劉筱斐+陳柯

摘 要 以串珠鐮刀球菌、禾谷鐮刀菌兩種病原真菌為供試菌種，采用菌絲生長(zhǎng)速率法研究了生姜提取液對(duì)兩種病原真菌的抑制作用。結(jié)果表明：生姜提取液對(duì)串珠鐮刀菌和禾谷鐮刀菌有一定的抑制作用，隨著生姜提取液濃度的增加，抑菌率出現(xiàn)先升后降的趨勢(shì)，對(duì)串珠鐮刀菌的最適抑菌濃度為80%，對(duì)禾谷鐮刀菌的最適抑菌濃度為40%；生姜提取液對(duì)串珠鐮刀菌的抑制效果明顯高于禾谷鐮刀菌。

關(guān)鍵詞 生姜；鐮刀菌；抑菌率

中圖分類號(hào) R9 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1674-6708（2016）172-0188-02

串珠鐮刀菌（Fusarium moniliforme）和禾谷鐮刀菌（Fusarium graminearum）是農(nóng)作物中常見的非專性、非宿主特異性病原真菌，無(wú)性時(shí)期屬半知菌亞門，有性時(shí)期屬子囊菌亞門。鐮刀菌可在土壤中越冬越夏，侵染多種植物，引起植物的根腐、莖腐、花腐和穗腐等多種病害，寄主多達(dá)100余種，侵染植物的維管束系統(tǒng)，破壞植物的維管束，并產(chǎn)生毒素，造成作物萎蔫甚至死亡，影響了作物的產(chǎn)量的品質(zhì)[ 1 ]。串珠鐮刀菌產(chǎn)生的一種水溶性代謝產(chǎn)物-伏馬菌素還可引起馬腦白質(zhì)軟化癥、豬肺水腫及大鼠肝癌等各種疾病[ 2 ]。

近年來(lái)，隨著人們生活質(zhì)量的提高和環(huán)保意識(shí)的增強(qiáng)，化學(xué)藥物防治病蟲害得到限制，而開發(fā)穩(wěn)定、安全、污染少的天然植物源農(nóng)藥-生物農(nóng)藥成為研究熱點(diǎn)[3]。植物源農(nóng)藥的活性成分是植物的次生代謝物，主要有機(jī)化學(xué)成分為生物堿、酚類、萜類等物質(zhì)，這些成分具有生物活性，對(duì)病原菌有一定的抑制作用[4]。孟昭禮等從銀杏提取液中分離出對(duì)植物病原菌有較高抑制活性的天然化合物，并仿生合成了系列殺菌劑[ 5 ]；王帥等研究了藥用植物提取液對(duì)草莓灰霉病的抑菌活性，發(fā)現(xiàn)藥用植物五味子提取液抑菌效果較好[ 6 ]；程智慧等研究了大蒜秸稈水浸液的抑菌作用并對(duì)其抑菌成分進(jìn)行了初步的研究[ 7 ]；喻大昭等研究了植物源粗提取液對(duì)黃瓜灰霉病原菌的生物活性，得出油茶和辣蓼的粗提取物對(duì)灰霉病抑制效果較好[8]。

生姜是姜科多年生草本植物，可作為藥用和食用植物，在我國(guó)具有悠久的歷史和重要的使用價(jià)值。本實(shí)驗(yàn)以河南省商丘地區(qū)種植的植物生姜提取液為研究對(duì)象，采用菌絲生長(zhǎng)速率法研究了不同濃度的生姜提取液對(duì)串珠鐮刀球菌、禾谷鐮刀菌兩種病原真菌的抑菌活性，以期為進(jìn)一步的抑菌活性物質(zhì)分析及生物農(nóng)藥的開發(fā)奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

串珠鐮刀球菌、禾谷鐮刀菌由植物與微生物互作河南省高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供；生姜為河南省商丘地區(qū)廣泛種植的姜。

1.2 方法

1.2.1 提取液的制備

取生姜200g，洗去泥沙去皮，切成小塊，放入壓汁機(jī)里壓出汁液，紗布過濾，棄掉濾渣，收集濾液（100%）。將濾液（100%）用無(wú)菌水稀釋成濃度分別為20%、40%、60%、80%的稀釋液備用。

1.2.2 培養(yǎng)基的制備

配制PDA培養(yǎng)基（馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂粉20g，補(bǔ)水至1000mL），高壓滅菌后，倒平板。培養(yǎng)基凝固后，采用平板加入法，分別取20%、40%、60%、80%和100%不同濃度的生姜提取液1mL于培養(yǎng)基中，涂抹均勻，備用；加等量的無(wú)菌水為對(duì)照組。

