何冠成，張旭紅，周露，程軒軒，潘育方，楊慧文

（廣東藥科大學(xué)藥學(xué)院，廣東廣州510006）

白簕粗多糖的脫色純化及其產(chǎn)物降糖活性研究

何冠成，張旭紅，周露，程軒軒，潘育方，楊慧文

（廣東藥科大學(xué)藥學(xué)院，廣東廣州510006）

【目的】探討白簕粗多糖的最優(yōu)脫色工藝條件參數(shù)，并考察脫色后多糖的降糖活性?！痉椒ā恳远嗵潜Ａ袈?、脫色率為指標(biāo)，比較AB-8、D-101、DM-301、HPD-600型大孔樹脂和聚酰胺樹脂的脫色效果，通過(guò)單因素考察與正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化靜態(tài)吸附脫色條件；并通過(guò)鏈脲霉素（STZ）誘導(dǎo)糖尿病小鼠模型考察脫色后多糖的降糖藥理活性?！窘Y(jié)果】HPD-600大孔樹脂的脫色效果最好，其最佳脫色條件為：多糖溶液pH=4.0，液固比為30∶1（mL/g），20℃時(shí)慢速振搖吸附4 h。最佳條件下，粗多糖的脫色率為（80.09±1.06）%，多糖保留率為（87.90±2.04）%。降糖藥理實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，脫色后白簕多糖對(duì)STZ誘導(dǎo)的糖尿病小鼠具有降血糖作用，多糖高劑量組小鼠的血糖抑制率達(dá)43.04%。【結(jié)論】該脫色工藝穩(wěn)定可靠，適用于白簕粗多糖的脫色純化，且脫色后多糖有一定的降血糖功效。

白簕/生產(chǎn)和工藝；粗多糖/分析；大孔樹脂；脫色；糖尿病/中藥療法；疾病模型，動(dòng)物；小鼠

白簕Acanthopanan trifoliatus（L.）Merr.，又稱三加皮、刺三加，為五加科植物，廣泛分布于長(zhǎng)江以南地區(qū)，廣東地區(qū)資源豐富。白簕味苦而甘辛涼，作為民間草藥和野蔬有著悠久的歷史，具有清熱解毒、祛風(fēng)利濕、舒筋活血、止咳平喘之功效[1]。白簕的化學(xué)成分有黃酮、三萜皂苷、色素、多糖等，近年來(lái)關(guān)于白簕中皂苷、黃酮、色素的提取和理化性質(zhì)研究常有報(bào)道[2-7]，但鮮有關(guān)于多糖的純化及藥理鑒定研究的報(bào)道。研究顯示，植物多糖具有抗腫瘤、增強(qiáng)免疫、抗衰老、抗病毒等作用[8]，而白簕中含有豐富的多糖。本實(shí)驗(yàn)室的前期研究已發(fā)現(xiàn)白簕粗多糖具有抗炎鎮(zhèn)痛[9]、抗疲勞[9]、降血糖[10]功效，若要得到作用效果更明確的多糖，尚須進(jìn)行粗多糖深加工。粗多糖含有色素，顏色較深，脫色是多糖提取純化過(guò)程中一個(gè)十分重要的環(huán)節(jié)[11]。本課題組就本實(shí)驗(yàn)室制備的棕褐色固體粗多糖進(jìn)行脫色研究，探討其最優(yōu)脫色工藝條件參數(shù)，并考察脫色后多糖的降糖活性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)藥物與試劑白簕莖經(jīng)廣東藥科大學(xué)中藥學(xué)院劉基柱副教授鑒定為五加屬植物白簕Acanthopanan trifoliatus（L.）Merr.的莖，標(biāo)本保存于廣東藥科大學(xué)中藥學(xué)院標(biāo)本室及恩平響山簕菜茶廠；AB-8、D-101、DM-301、HPD-600型大孔樹脂，聚酰胺樹脂（滄州寶恩吸附材料科技有限公司）；生理鹽水（500 mL，廣東艾希德藥業(yè)有限公司，批號(hào)：H15010106）；鏈脲佐菌素（STZ，上海晶純生化科技股份有限公司，批號(hào)45543）；二甲雙胍（石家莊市普力制藥有限公司，批號(hào)：1404031004）；檸檬酸、檸檬酸三鈉為分析純，購(gòu)自天津福晨化學(xué)試劑廠；苯酚、體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇、雙氧水、硫酸、鹽酸（HCl）及氫氧化鈉（NaOH）均為分析純，購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器FA1004型電子分析天平（上海良平儀器儀表有限公司）；KQ5200型超聲波清洗器（東莞市科橋超聲波設(shè)備有限責(zé)任公司）；XW-80A型微型渦旋混合儀（上海滬西分析儀器廠有限公司）；HY-2型調(diào)速多用振蕩器（常州金壇金城教學(xué)儀器廠）；HH-2型數(shù)顯恒溫水浴鍋（常州市澳華儀器有限公司）；LD4-2A型臺(tái)式離心機(jī)（北京京立離心機(jī)有限公司）；BGZ-30型電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海博迅實(shí)業(yè)有限公司）；721型紫外分光光度計(jì)（上海精密儀器有限公司）；安穩(wěn)型血糖儀（三諾生物傳感技術(shù)有限公司）。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物雄性KM小鼠60只，體質(zhì)量（20±2）g，SPF級(jí)，由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK（粵）2013-0020。

