朱術(shù)會(huì) 宿志民 孫新堂 王加才 （山東畜牧獸醫(yī)職業(yè)學(xué)院 山東 濰坊 261061）

試驗(yàn)研究

乙酰甲喹納米乳的制備及性狀考察

朱術(shù)會(huì) 宿志民 孫新堂 王加才 （山東畜牧獸醫(yī)職業(yè)學(xué)院 山東 濰坊 261061）

為方便乙酰甲喹的臨床使用，提高乙酰甲喹的生物利用度，本實(shí)驗(yàn)使用油相、表面活性劑、助表面活性劑和水制備了乙酰甲喹納米乳。結(jié)果顯示，乙酰甲喹納米乳為黃色澄明液體，粒徑區(qū)間在30～50nm，在稀釋試驗(yàn)和高速離心試驗(yàn)及長(zhǎng)期放置條件下，未見(jiàn)乳液分層、破乳和藥物析出現(xiàn)象，穩(wěn)定性較好。

乙酰甲喹 表面活性劑 納米乳 生物利用度

乙酰甲喹(Mequindox)又名痢菌凈[1]，為廣譜抗菌藥，對(duì)革蘭氏陰性菌作用強(qiáng)于陽(yáng)性菌，對(duì)密螺旋體作用較強(qiáng)，對(duì)仔豬黃痢、白痢、犢牛腹瀉，副傷寒、禽巴氏桿菌、雛雞白痢、雞大腸桿菌均有效，主用于密螺旋體所致豬痢疾及細(xì)菌性腸炎[2]。在臨床使用過(guò)程中發(fā)現(xiàn)禽類對(duì)該藥物較為敏感，尤其是雛雞如果不按要求使用，隨意加大劑量或長(zhǎng)期使用則會(huì)引起急性和蓄積中毒[3]。水溶性差是影響乙酰甲喹制劑發(fā)展和臨床應(yīng)用的一個(gè)關(guān)鍵因素[4,5]。目前，臨床中常用的乙酰甲喹型主要有注射劑、粉劑和溶液劑等。由于水溶性低，使其粉劑和溶液劑在動(dòng)物口服給藥中的應(yīng) 用和療效受到了很大限制，而其注射劑在使用時(shí)需多次重復(fù)給藥，對(duì)動(dòng)物應(yīng)激大，且注射給藥也增加了集約化養(yǎng)殖場(chǎng)的勞動(dòng)量，增加了飼養(yǎng)管理成本等。因此，研制新劑型對(duì)其臨床用藥具有重要的生產(chǎn)意義。

納米乳液(nanoemulsion)又稱微乳液(microemulsion)，是由水相、油相、表面活性劑和助表面活性劑組成的透明或半透明的均相分散體系，粒徑一般為1～100nm，具有熱力學(xué)穩(wěn)定性，可分為水包油(O/W)、油包水(W/O)以及雙連續(xù)(B.C)三種納米乳類型[6]。目前，納米乳化技術(shù)已滲透到醫(yī)藥、石油化工、食品及生物技術(shù)等領(lǐng)域。納米乳作為一種藥物載體具有緩釋和靶向作用，提高藥物載樣量，減少藥物體內(nèi)的酶解，同時(shí)降低藥液的黏度低，減少注射時(shí)的疼痛，還可以提高藥物的生物利用度[7]。納米乳制備大致可分為機(jī)械法和物理化學(xué)法兩大類。由于納米乳劑是非平衡體系，因此其形成過(guò)程中就需要外加能量，能量一般來(lái)自化學(xué)制劑的結(jié)構(gòu)潛能或者是來(lái)自機(jī)械設(shè)備的能力[8,9]。其中利用機(jī)械設(shè)備的能量，例如采用高壓均質(zhì)機(jī)、高速攪拌器和超聲波發(fā)生器等這類方法被稱作為高能乳化法；而利用結(jié)構(gòu)中的化學(xué)潛能的方法則通常被認(rèn)為是低能乳化法或濃縮法，通常這種方法需要添加表面活性劑或助表面活性劑[10,11]。

本研究從提高乙酰甲喹的生物利用度，減少其毒副作用，方便臨床使用為目的，采用低能乳化法，使用油相、表面活性劑、助表面活性劑和水制備乙酰甲喹納米乳，并對(duì)其性狀進(jìn)行考察。

1 材料與方法

1.1 材料 乙酰甲喹原料藥(濰坊亞康藥業(yè)有限公司)、電子天平(上海永琪儀器設(shè)備有限公司)、MYP11-2數(shù)顯恒溫磁力攪拌器(上海梅穎儀器有限公司)、透射電鏡粒徑分析儀(中國(guó)藥科大學(xué)分析測(cè)試中心)、萬(wàn)用電烤爐(上海永琪儀器設(shè)備有限公司)、酸度計(jì)(PHS-3C，上海越磁電子科技有限公司)、紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(Gold$53，上海華巖儀器設(shè)備有限公司)。

