李孟鵬，于 濤，陳 瀟，唐寧寧，楊艷艷，張銀鳳，王 昆，王建勛，李培峰

·基礎(chǔ)研究·

長鏈非編碼RNA punisher對血管平滑肌細胞增殖和凋亡的影響及機制

李孟鵬，于 濤，陳 瀟，唐寧寧，楊艷艷，張銀鳳，王 昆，王建勛，李培峰

目的探究長鏈非編碼RNA(long noncoding RNA，lncRNA)punisher與動脈粥樣硬化的關(guān)系及其對血管平滑肌細胞增殖和凋亡的影響及機制。方法12只健康純種雄性8周齡載脂蛋白E(apolipoprotein E，ApoE)基因敲除小鼠(ApoE－/－小鼠)，通過高脂飼喂制作動脈粥樣硬化模型小鼠(模型組)；12只健康C57BL/ 6J小鼠飼以基礎(chǔ)飼料為對照組；人體血管平滑肌細胞系根據(jù)轉(zhuǎn)染情況分為小干擾-punisher組和陰性對照(negative control，NC)組。通過熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)測定模型組與對照組小鼠主動脈弓的punisher表達。通過合成punisher的小干擾RNA作為反向?qū)φ找种苝unisher在人血管平滑肌細胞中的表達，應(yīng)用實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)驗證punisher表達情況；分別采用細胞計數(shù)試劑盒(cell counting kit-8，CCK-8)、劃痕實驗及流式細胞術(shù)檢測抑制punisher表達對人血管平滑肌細胞增殖、遷移和凋亡的影響；蛋白印跡法檢測B淋巴細胞瘤-2(B-cell leukemia-lymphoma-2，Bcl-2)、半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase 3，caspase3)、caspase8、p-p38、p53凋亡相關(guān)蛋白的表達。結(jié)果①血脂4項及血管蘇木精-伊紅染色證明造模成功。熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)顯示，動脈粥樣硬化模型組小鼠血管punisher表達高于對照組(P＜0.05)；②CCK-8檢測顯示小干擾-punisher組的光密度值在轉(zhuǎn)染36 h之后低于NC組(t36＝2.683、P＜0.05，t48＝2.554、P＜0.05)；劃痕實驗顯示小干擾-punisher組細胞遷移低于NC組(t＝3.136、P＜0.05)；③流式細胞術(shù)顯示，小干擾-punisher組中凋亡細胞數(shù)占比多于NC組(22.6%和11.7%，χ2＝4.245、P＜0.05)；④蛋白印跡法顯示小干擾-punisher組Bcl-2、caspase3-30×103、p53蛋白表達水平明顯低于NC組(t分別為9.546、5.647、5.42，P＜0.05)，caspase3-17×103蛋白表達水平高于NC組(t＝4.892、P＜0.05)。結(jié)論沉默lncRNA punisher可以促進血管平滑肌細胞的凋亡并抑制其增殖。

長鏈非編碼RNA；動脈粥樣硬化；細胞凋亡；血管平滑肌細胞

動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)是最常見的心血管疾病，并且它是缺血性心腦血管疾病的病理基礎(chǔ)[1]。有統(tǒng)計顯示，超過80%的50歲以上人群可見明顯的AS斑塊，AS已成為威脅廣大人民生命健康的重大疾病[2]。因此，研究AS的分子機制，發(fā)現(xiàn)和尋找其早期診斷和治療靶點迫在眉睫。

血管平滑肌細胞(vascular smooth muscle cell，VSMC)的增殖和遷移是AS引起血管損傷和再狹窄的一個關(guān)鍵因素。在AS的發(fā)展之初VSMC從收縮型變?yōu)榉置谛筒⑦w移到血管內(nèi)膜從而導(dǎo)致內(nèi)膜的增生[3]。因此，研究VSMC的增殖和凋亡對發(fā)現(xiàn)AS的新治療和檢測靶點具有重要意義。