1.2.3 抑菌率的測(cè)定

分別接種串珠鐮刀菌和禾谷鐮刀菌于PDA培養(yǎng)基中，培養(yǎng)7～8天。采用打孔器于串珠鐮刀菌和禾谷鐮刀菌的菌落邊緣取直徑6mm的菌餅，置于平板中央，菌絲向下，于28℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。采用十字交叉法測(cè)量培養(yǎng)第4天、5天、6天的菌落直徑，并計(jì)算抑菌率。每個(gè)處理重復(fù)3次。

菌絲生長(zhǎng)抑制率（%）=[（對(duì)照菌落直徑—處理菌落直徑）∕（對(duì)照菌落直徑—菌餅直徑）]×100%。

2 結(jié)果與分析

2.1 生姜提取液對(duì)兩種植物病原菌生長(zhǎng)的抑制作用

從表1可知，隨著生姜提取液濃度的增加，菌絲抑制率增加，80%的生姜提取液對(duì)串珠鐮刀菌的抑制率最高，為75%；而100%的生姜提取液對(duì)串珠鐮刀菌的抑制率則有所下降，為67%；隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加，第5天、第6天測(cè)得的抑制率均比第4天的抑制率降低，可能是隨著時(shí)間的增加生姜提取液成分的生物活性有所下降。

從表2可知，隨著生姜提取液濃度的增加，菌絲抑制率出現(xiàn)先增加后下降的趨勢(shì)，40%的生姜提取液對(duì)串珠鐮刀菌的抑制率最高，為60%，80%、100%的生姜提取液對(duì)串珠鐮刀菌的抑制率分別降低為33%、25%；隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加，第5天、第6天測(cè)得的抑制率均比第4天的抑制率降低，

2.2 不同濃度生姜提取液對(duì)兩種鐮刀菌生長(zhǎng)抑制率的分析

對(duì)不同濃度下生姜提取液對(duì)培養(yǎng)第四天兩種鐮刀菌的的菌絲生長(zhǎng)抑制情況見圖1；對(duì)兩種鐮刀菌菌絲生長(zhǎng)抑制率比較分析見圖2。由圖2可知，生姜提取液對(duì)兩種鐮刀菌的菌絲抑制率隨著濃度的增加均表現(xiàn)出先升后降的趨勢(shì)，且生姜提取液對(duì)串珠鐮刀菌的抑制效果明顯高于禾谷鐮刀菌。

3 結(jié)論

已有研究表明生姜提取液對(duì)革蘭氏陰性菌大腸桿菌、革蘭氏陽(yáng)性菌金黃色葡萄球菌有較強(qiáng)的抑制作用，其抑菌活性隨著體積分?jǐn)?shù)升高而增強(qiáng)，并且生姜提取液具有較好的熱穩(wěn)定性[ 9 ]。高良生姜提取物對(duì)常見的病原菌、水產(chǎn)腐敗菌等8種細(xì)菌的具有一定的抑菌活性，抑菌效果強(qiáng)于山梨酸鉀、苯甲酸鈉，有望成為新一代綠色防腐劑[10]。而有關(guān)生姜提取液對(duì)于植物病原真菌的抑制作用研究較少。本研究表明，生姜提取液對(duì)串珠鐮刀菌和禾谷鐮刀菌具有一定的抑制作用，隨著生姜提取液濃度的增加，抑菌率出現(xiàn)先升后降的趨勢(shì)，對(duì)串珠鐮刀菌的最適抑菌生姜濃度為80%，對(duì)禾谷鐮刀菌的最適抑菌生姜濃度為40%；生姜提取液對(duì)兩種鐮刀菌的抑制效果比較而言，對(duì)串珠鐮刀菌的抑制效果明顯高于禾谷鐮刀菌。

生姜提取液對(duì)室內(nèi)培養(yǎng)的串珠鐮刀菌和禾谷鐮刀菌表現(xiàn)出較強(qiáng)的抑制作用，而生姜提取液的大田試驗(yàn)效果及生物活性物質(zhì)檢測(cè)與分析還有待進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)

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[2]王曉英，劉秀梅.串珠鐮刀菌伏馬菌素產(chǎn)毒株分子遺傳學(xué)研究進(jìn)展[J].衛(wèi)生研究，2005，34（2）：248-251.

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