趙敏　郭運生　肖芳

[摘要] 目的 探討趨化因子1（CXCL1）在胃癌中的表達及胃癌微血管生成的關系。 方法 選擇2013年10月～2014年10月于秦皇島市第一醫(yī)院手術切除并經病理確診的79例胃癌組織和18例癌旁正常胃黏膜組織，采用免疫組織化學EnVision法檢測各組織中CD34和CXCL1的表達情況，分析CXCL1和CD34-MVD的相關性。 結果 與癌旁正常胃黏膜組織比較，胃癌組織中CXCL1呈過表達（P < 0.05），且有淋巴結轉移者明顯高于無淋巴結轉移者（P < 0.05）；胃癌組織中CXCL1的表達和CD34-MVD呈正相關（r = 0.715，P < 0.05）。 結論 胃癌組織中CXCL1的高表達可能通過參與胃癌微血管生成進而影響胃癌的侵襲轉移。

[關鍵詞] 趨化因子1；胃癌；血管再生

[中圖分類號] R73 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2016）10（b）-0091-03

[Abstract] Objective To investigate the expression of CXCL1 and the relationship between CXCL1 and angiogenesis in gastric cancer carcinoma. Methods Seventy-nine tissues of gastric carcinoma and 18 tissues of non-neoplastic gastric from October 2013 to October 2014 confirmed by pathological diagnosis in the Qinhuangdao First Hospital were collected， the expression patterns of CXCL1 and CD34 in all gastric tissues were determined by immunohistochemical staining analysis and the correlation between CXCL1 and CD34-MVD was analyzed. Results Compared with normal gastric mucosa tissues adjacent to carcinoma， the expression of CXCL1 was higher in the gastric carcinoma （P < 0.05）， and the positive expression was significantly higher in the tissues with metastasis than that in the tissues without metastasis （P < 0.05）. The expression of CD34-MVD was positively correlated with CXCL1 in gastric carcinoma （r = 0.715， P < 0.05）. Conclusion The high expression of CXCL1 plays an important role in metastasis of gastric through participating in tumor angiogenesis.

[Key words] CXCL1； Gastric carcinoma； Angiogenesis

血管生成可以為腫瘤生長提供必要的養(yǎng)分，是腫瘤侵襲轉移的必要條件，CXC家族趨化因子是具有多種功效的細胞因子超家族，它們可以趨化白細胞的遷移，調節(jié)血管生成和血管重構，是腫瘤發(fā)病過程中重要的促血管生成因子。近年來，趨化因子/受體生物軸作為腫瘤血管的調控分子已成為腫瘤轉移研究的熱點[1]，CXCL1是CXC類趨化因子的一員，能夠通過其特異性受體CXCR2直接作用于血管內皮細胞促進血管生成，介導腫瘤的生長和轉移[2]。本研究采用免疫組織化學法檢測胃癌中CXCL1的表達，探討CXCL1與胃癌血管生成的關系?，F報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2013年10月～2014年10月秦皇島市第一醫(yī)院確診為胃癌的手術切除組織79例，配對手術切緣正常胃黏膜組織18例，其中男52例，女27例；年齡48～79歲，中位年齡63.5歲；低分化34例，中高分化45例。所有患者均有詳細的臨床病理資料，術前均未接受放化療，標本均經10%中性福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋。

1.2 方法

1.2.1 免疫組化 采用EnVision方法，鼠抗人CXCL1購自武漢博士德公司，鼠抗人CD34和試劑盒購自福州邁新生物技術開發(fā)有限公司，將所有組織分別行CXCL1和CD34免疫組化染色，抗體滴度均為1∶100，染色步驟按試劑盒說明書進行，用PBS代替一抗作為陰性對照，二氨基聯苯胺（DAB）顯色后蘇木精復染，中性樹膠封片。

1.2.2 免疫組織結果判讀 陽性表達定位細胞質內，呈棕黃色陽性，無棕黃色染色或陽性細胞數<10%為陰性，陽性細胞率≥10%為陽性表達；CD34標記的胃癌組織微血管密度（MVD）計數：CD34主要表達于血管內皮細胞膜，微血管染色呈棕黃色，分布不均，主要位于癌灶邊緣，癌細胞密集區(qū)，首先在低倍鏡下觀察切片，確定新生血管密集的3個視野（即新生血管熱點區(qū)），然后在高倍鏡下計數視野內染色陽性的微血管數，取3個視野計數結果的均數作為該切片的MVD。