長鏈非編碼RNA(long noncoding RNA，lncRNA)是一類長度超過200 bp沒有蛋白質(zhì)編碼功能的RNA。雖然最初人們認為lncRNA只是轉(zhuǎn)錄噪音，但如今人們發(fā)現(xiàn)lncRNA幾乎參與到細胞生命活動的各個分支之中[4]。近年來，研究證實lncRNA在包括AS在內(nèi)的心血管疾病的發(fā)生和發(fā)展中起著十分重要的作用[5]。LncRNA punisher是一個最新發(fā)現(xiàn)的在內(nèi)皮細胞中含量豐富的lncRNA。研究表明，沉默punisher可以抑制內(nèi)皮細胞的增殖和血管的生成[6]。由于內(nèi)皮細胞和VSMC有密切的聯(lián)系，并且內(nèi)皮細胞和VSMC在AS的發(fā)生和發(fā)展中都起著重要的作用，推測punisher對VSMC的生物學功能和AS的發(fā)展都可能起著重要的調(diào)節(jié)作用[7]。

1 材料與方法

1.1 材料 總膽固醇(total cholesterol，TC)、高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoprotein-cholesterol，HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoprotein-cholesterol，LDL-C)、三酰甘油(triacylglycerol，TG)測試盒購自南京建成生物工程研究所，蘇木精-伊紅(hematoxylin-eosin，HE)染料購自北京索萊寶公司，TRIzol試劑盒購自美國Thermo Fisher Scientific公司，RNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒購自日本TaKaRa公司，沉默punisher的小干擾RNA(small interfering RNA，siRNA)由上海吉瑪公司合成，LipofectamineTM2000購自美國 Invitrogen公司，細胞計數(shù)試劑盒(cell counting kit-8，CCK-8)以及細胞凋亡檢測試劑盒(碘化丙啶、異硫氰酸熒光素雙染法)購自上海七海復(fù)泰生物科技有限公司，放射免疫沉淀法裂解液購自北京索萊寶公司，增強化學發(fā)光液購自德國Millipore公司，B淋巴細胞瘤-2(B-cell leukemia-lymphoma-2，Bcl-2)多克隆抗體及二抗均購自美國Cell Signaling Technology公司，載脂蛋白 E(apolipoprotein E，ApoE)基因敲除小鼠(ApoE－/－小鼠)購自江蘇省卡文斯實驗動物有限公司[SCXK-(蘇)-2011-0003]，C57BL/6J小鼠購自青島市藥檢所[SCXK-(魯)-2014-0007]，人主動脈血管平滑肌細胞(human aortic vascular smooth muscle cells，HA-VSMC)購自上海中國科學院細胞庫。

1.2 實驗方法

1.2.1 AS模型小鼠的制備與鑒定 12只健康純種雄性8周齡ApoE－/－小鼠作為AS模型組，模型組給予高脂飼料(2%膽固醇、0.5%膽汁酸、3%豬油、0.2%丙硫氧嘧啶和94.3%的基礎(chǔ)飼料)；對照組為12只健康C57BL/6J小鼠，飼以基礎(chǔ)飼料。動物飼養(yǎng)在帶不銹鋼蓋底的塑料籠內(nèi)，每籠4只，自由飲水，室溫19～23℃，自然采光。

1.2.2 血液和動脈樣本的采集 實驗第5周，各組小鼠禁食過夜，在3%水合氯醛腹腔麻醉下分離主動脈。刨開胸腔，注射器心臟取血，血液經(jīng)3 000 r/ min離心15 min后取血清檢測血脂4項。顯微鏡下找到主動脈剪下約1 cm，立即用4%的多聚甲醛固定用于形態(tài)學觀察。

1.2.3 血脂檢測 取血清，用直接法測定LDL-C和HDL-C，膽固醇氧化酶-過氧化物酶偶聯(lián)法測定TC，甘油磷酸氧化酶-過氧化物酶偶聯(lián)測定TG。

1.2.4 病理學觀察 將4%多聚甲醛固定的主動脈脫水透明后用石蠟包埋，以厚度為0.6 mm連續(xù)切片后，切片固定在載玻片上，HE染色，之后光鏡觀察。

1.2.5 細胞培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染 HA-VSMC用含10%胎牛血清的達爾伯克改良伊格爾培養(yǎng)基(Dulbecco’s modified Eagle medium，DMEM)，置于37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱培養(yǎng)。待細胞匯合度達到80%左右時用LipofectamineTM2000將si-punisher和對照-siRNA轉(zhuǎn)入細胞中，分別為si-punisher組和陰性對照(negative control，NC)組。punisher序列為5′-ACUCCACC UCAAACUCUUATT-3′，對照-siRNA序列為5′-UUCUCC GAACGUGUCACGUTT-3′。