1.4 白簕粗多糖的制備白簕粗多糖按照文獻(xiàn)[9]的方法進(jìn)行制備富集。

1.5 樹脂的預(yù)處理及再生預(yù)處理：AB-8、D-101、DM-301及HPD-600型大孔樹脂，聚酰胺樹脂→體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇浸泡過(guò)夜→去離子水清洗至無(wú)醇味。再生：樹脂→50 g/L NaOH浸泡攪拌4 h→大量清水沖洗至接近中性→50 g/L HCl浸泡攪拌4 h→大量清水沖洗至接近中性→體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇浸泡12 h→大量清水沖洗至無(wú)醇味。

1.6 白簕粗多糖脫色工藝優(yōu)化

1.6.1 多糖保留率的測(cè)定按照苯酚—硫酸法[12]測(cè)定脫色前后的白簕多糖溶液多糖含量，按照以下公式計(jì)算多糖保留率[12]：p多糖保留率（%）=m脫色后多糖含量÷m脫色前多糖含量×100%。

1.6.2 多糖脫色率的測(cè)定對(duì)脫色前后的多糖溶液進(jìn)行200～800 nm范圍的全波長(zhǎng)掃描，結(jié)果表明溶液無(wú)最大吸收波長(zhǎng)。參考文獻(xiàn)[13]并利用互補(bǔ)色原理，確定以λ=450 nm為吸收波長(zhǎng)，測(cè)定多糖溶液脫色前后的吸光度（D），并按照以下公式計(jì)算脫色率[12]：p脫色率（%）=（D脫色前-D脫色后）÷D脫色前× 100%。其中，D脫色前和D脫色后分別為脫色前后多糖溶液的吸光度。

1.6.3 樹脂材料的篩選配制濃度為4 mg/mL的粗多糖溶液，量取該溶液35 mL和50 mL，加入4種型號(hào)大孔樹脂和聚酰胺樹脂各1 g，考察在2種不同溶液體積條件下不同樹脂的脫色效果；在室溫下振搖吸附10 h后取濾液，測(cè)定脫色率與多糖保留率，并根據(jù)這兩個(gè)指標(biāo)對(duì)不同樹脂進(jìn)行評(píng)價(jià)。

1.6.4 HPD-600大孔樹脂脫色法單因素實(shí)驗(yàn)以脫色率和多糖保留率為指標(biāo)，對(duì)HPD-600大孔樹脂脫色法的各個(gè)影響因素進(jìn)行考察，方法如下：

1.6.4.1 考察液固比（V∶m）對(duì)脫色效果的影響固定HPD-600樹脂用量為1 g，分別加入20、30、40、50、60 mL濃度為4 mg/mL的粗多糖溶液，室溫下振搖吸附10 h后，抽濾、取濾液，測(cè)定脫色率與多糖保留率，考察不同液固比對(duì)脫色效果的影響。

1.6.4.2 考察pH值對(duì)脫色效果的影響固定HPD-600樹脂用量為1 g，加入4 mg/mL粗多糖溶液30 mL，分別調(diào)整溶液pH值為3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0，室溫下振搖吸附10 h后，抽濾、取濾液，測(cè)定脫色率與多糖保留率，考察不同pH值對(duì)脫色效果的影響。

1.6.4.3 考察溫度對(duì)脫色效果的影響固定HPD-600樹脂用量為1 g，加入4 mg/mL粗多糖溶液30 mL，將pH值調(diào)整至4.0，分別在20、30、40、50、60℃時(shí)振搖吸附10 h后，抽濾、取濾液，測(cè)定脫色率與多糖保留率，考察不同溫度對(duì)脫色效果的影響。

