2±8.6）歲。其中鱗癌26例、腺癌24例。高分化癌14例、中分化癌23例、低分化癌13例。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移23例、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移27例。TNM分期依據(jù)2009年國際抗癌聯(lián)盟（UICC）TNM分期標(biāo)準(zhǔn)，Ⅰ～Ⅱ期39例、Ⅲ～Ⅳ期11例。另選取癌旁正常肺組織10例為對(duì)照組。常規(guī)固定石蠟包埋切片。

1.2 方法 采用免疫組織化學(xué)技術(shù)S-P法。用試劑公司提供的已知LKB1、VEGFR2、ARK5陽性的切片為陽性對(duì)照，磷酸鹽緩沖液PBS代替一抗作陰性對(duì)照。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 17.0軟件。數(shù)據(jù)用陽性率表示（%），采用χ2檢驗(yàn)及Spearman等級(jí)相關(guān)方法檢驗(yàn)顯著性及相關(guān)性。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 LKB1、VEGFR2和ARK5蛋白表達(dá)染色結(jié)果 LKB1在癌組織及癌旁正常肺組織中均有表達(dá)，其陽性顆粒主要位于細(xì)胞質(zhì)，細(xì)胞核也有少量表達(dá)，呈棕黃色顆粒；在癌組織中檢測到VEGFR2的陽性表達(dá)，陽性表達(dá)呈棕黃色顆粒，定位于細(xì)胞膜上和細(xì)胞質(zhì)內(nèi)；在癌組織中同樣檢測到ARK5的陽性表達(dá)，在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)呈現(xiàn)棕黃色顆粒。而在癌旁正常肺組織中均未檢測到VEGFR2、ARK5的陽性表達(dá)。

2.2 LKB1、VEGFR2和ARK5蛋白表達(dá)與臨床特征的關(guān)系 LKB1、VEGFR2、ARK5在癌組織中的表達(dá)與患者的年齡、性別、組織學(xué)類型無相關(guān)性（P＞0.05），與臨床分期、淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移、不同分化程度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 LKB1、VEGFR2和ARK5陽性表達(dá)表達(dá)與臨床特征的關(guān)系［n（%）］

3 討論

LKB1基因是具有普遍作用的抑癌基因，目前研究認(rèn)為LKBl 基因在抑制細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞極性及調(diào)控細(xì)胞能量代謝等方面發(fā)揮重要作用，其功能異常還與肺癌的發(fā)生密切相關(guān)［1］。本資料結(jié)果表明，LKB1在癌組織中低表達(dá)，分化程度低、TNM分期晚、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性組中LKB1的表達(dá)亦呈降低趨勢(shì)，提示LKB1蛋白可能是NSCLC發(fā)生的關(guān)鍵性屏障，在控制腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及分化過程中起著十分重要的負(fù)調(diào)控作用，其高表達(dá)可以抑制腫瘤的生長、浸潤和轉(zhuǎn)移。這與文獻(xiàn)報(bào)道［2-3］一致。LKB1與患者的年齡、性別無明顯相關(guān)性，與組織學(xué)類型亦無相關(guān)或關(guān)聯(lián)較少（這與Koivunen等的研究報(bào)道不一致，分析原因考慮可能與研究人群的種族差異［4］及本組研究標(biāo)本量少有關(guān)）。目前認(rèn)為，新生血管的生成有利于腫瘤的生長，且提供腫瘤轉(zhuǎn)移的通道。故抑制腫瘤血管的生成可被認(rèn)為是治療腫瘤的有效途徑之一。而VEGFR2的主要功能是在各種生理病理情況下介導(dǎo)新生血管的生成。據(jù)本資料結(jié)果可以推測 VEGFR2的高表達(dá)可能導(dǎo)致腫瘤血管生成增加、腫瘤生長及轉(zhuǎn)移加速。近年來研究認(rèn)為惡性腫瘤如肺癌、前列腺癌、肝癌、乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌及卵巢癌等，其發(fā)展、轉(zhuǎn)移、預(yù)后與血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子及其受體家族相關(guān)［5］。本資料結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道一致。但到目前為止，恩度、舒尼替尼等一部分相關(guān)藥物已投入臨床使用，但效果欠理想，分析原因可能惡性腫瘤新生血管的形成機(jī)制多重復(fù)雜，故未來研發(fā)多靶點(diǎn)藥物可能會(huì)有更廣泛的臨床應(yīng)用。