1.2.6 punisher表達水平檢測 組織樣本:取100 mg血管樣本加1 mL TRIzol試劑冰上研磨提取組織總RNA；細胞樣本:細胞轉(zhuǎn)染24 h后用TRIzol試劑裂解細胞(6孔板每孔加1mL TRIzol試劑)。提取總RNA，反轉(zhuǎn)錄以互補脫氧核糖核酸作為模板。實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)條件為95℃ 5 min、95℃10 s、60℃ 30 s共40個循環(huán)，實驗重復(fù)3次。實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)產(chǎn)物引物序列分別為:lnc-RNA punisher上游序列5′-GTCCTCCACTCCACCTC AAA-3′、下游序列5′-TGAGTTCCTGATCGTGTCCA-3′；甘油醛-3-磷酸脫氫酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH)mRNA上游序列5′-GGACTC ATGACCACAGTCCATGCC-3′、下游序列5′-TCAGGG ATGACCTTGCCCACAG-3′。

1.2.7 CCK-8法檢測細胞增殖 細胞以2×105/mL的密度100 μL接種于96孔板，每組重復(fù)6孔。細胞鋪板12 h后進行轉(zhuǎn)染。分別對轉(zhuǎn)染0、12、24、36、48 h的細胞進行檢測，檢測時每孔換含10 μL的CCK-8試劑的100 μL培養(yǎng)基，37℃孵育1 h后用酶標儀測定各孔450 nm處光密度(optical density，OD)值。

1.2.8 細胞劃痕實驗 細胞以4×105/mL的密度1 mL接種于6孔板中。待細胞匯合度至70%～80%時進行細胞轉(zhuǎn)染處理。轉(zhuǎn)染12 h后換無血清培養(yǎng)基，待生長24 h后用移液槍頭劃線，之后用磷酸緩沖鹽溶液沖洗3次，拍照，換無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)24 h進行下一次拍照。

1.2.9 流式細胞儀檢測細胞凋亡情況 VSMC細胞轉(zhuǎn)染48 h后，制備5×105/mL的細胞懸液，取1 mL細胞懸液4℃1 000 r/min離心10 min，棄上清。之后加1 mL預(yù)冷磷酸緩沖鹽溶液輕輕震蕩細胞，1 000 r/min離心10 min，棄上清，如此反復(fù)洗滌3遍。之后按凋亡試劑盒操作說明進行。最后尼龍膜過濾細胞團塊，用美國BD Accuri C6流式細胞儀進行檢測。

1.2.10 蛋白印跡法檢測蛋白表達 采用蛋白印跡法檢測目標蛋白的表達水平。放射免疫沉淀法提取轉(zhuǎn)染48 h細胞的總蛋白，按照二辛可寧酸試劑盒說明書進行蛋白定量并分裝，－80℃保存。取等量蛋白，十二烷基硫酸鈉聚乙丙烯酰胺凝膠電泳后將分離的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移至聚偏二氟乙烯膜上，用5%脫脂奶粉封閉1 h后加入Bcl-2、caspase3、caspase8、p-p38和p53的多克隆抗體(1∶1 000)，室溫孵育2 h，TBST液(Tris 6.05 g/L、NaCl 8.5 g/L、Tween 20 1 mL，pH值7.45)洗膜，辣根過氧化物酶標志的二抗(1∶2 000)孵育1.5 h，增強化學發(fā)光顯色，Susion Solos凝膠分析系統(tǒng)中曝光，采用ImageG軟件計算曝光條帶OD值，以目標蛋白OD值/內(nèi)參照肌動蛋白(βactin，1∶2 000)OD值的比值反映蛋白表達水平。每組實驗獨立重復(fù)3次結(jié)果取平均值。

1.3 統(tǒng)計學處理 應(yīng)用sigmaplot 12.5軟件繪圖。應(yīng)用SPSS 13.0軟件，計量資料用均數(shù)±標準差(± s)表示，多個組間的數(shù)據(jù)比較采用t檢驗；計數(shù)計量占比用百分數(shù)表示，采用χ2檢驗；P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 AS模型小鼠的鑒定 模型組血清血脂水平明顯高于對照組(P＜0.05，表1)。HE染色，40倍鏡下顯示模型組血管內(nèi)壁可見明顯斑塊(圖1)。