1.6.4.4 考察吸附時(shí)間對(duì)脫色效果的影響固定HPD-600樹脂用量為1 g，加入4 mg/mL的粗多糖溶液30 mL，將pH值調(diào)整至4.0，30℃時(shí)振搖吸附，分別于第30、60、90、120、180、240、270、300、330及360 min時(shí)取少許上清液，抽濾后測(cè)定濾液吸光度，計(jì)算其脫色率，每組平行測(cè)定3次，考察不同吸附時(shí)間對(duì)脫色效果的影響。

1.6.5 正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)利用L9（34）正交設(shè)計(jì)表設(shè)計(jì)正交實(shí)驗(yàn)，以多糖保留率和脫色率作為指標(biāo)，綜合考察脫色時(shí)間、脫色溫度、脫色pH值以及液固比等4個(gè)因素對(duì)脫色效果的影響。采用加權(quán)評(píng)分法[14]對(duì)兩項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行綜合評(píng)分，把各項(xiàng)數(shù)值與該列最大值相除，再乘以100%得到該項(xiàng)得分；確定兩項(xiàng)指標(biāo)的權(quán)重系數(shù)：色素脫除率（X）權(quán)重系數(shù)為0.6、多糖保留率（Y）權(quán)重系數(shù)為0.4，對(duì)色素脫除率、多糖保留率兩項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行加權(quán)求和，綜合評(píng)分Z=0.6X+0.4Y，評(píng)分高者為最優(yōu)工藝。篩選最優(yōu)工藝實(shí)驗(yàn)因素及水平設(shè)計(jì)見表1，并對(duì)最優(yōu)工藝進(jìn)行重復(fù)性考察。

表1 正交試驗(yàn)因素與水平表Table 1Factors and levels of orthogonal test

1.7 白簕多糖對(duì)糖尿病小鼠降血糖效果

按照最優(yōu)脫色工藝制備多糖樣品，考察脫色后多糖的降糖效果。

1.7.1 糖尿病小鼠模型50只（20±2）g健康昆明（KM）小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d后，禁食不禁水12 h，腹腔注射150 mg/kg STZ，72 h后測(cè)定造模小鼠空腹血糖，以血糖濃度高于11.1 mmol/L為標(biāo)準(zhǔn)，選取造模成功的小鼠進(jìn)行降糖實(shí)驗(yàn)[15]。

1.7.2 實(shí)驗(yàn)分組將10只未造模的正常小鼠作為正常對(duì)照組；對(duì)已造模成功的高血糖小鼠進(jìn)行隨機(jī)分組：模型組、二甲雙胍組、白簕多糖低劑量組及白簕多糖高劑量組，每組10只，用苦味酸進(jìn)行編號(hào)標(biāo)記。其中多糖低、高劑量組分別給予小鼠灌胃100 mg·kg-1·d-1、200 mg·kg-1·d-1脫色后多糖，二甲雙胍組給予小鼠灌胃125 mg·kg-1·d-1二甲雙胍，正常對(duì)照組及模型組灌胃等體積生理鹽水，連續(xù)給藥14 d。于灌胃最后1 d禁食12 h測(cè)定空腹血糖及體質(zhì)量，分析脫色后的白簕多糖對(duì)STZ誘導(dǎo)糖尿病小鼠的降糖效果。

1.8 統(tǒng)計(jì)方法采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，多組間比較采用單因素方差分析，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 樹脂材料的篩選將4種大孔樹脂和聚酰胺樹脂材料按照1.6.3項(xiàng)方法進(jìn)行白簕粗多糖溶液的脫色處理，計(jì)算脫色后的多糖保留率和脫色率。表2結(jié)果顯示，在實(shí)驗(yàn)條件下，HPD-600大孔樹脂與其他樹脂材料比較具有較優(yōu)的多糖保留率與脫色率。因此，我們選用HPD-600大孔樹脂作為脫色劑進(jìn)行脫色工藝的優(yōu)化。

表2 不同大孔樹脂脫色結(jié)果Table 2Comparison of decoloration results of various macroporous resinsp/%

2.2 單因素實(shí)驗(yàn)考察結(jié)果

2.2.1 不同液固比考察結(jié)果固定其他脫色條件，分別加入20、30、40、50、60 mL多糖溶液，測(cè)定計(jì)算多糖保留率和脫色率，結(jié)果見圖1。由圖中數(shù)據(jù)可知，隨著液固比增加，脫色率持續(xù)下降，其主要原因可能是大孔樹脂的吸附以物理吸附為主，存在吸附飽和的現(xiàn)象，而溶液用量越多，越易達(dá)到飽和，因此吸附脫色效果就越差；相反，多糖保留率隨液固比增加而逐漸上升。綜合考慮多糖保留率與脫色率，選擇液固比為30∶1，該比例有利于后期濃縮。