1.2 主要試劑 肉豆寇酸異丙酯(化學(xué)純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)、吐溫-80(tween-80，AR，天津大茂化學(xué)試劑廠)、聚氧乙烯(40)氫化蓖麻油(RH240，AR，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)、無(wú)水乙醇(AR，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)、PVP—K30(博愛(ài)新開(kāi)源制藥股份有限公司)、PBS(PH=7．0)、痢菌凈(注射級(jí)，山東天宇生物科技有限公司)、甲醇、二甲基甲酰胺(AR，天津大茂化學(xué)試劑有限公司)、鹽酸(AR，深圳市騰龍?jiān)磳?shí)業(yè)有限公司)。

2 制備方法及工藝優(yōu)化

2.1 乙酰甲喹納米乳制備 分別以吐溫-80、RH240為表面活性劑，無(wú)水乙醇、丙二醇為助表面活性劑，乙酸乙酯，肉豆寇酸異丙酯為油相。稱取乙酰甲喹用一定量的油相攪拌溶解完全，依次加入表面活性劑、助表面活性劑各組分，混合攪拌均勻，然后慢慢滴加蒸餾水并不斷攪拌，觀察體系由渾濁變?yōu)槌吻鍟r(shí)停止加水，此時(shí)體系即為納米乳溶液。

2.2 工藝優(yōu)化 采用單因素考察法，依次分別對(duì)油相、表面活性劑和助表面活性劑進(jìn)行考察，分別固定其中一項(xiàng)來(lái)考察體系中的其他成分對(duì)納米乳體系形成的影響，選擇最優(yōu)的制備工藝路線。

3 納米乳性質(zhì)考察

3.1 納米乳鑒別 取制備好的透明的納米乳，以6000r/min離心40min，觀察乳液是否分層或是否變渾濁。如果離心之后乳液仍保持透明則可以判定為納米乳。如若出現(xiàn)沉淀或混濁現(xiàn)象則說(shuō)明為非納米乳。

3.2 納米乳粒徑分析 用透射電鏡檢測(cè)納米乳的形態(tài)，取乙酰甲喹納米乳適量，用蒸餾水稀釋后滴在覆有支持膜的銅網(wǎng)上，靜置后用濾紙片吸干，滴加磷鎢酸溶液于銅網(wǎng)上負(fù)染，自然揮干，在電鏡下觀察納米乳液滴的形態(tài)及測(cè)定其粒徑大小。

3.3 納米乳稀釋考察 取本試驗(yàn)制備的納米乳分別進(jìn)行10倍、100倍、1000倍和10000倍稀釋，觀察有無(wú)沉淀和破乳現(xiàn)象產(chǎn)生。

3.4 納米乳穩(wěn)定性考察 取本研究制取的納米乳放置室溫條件下，分別于0、1、2、3、4、5、6個(gè)月時(shí)抽取一定量進(jìn)行外觀檢查有無(wú)沉淀混濁現(xiàn)象。

4 試驗(yàn)結(jié)果

4.1 制備乙酰甲喹納米乳油相、表面活性劑和助表面活性劑的優(yōu)化結(jié)果 本試驗(yàn)采用的低能乳化法制備了乙酰甲喹納米乳，該納米乳為黃色澄明溶液(見(jiàn)圖1)，在制備過(guò)程中油相具有溶解藥物的作用，表面活性劑和助表面活性劑能夠大幅度降低水的表面張力，有助于納米乳的形成。為了確保制備工藝穩(wěn)定，本試驗(yàn)分別對(duì)油相、表面活性劑和助表面活性劑的使用進(jìn)行了優(yōu)化，工藝優(yōu)化詳細(xì)見(jiàn)表1，從優(yōu)化結(jié)果來(lái)看本試驗(yàn)制備的納米乳的最佳油相、表面活性劑和助表面活性劑搭配分別為乙酸乙酯、吐溫-80和丙二醇；肉豆寇酸異丙酯、吐溫-80和丙二醇。