表1 血脂4項檢測(mmol/L，n＝12)

圖1 光鏡下各組血管HE染色(1∶40)

2.2 AS各組細胞punisher表達水平 AS模型組punisher表達水平明顯高于對照組(t＝9.597、P＜0.05，圖2)；si-punisher組細胞的punisher表達水平明顯低于NC組(t＝27.044、P＜0.05，圖3)。

圖2 主動脈弓中punisher的表達

圖3 細胞內(nèi)punisher的相對表達

2.3 si-punisher對HA-VSMC增殖和遷移的影響

在轉(zhuǎn)染36 h之后，si-puni-sher組細胞較NC組比較出現(xiàn)明顯的生長抑制(t36＝2.684、P＜0.05，t48＝2.554、P＜0.05，圖4A)。劃痕實驗顯示si-punisher組細胞遷移或增殖受到顯著抑制(t＝3.136、P＜0.05，圖4B)。

2.4 si-punisher對HA-VSMC凋亡的影響 si-punisher組細胞凋亡明顯多于NC組(χ2＝4.245、P＜0.05，圖5)。

圖4 各組細胞增殖情況

圖5 流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡

2.5 蛋白印跡法檢測凋亡相關(guān)蛋白在各組中的表達 si-punisher組中Bcl-2、caspase3-30×103、p53表達明顯低于NC組(t分別為9.546、5.647、5.42，P＜0.05，圖6)，caspase3-17×103表達高于NC組(t＝4.892、P＜0.05，圖6)。Caspase8與p-p38的表達無明顯變化。

圖6 蛋白印跡法檢測凋亡相關(guān)蛋白的表達

3 討論

雖然最初人們把lncRNA當做轉(zhuǎn)錄噪音，然而近年來越來越多的證據(jù)表明lncRNA在生命活動中起著重要的作用[8]?，F(xiàn)如今lncRNA已成為和微小RNA(microRNA，miRNA)并駕齊驅(qū)的研究熱點。目前，大量的研究表明，lncRNA在AS的發(fā)生和發(fā)展中起著重要的作用[7]，如 INK4位點反義非編碼RNA與AS等多種心血管疾病密切相關(guān)，它可提高平滑肌細胞的增殖和黏附，并能抑制細胞凋亡[9]；活化T細胞核因子非編碼基因可以調(diào)控血管生成及內(nèi)皮細胞的增殖和遷移[10]；巨噬細胞中E330013P06參與泡沫細胞的形成[11]；肝癌高表達基因調(diào)控脂質(zhì)代謝等[12]。因此，研究lncRNA的生物功能和分子機制具有重要的意義。

lncRNA punisher最初發(fā)現(xiàn)富集于內(nèi)皮細胞并影響其增殖[6]，因為內(nèi)皮細胞和平滑肌細胞經(jīng)常協(xié)同調(diào)控血管的各種生理功能，并且兩者在位置上相鄰，因此推測punisher可能在VSMC的生物學功能中起著重要的作用，并有可能影響AS的發(fā)生、發(fā)展。本實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在AS模型組血管中punisher的表達水平明顯高于對照組。這表明高表達的punisher可能是引起AS的原因或其結(jié)果之一；進一步的實驗結(jié)果表明，沉默punisher可以抑制VSMC的增殖同時促使其凋亡。此結(jié)果與punisher在內(nèi)皮細胞中的結(jié)果一致。因此，有理由相信punisher是AS發(fā)展過程中的一個重要調(diào)節(jié)因素。

本研究進一步發(fā)現(xiàn)，si-punisher組較NC組Bcl-2、p53和caspase3-30×103的蛋白表達水平都有明顯下降，caspase3-17×103有所提高，而caspase8和pp38的表達沒有明顯差異。由此可見，si-punisher組細胞凋亡可能是由于Bcl-2表達水平降低導(dǎo)致。而作為凋亡誘導(dǎo)因子的p53表達水平也出現(xiàn)了降低。因此，推測punisher并不是直接作用于Bcl-2或p53，很有可能有更復(fù)雜的機制?，F(xiàn)階段研究已經(jīng)證實，lncRNA可以通過表觀遺傳、轉(zhuǎn)錄調(diào)控和轉(zhuǎn)錄后調(diào)控等多個層面對基因進行調(diào)控，同時起作用的分子機制也是多種多樣的[8]。其中核內(nèi)lncRNA通常通過調(diào)控信使RNA的間接來控制基因轉(zhuǎn)錄，細胞質(zhì)lnc-RNA則通過調(diào)節(jié)信使RNA的穩(wěn)定性或miRNA的活性來調(diào)節(jié)基因表達[13]。本團隊在研究心血管疾病的發(fā)病機制方面具有豐富的經(jīng)驗，近2年分別在European Heart Jourmal、Nat Communications和PloS Genetics等雜志報道過非編碼核酸調(diào)控心血管疾病的作用分子機制[14-16]。這提供了一個新的可能，即punisher可能是通過影響miRNA的表達進而調(diào)節(jié)各個凋亡相關(guān)蛋白來影響細胞的增殖與凋亡。