腫瘤細(xì)胞的過度增殖，必然導(dǎo)致其周圍能量缺乏。此時(shí)ARK5被激活，使腫瘤細(xì)胞渡過代謝應(yīng)激狀態(tài)、抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡、促進(jìn)腫瘤的侵襲與轉(zhuǎn)移及促進(jìn)毛細(xì)血管的生成。轉(zhuǎn)移能力強(qiáng)的肺癌組織在腫瘤的發(fā)生、浸潤、轉(zhuǎn)移過程中可能更易處于能量缺乏狀態(tài)，從而導(dǎo)致ARK5的高表達(dá)。ARK5可作為判斷腫瘤細(xì)胞惡性程度及有無發(fā)生浸潤轉(zhuǎn)移的一個(gè)參考指標(biāo)。但同時(shí)提示ARK5在肺癌中的表達(dá)與組織性類型差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，考慮可能與兩組研究標(biāo)本量均偏少（50例左右）以及本組研究所選鱗癌標(biāo)本中低分化者居多而文獻(xiàn)中的相關(guān)標(biāo)本低、中、高分化者平均分布有關(guān)。

綜上所述，LKB1、VEGFR2、ARK5可作為反映NSCLC生物學(xué)行為的可靠指標(biāo)，對(duì)指導(dǎo)治療有參考價(jià)值。

［1］Vaahtomeri K,Makela TP.Molecular mechanisms of tumor suppression by LKB1.FEBS Lett,2011,585(7)：944.

［2］Roy BC,Kohno T,Iwakawa R,et al. Involvement of LKB1 in epithelial-mesenchymal transition(EMT)of human lung cancer cells. Lung Cancer, 2010,7(2)：136-145.

［3］Slack-Davis J, Dasilav J O, Parsons S J. LKB1 and Src：antagonistic regulators of tumor growth and metastasis. Cancer Cell, 2010, 17(6)： 527-529.

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［5］Koukourakis MI, Limberis V, Tentes I, et al. Serum VEGF levels and tissue activation of VEGFR2/KDR receptors in patients with breast and gynecologic cancer. Cytokine, 2011, 53(3)：370-375.

ObjectiveTo study the expression of LKB1、VEGFR2、ARK5 on genesis and development of non-small cell lung cancer. Method The expression of LKB1、VEGFR2、ARK5 was detected by the S-P immunohistochemistry method in 50 cases of non-small cell lung cancer and 10 cases of normal lung tissue adjacent to the tumors. Result（1）Expression of LKB1 in normal lung tissue was a signifi cantly higher level than that in NSCLC（P＜0.05）. The expression level of VEGFR2 and ARK5 proteins in NSCLC was signifi cantly higher than that in normal lung tissue（P＜0.05）.（2）In NSCLC，the expression of LKB1、VEGFR2、ARK5 proteins has nothing to do with age，sex and histological type.The positive expression of LKB1 protein was significantly higher in well-differentiated，without lymph node metastasis tissues and StageⅠ-ⅡNSCLC than that in poorly differentiated，with Lymph node metastasis tissues and Stage Ⅲ-Ⅳ（P＜0.05）.ConclusionExpression of LKB1、VEGFR2、ARK5 in NSCLC suggests that they may play an important role in the development of NSCLC.

NSCLC LKB1 VEGFR2 ARK5

215600 江蘇省張家港市第一人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科