圖1 不同液固比對(duì)脫色效果的影響Figure 1 Effect of ratios of liquid to solid on decoloration results

2.2.2 脫色pH值考察結(jié)果固定其他脫色條件，將多糖溶液pH值分別調(diào)至3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0，測(cè)定多糖保留率和脫色率，結(jié)果見圖2。結(jié)果表明，隨著pH值增大，多糖脫色率明顯下降，多糖保留率開始略有上升，隨后即下降，綜合考慮選擇pH=4.0最優(yōu)。

2.2.3 脫色溫度考察結(jié)果固定其他脫色條件，考察脫色溫度分別為20、30、40、50、60℃時(shí)的多糖保留率與脫色率，結(jié)果見圖3。圖3表明，隨著溫度升高，脫色率有所下降，且溫度在40℃以上時(shí)，脫色率下降明顯，其原因可能為溫度過(guò)高時(shí)，色素的吸附也加快，導(dǎo)致脫色率下降[16]。根據(jù)結(jié)果綜合考慮，選擇30℃為最優(yōu)吸附溫度。

圖2 不同pH值對(duì)脫色效果的影響Figure 2Effect of pH values on decoloration results

圖3 不同溫度對(duì)脫色效果的影響Figure 3Effect of temperatures on decoloration results

圖4 不同脫色時(shí)間對(duì)脫色效果的影響Figure 4Effect of decoloration time on decoloration results

2.2.4 脫色時(shí)間考察結(jié)果固定其他脫色條件，考察脫色時(shí)間分別為30、60、90、120、180、240、270、300、330及360 min的脫色率，結(jié)果見圖4。圖4表明，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，脫色率逐漸增加，當(dāng)吸附時(shí)間達(dá)到300 min時(shí)，脫色率基本不變，吸附基本趨于穩(wěn)定，達(dá)到飽和。為了節(jié)約成本和資源，最終選擇5 h作為吸附時(shí)間。

2.3 正交實(shí)驗(yàn)按1.6.5正交實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表3、4所示。從表3的極差結(jié)果可得出各因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響的主次順序：溶液pH值＞液固比＞反應(yīng)溫度＞反應(yīng)時(shí)間；表4的方差分析結(jié)果顯示，脫色溶液的pH值與液固比對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有顯著影響（P＜0.05），時(shí)間和溫度影響則不顯著（P＞0.05），從經(jīng)濟(jì)效益的角度出發(fā)，選擇其最短時(shí)間和最低溫度。因此，最優(yōu)組合為A1B1C1D1，最優(yōu)工藝即為：30 mL多糖溶液中加入1 g HPD-600大孔樹脂，調(diào)整pH值為4.0，在20℃時(shí)振搖吸附4 h。

表3 L9（34）正交試驗(yàn)結(jié)果表Table 3L9（34）orthogonal test

表4 正交優(yōu)化大孔樹脂脫色效果工藝方差分析表Table 4Variation analysis for the decoloration results of various macroporous resins optimized by orthogonal test

2.4 工藝驗(yàn)證按照正交結(jié)果最優(yōu)方案，稱取HPD-600大孔樹脂1 g，加入4 mg/mL多糖溶液30 mL，調(diào)整pH值為4.0，20℃吸附4 h后抽濾，收集濾液，測(cè)定脫色率和多糖保留率，做5次重復(fù)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，結(jié)果脫色率為（80.09±1.06）%，多糖保留率為（87.90±2.04）%，實(shí)驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定。

2.5 藥理實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.5.1 小鼠一般狀況與體質(zhì)量造模成功的糖尿病小鼠有明顯的“三多一少”癥狀，給藥14 d后，二甲雙胍組和白簕多糖各劑量組的“三多”癥狀均有所減輕。分別記錄給藥前后小鼠的體質(zhì)量，進(jìn)行比較分析，結(jié)果見圖5。圖5結(jié)果顯示，與給藥前比較，正常對(duì)照組小鼠體質(zhì)量明顯增加，模型組與各治療組小鼠體質(zhì)量基本維持不變（P＞0.05），表明在實(shí)驗(yàn)時(shí)間內(nèi)治療藥物對(duì)體質(zhì)量影響不大。