由于lncRNA有很強的組織特異性，所以很容易成為疾病的特異性標志物或靶點。例如INK4位點反義非編碼RNA因為其在心肌梗死患者中高表達的特性，被人們視為新的分子標志物[17]。本實驗發(fā)現(xiàn)，在模型小鼠初期其血管的punisher表達量就高于對照組，達到4倍。因此，punisher有望成為新的、重要的AS前期的分子標志物。

綜上所述，本研究在AS模型組小鼠血管中發(fā)現(xiàn)punisher表達水平明顯高于對照組小鼠；進一步細胞實驗表明，沉默punisher可以導(dǎo)致平滑肌細胞增殖的抑制和凋亡的增強。這些結(jié)果說明，punisher對VSMC的生物學功能具有重要的調(diào)控作用，其在AS的發(fā)生和發(fā)展中可能起著十分關(guān)鍵的影響；同時，這也為AS的前期診斷和治療提供了新的分子靶標。

[1]Libby P，Ridker PM，Hansson GK.Progress and challenges in translating the biology of atherosclerosis[J].Nature，2011，473(7347):317-325.

[2]Tuzcu EM，Kapadia SR，Tutar E，et al.High prevalence of coronary atherosclerosis in asymptomatic teenagers and young adults:evidence from intravascular ultrasound[J]. Circulation，2001，103(22):2705-2710.

[3]Gomez D，Owens GK.Smooth muscle cell phenotypic switching in atherosclerosis[J].Cardiovasc Res，2012，95(2): 156-164.

[4]Quinn JJ，Chang HY.Unique features of long non-coding RNA biogenesis and function[J].Nat Rev Genet，2016，17 (1):47-62.

[5]Archer K，Broskova Z，Bayoumi AS，et al.Long non-coding RNAs as master regulators in cardiovascular diseases[J]. Int J Mol Sci，2015，16(10):23651-23667.

[6]Kurian L，Aguirre A，Sancho-Martinez I，et al.Identification of novel long noncoding RNAs underlying vertebrate cardiovascular development[J].Circulation，2015，131(14): 1278-1290.

[7]Li H，Zhu H，Ge J.Long noncoding RNA:recent updates in atherosclerosis[J].Int J Biol Sci，2016，12(7):898-910.

[8]Kung JT，Colognori D，Lee JT.Long noncoding RNAs:past，present，and future[J].Genetics，2013，193(3):651-669.

[9]Holdt LM，Beutner F，Scholz M，et al.ANRIL expression is associated with atherosclerosis risk at chromosome 9p21 [J].Arterioscler Thromb Vasc Biol，2010，30(3):620-627.

[10]Sharma S，F(xiàn)indlay GM，Bandukwala HS，et al.Dephosphorylation of the nuclear factor of activated T cells(NFAT) transcription factor is regulated by an RNA-protein scaffold complex[J].Proc Natl Acad Sci USA，2011，108(28): 11381-11386.

[11]Reddy MA，Chen Z，Park JT，et al.Regulation of inflammatory phenotype in macrophages by a diabetes-induced long noncoding RNA[J].Diabetes，2014，63(12):4249-4261.

[12]Cui M，Xiao Z，Wang Y，et al.Long noncoding RNA HULC modulates abnormal lipid metabolism in hepatoma cells through an miR-9-mediated RXRA signaling pathway[J]. Cancer Res，2015，75(5):846-857.

[13]Qi P，Du X.The long non-coding RNAs，a new cancer diagnostic and therapeutic gold mine[J].Mod Pathol，2013，26(2):155-165.