圖1 a空白微乳，b乙酰甲喹納米乳

表1 乙酰甲喹納米乳油相、表面活性劑和助表面活性劑優(yōu)化

4.2 納米乳性質(zhì)考察結(jié)果 （1）分別取以油相、表面活性劑和助表面活性劑搭配分別為乙酸乙酯、吐溫-80、丙二醇和肉豆寇酸異丙酯、吐溫-80、丙二醇制備的納米乳，以6000r/min離心40min后觀察，結(jié)果顯示納米乳無(wú)沉淀產(chǎn)生，顏色無(wú)變化，整個(gè)體系仍然為黃色澄清溶液，這說(shuō)明本實(shí)驗(yàn)形成的納米乳為均一穩(wěn)定的分散體，符合納米乳制劑。（2）將乙酰甲喹納米乳用蒸餾水稀釋后滴在覆有支持膜的銅網(wǎng)上，靜置后用濾紙片吸干，滴加磷鎢酸溶液于銅網(wǎng)上負(fù)染，自然揮干，在電鏡下觀察納米乳并測(cè)定納米乳的粒徑，結(jié)果顯示本實(shí)驗(yàn)制備的納米乳粒徑分布均一，粒徑分布在30～50nm，平均為40nm，電鏡觀察如圖2所示。

圖2 痢菌凈納米乳透射電鏡觀察

取本試驗(yàn)制備的納米乳用水進(jìn)行10倍、100倍、1000倍和10000倍稀釋，結(jié)果顯示納米乳無(wú)沉淀產(chǎn)生，能夠與水互溶無(wú)破乳藥物析出現(xiàn)象。在納米乳放置室溫條件下(25℃)，分別于0、1、2、3、4、5、6個(gè)月時(shí)抽取一定量進(jìn)行外觀檢查發(fā)現(xiàn)本試驗(yàn)制備的納米乳無(wú)沉淀，無(wú)混濁現(xiàn)象，外觀無(wú)明顯差異。這說(shuō)明本試驗(yàn)制備的納米乳具有較好的穩(wěn)定性，可以再常溫下長(zhǎng)時(shí)間放置。

5 結(jié)論

本試驗(yàn)采用的低能乳化法制備了乙酰甲喹納米乳并對(duì)油相、表面活性劑和助表面活性劑搭配進(jìn)行了優(yōu)化。納米乳經(jīng)過(guò)電鏡粒徑分析顯示，納米乳粒徑分布30～50nm，平均粒徑在40nm，經(jīng)過(guò)稀釋和穩(wěn)定性考察顯示本研究制備的納米乳能夠用水稀釋，長(zhǎng)時(shí)間放置無(wú)破乳、沉淀和藥物析出現(xiàn)象，這說(shuō)明本試驗(yàn)制備的乙酰甲喹納米乳性質(zhì)穩(wěn)定，符合納米乳的范疇，這為拓展乙酰甲喹臨床使用提供了新的劑型。

[1] 劉迎春, 高懷濤. 乙酰甲喹的合理應(yīng)用[J]. 養(yǎng)禽與禽病防治. 2009(3).

[2] Carbonyl Reduction of Mequindox by Chicken and Porcine Cytosol and Cloned Carbonyl Reductase 1; Xianqing Tang, Peiqiang Mu, Jun Wu, Jun Jiang, Caihui Zhang, Ming Zheng, and Yiqun Deng . Drug Metab. Dispos., Apr 2012; 40: 788 - 795.

[3] 宋冶萍, 朱術(shù)會(huì), 孫新堂等. 痢菌凈對(duì)雛雞的安全性試驗(yàn)[J]. 養(yǎng)禽與禽病防治. 2013(10).

[4] 劉迎春, 丁煥中, 劉義明等. 乙酰甲喹主要代謝物在雞糞的排泄量研究[J]. 畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2011(1).

[5] 劉桂蘭, 夏雪林, 仝玉慧等. 乙酰甲喹性質(zhì)、毒性與替代藥物[J].中國(guó)獸藥雜志. 2011(8).

[6] 陸彬. 納米乳與亞微乳給藥系統(tǒng)[J]. 中國(guó)藥師. 2004(10).

[7] 蔡霞, 呂竹芬, 陳燕忠. 納米乳在透皮給藥系統(tǒng)中的應(yīng)用概況[J].廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào). 2009(4).

[8] A Novel Surfactant Nanoemulsion with Broad-Spectrum Sporicidal Activity against Bacillus Species, Tarek Hamouda, Michael M. Hayes, Zhengyi Cao, Richard Tonda, Kent Johnson, D. Craig Wright. The Journal of Infectious Disease, Dec 1999; 180: 1939 - 1949.

[9] 崔晶, 翟光喜, 鄒滿. 微乳給藥系統(tǒng)的研究與應(yīng)用[J]. 食品與藥品. 2005(1).

[10] 公雯, 朱家壁. 納米乳的優(yōu)化方法與不穩(wěn)定機(jī)制的研究進(jìn)展[J].中國(guó)新藥雜志. 2010(12).

[11] Formulation and Characterization of Nanoemulsion of Olanzapine for Intranasal Delivery, Mukesh Kumar, Ambikanandan Misra, and Kamla Pathak, PDA J. Pharm. Sci. Technol., Nov 2009; 63: 501-511.

S859.79+4

A

1007-1733(2016)05-0001-03

2016–03–31）