1.3 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計學軟件進行數據分析，計量資料數據用均數±標準差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗；相關性檢驗采用Spearman相關分析，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 CXCL1蛋白的表達與胃癌臨床病理關系

CXCL1在胃癌組織和正常胃黏膜組織中均有表達，且在胃癌組織中表達上調（0.2954±0.0126），與正常胃黏膜組織（0.1208±0.0027）比較差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05），并且CXCL1在低分化胃癌組織中的表達高于中高分化癌組織（P < 0.05），有淋巴結轉移者高于無淋巴結轉移者（P < 0.05），而在不同性別、年齡中的表達差異均無統(tǒng)計學意義（均P > 0.05）。

2.2 MVD的表達與胃癌的臨床病理關系

在正常胃黏膜組織中的MVD計數為（23.38±7.51）個/視野；在胃癌組織中MVD為（43.52±9.34）個/視野，差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05）。且CD34-MVD在低分化胃癌組織中計數高于中高分化胃癌組織（P < 0.05），有淋巴結轉移者MVD計數明顯高于無淋巴結轉移者，差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05），但在不同性別、年齡的計數差異均無統(tǒng)計學意義（均P > 0.05）。

2.3 胃癌組織CXCL1和CD34-MVD表達的相關性

Spearman等級相關分析顯示，在胃癌中CXCL1與CD34-MVD的表達呈顯著正相關（r = 0.715，P < 0.05）。

3 討論

血管生成是惡性腫瘤生長的必要條件，在腫瘤發(fā)生、轉移過程中發(fā)揮著關鍵作用[3]。Folkman等[4]首先在20世紀70年代提出腫瘤血管生成理論，指出腫瘤的生長和轉移依賴于腫瘤血管的生成。實體腫瘤在沒有血管生成時腫瘤只能長到1～3 mm，不會發(fā)生轉移，當腫瘤直徑超過2 mm時，就需要新生血管提供營養(yǎng)物質，腫瘤新生血管生成以后，腫瘤呈指數倍增，隨之增加轉移機會[5]。近年來諸多學者圍繞腫瘤血管生成進行了大量的實驗研究，探究腫瘤血管生成的相關因子及受體可以為抑制腫瘤血管生成的靶向治療提供有效的理論基礎[6]。

CXCL1最初在黑色素瘤中發(fā)現，在巨噬細胞、嗜中性粒細胞和上皮細胞中有表達，因其結構功能區(qū)第一個半胱氨酸前有ELR[谷氨酸-亮氨酸-精氨酸（Glu-Leu-Arg）]結構，CXCL1屬于ELR+CXC趨化因子，與其他含有ELR結構的CXC家族成員一樣，CXCL1具有促血管生成作用[7]。近年來，學者們在對結直腸癌、卵巢癌、膀胱癌等多項實體惡性腫瘤的研究中發(fā)現CXCL1高表達[8-10]，在對基因工程小鼠的研究中，Scapini等[11]發(fā)現，CXCL1能夠通過募集中性粒細胞并引起中性粒細胞分泌VEGF-A介導血管生成。Shintani等[12]在關于CXCL1與口腔鱗狀上皮細胞癌關系的研究中發(fā)現，MVD檢測顯示CXCL1的表達與腫瘤血管形成關系密切，提示CXCL1是高效的促血管生長因子[13-14]。

近年來的研究通過比較胃癌及癌旁正常組織的基因表達發(fā)現，CXCL1在胃癌組織中高表達，并且與腫瘤進展和患者的不良預后呈正相關[15-18]。同時Xu等[19]發(fā)現CXCL1的特異性受體CXCR2在胃癌組織中也呈高表達。在本次研究中，CXCL1在胃癌組織中表達上調，且腫瘤分化程度低，CXCL1表達上調明顯，有淋巴結轉移者的陽性表達高于無淋巴結轉移者，提示CXCL1的高表達可能與胃癌的侵襲轉移有關。

CD34在微血管中的表達良好，特異性較高，在有關腫瘤血管的研究中多采用CD34來標記微血管，目前MVD值是評估腫瘤血管生成狀態(tài)的金標準[20]。在本次研究中CD-MVD值在胃癌組織中明顯高于正常胃黏膜組織，而且低分化組高于中高分化組，有淋巴結轉移者高于無淋巴結轉移者，統(tǒng)計分析提示胃癌組織中CXCL1的表達上調和MVD值呈正相關，MVD顯示CXCL1可能與胃癌血管生成有關，CXCL1可能通過促血管生成從而參與胃癌的侵襲轉移。

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（收稿日期：2016-07-10 本文編輯：任 念）