[14]Wang K，Liu CY，Zhou LY，et al.APF lncRNA regulates autophagy and myocardial infarction by targeting miR-188-3p[J].Nat Commun，2015，6:6779.

[15]Wang K，Long B，Liu F，et al.A circular RNA protects the heart from pathological hypertrophy and heart failure by targeting miR-223[J].Eur Heart J，2016，37(33):2602-2611.

[16]Wang K，Zhou LY，Wang JX，et al.E2F1-dependent miR-421 regulates mitochondrial fragmentation and myocardial infarction by targeting Pink1[J].Nat Commun，2015，6: 7619.

[17]Vausort M，Wagner DR，Devaux Y.Long noncoding RNAs in patients with acute myocardial infarction[J].Circ Res，2014，115(7):668-677.

The regulatory mechanism of long noncoding RNA punisher on proliferation and apoptosis of vascular smooth muscle cell

LI Mengpeng，YU Tao，CHEN Xiao，TANG Ningning，YANG Yanyan，ZHANG Yinfeng，WANG Kun，WANG Jianxun，LI Peifeng
(Institute for Translational Medicine，Qingdao University，Qingdao Shandong 266071，China)

Objective Explore the relationship and mechanism of long noncoding RNA(lnc-RNA)punisher with atherosclerosis(AS)and its effects on the proliferation and apoptosis of vascular smooth muscle cell(VSMC).Methods Twelve healthy male 8 week old apolipoprotein E(ApoE) knockout mice(ApoE－/－mice)，produced the model of atherosclerosis in mice by high fat fed (model group)；12 healthy C57BL/6J mice were fed with basal diet as control group；hunman vascular smooth muscle cell were divided in small interfering-punisher group and negative control(NC) group by their different transfection.Aortic arch tissue sample of the AS model and control mice were used to determine the punisher expression using fluorescence quantitative polymerase chain reaction (PCR)method.Small interference RNA of punisher were used to downregulate the expression ofpunisher in vascular smooth muscle cell.Moreover，cell counting kit-8(CCK-8)，scratch-wound experiment and flow cytometry method were used to detect the regulatory role of punisher in vascular smooth muscle cell proliferation migration and apoptosis respectively.Finally Western Blot was used to determine the expression levels of B-cell leukemia-lymphoma-2(Bcl-2).Results ①The levels of triacylglycerol(TG)，total cholesterol(TC)，low density lipoprotein-cholesterol(LDL-C)and high density lipoprotein-cholesterol(HDL-C)along with Hematoxylin and Eosin(HE)staining proved that model building success.The fluorescence quantitative PCR results showed that the punisher expression is higher(t＝9.597，P＜0.05)in model mice than in control group.②According to the CCK-8 assay，the knockdown of punisher group showed significantly(P＞0.05)lower proliferation level than the NC group(t36＝2.683，P＜0.05；t48＝2.554，P＜0.05).Scratch-wound experiments si-punisher cells migration has been supressed(t＝3.136，P＜0.05).③Flow cytometry showed that silencing of punisher lncRNA significantly increased VSMC apoptosis cell number compared to NC group(22.6%and 11.7%；χ2＝4.245，P＜0.05).④Western Blot results showed a significant down regulation of expression of Bcl-2，caspase3-30×103and p53(t respectively 9.546，5.647，5.42；P＜0.05)and a significant upregulation of expression of caspase 3-17×103(t＝4.892，P＜0.05)upon silencing of punisher lncRNA in VSMC.Conclusion Silence lncRNA punisher can increasing vascular smooth muscle cell apoptosis and downregulation of cell proliferation.

Long noncoding RNA(lncRNA)；Atherosclerosis(AS)；Cell apoptosis；Vascular smooth muscle cell(VSMC)

Q522；R329.2＋8；R541.4

A

2095-3097(2016)06-0339-06

10.3969/j.issn.2095-3097.2016.06.006

2016-11-05 本文編輯:徐海琴)

中國博士后科學基金(2016M590616)；山東省博士后創(chuàng)新項目(201601016)

266071山東青島，青島大學轉(zhuǎn)化醫(yī)學研究院(李孟鵬，于 濤，陳 瀟，唐寧寧，楊艷艷，張銀鳳，王 昆，王建勛，李培峰)

于濤，E-mail:yutao0112＠qdu.edu.cn；李培峰，E-mail:peifli＠qdu.edu.cn