圖5 各組小鼠體質(zhì)量變化Figure 5Comparison of mice body mass in various groups

2.5.2 對(duì)小鼠血糖影響各組小鼠給藥前后空腹血糖（FBG）測(cè)定結(jié)果見表5。表5結(jié)果顯示：STZ造模后，小鼠血糖顯著升高，實(shí)驗(yàn)期間模型組小鼠FBG穩(wěn)定，證明該模型較為可靠。給藥14 d后，各給藥組小鼠FBG均顯著降低，與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。與給藥前FBG比較，各劑量白簕多糖均可顯著降低小鼠FBG（P＜0.05或P＜0.01）；給藥14 d后，高劑量組的血糖抑制率達(dá)43.04%。

表5 各組小鼠血糖測(cè)定結(jié)果Table 5Comparison of mice blood glucose levels in various groups

3 討論

多糖是一類重要的分子量較大的生物活性物質(zhì)[17]，黏度較大且水溶性較小，純化的天然多糖一般為白色，但由于多糖的來(lái)源不同以及提取方法的缺陷，再加上來(lái)源植物組織成分的復(fù)雜性，提取得到的往往是含有一些色素雜質(zhì)的粗多糖，呈棕褐色，這對(duì)多糖的定性定量分析等均存在較大影響；另外，有些粗多糖的有色小分子物質(zhì)可能會(huì)發(fā)生轉(zhuǎn)化，對(duì)后續(xù)測(cè)定結(jié)果進(jìn)一步產(chǎn)生影響。因此，本課題組著眼于大孔樹脂法對(duì)白簕多糖中色素的脫除工藝研究，并優(yōu)化該工藝條件。

目前，去除粗多糖中的色素主要采用大孔樹脂吸附法、活性炭吸附法及雙氧水氧化脫色等方法[18]。前期預(yù)實(shí)驗(yàn)比較了后2種脫色法，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：采用活性炭法脫色存在活性炭粉難以除盡的問(wèn)題，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響較大；采用雙氧水氧化法進(jìn)行脫色，雖然脫色率較高，但是多糖保留率偏低，可能是由于雙氧水有較強(qiáng)的氧化性，大量多糖被破壞所致，故本課題組未采用這兩種常用的脫色法。我們對(duì)5種不同樹脂材料的脫色效果進(jìn)行考察，發(fā)現(xiàn)HPD-600大孔樹脂脫色效果較好，該法脫色率高且多糖損失較少，是較理想的白簕多糖色素脫色方法。通過(guò)正交試驗(yàn)優(yōu)化HPD-600大孔樹脂靜態(tài)脫色工藝，最佳工藝條件為30 mL多糖溶液中加入1 g HPD-600大孔樹脂，調(diào)整pH值為4.0，在20℃振搖吸附4 h。并對(duì)該條件下脫色得到的白簕多糖進(jìn)行了降糖活性研究。通過(guò)建立STZ誘導(dǎo)糖尿病小鼠模型，測(cè)定給藥前后小鼠FBG的變化，結(jié)果顯示與模型組比較，各白簕多糖劑量組小鼠FBG均明顯降低，F(xiàn)BG抑制率達(dá)40%左右，提示脫色后白簕多糖具有較好的降糖活性。本研究已確定白簕粗多糖最優(yōu)脫色工藝參數(shù)，并驗(yàn)證了脫色后多糖的降糖活性。在本實(shí)驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上，今后可進(jìn)一步開展對(duì)白簕多糖活性部位的探討及其降糖作用機(jī)制的研究。

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【責(zé)任編輯：黃玲，侯麗穎】

Decoloration and Purification of Crude Polysaccharides from Acanthopanan trifoliatus（L.）Merr.and Hypoglycemic Activities of Its Products

HE Guancheng，ZHANG Xuhong，ZHOU Lu，CHENG Xuanxuan，PAN Yufang，YANG Huiwen
（School ofPharmacy，GuangdongPharmaceutical University，Guangzhou 510006 Guangdong，China）

ObjectiveTo study the optimum decoloration technological conditions of crude polysaccharides from A canthopanan trifoliatus（L.）Merr.and hypoglycemic activities of its products.MethodsWith the decolorization rate and retention rate as indexes，we compared the decoloration results among AB-8，D-101，DM-301，HPD-600 macroporous resins and polyamide resin.And then we optimized the static absorption and decolorationprocedure by single-factor investigation and orthogonal test.In addition，we applied the streptozotocin-induced hyperglycemia mice to study the hypoglycemic activities of the decolored crude polysaccharides.ResultsHPD-600 macroporous resin was chosen as the optimal resin.The optimum decoloration technological conditions were as follows：Polysaccharide solution pH value was 4.0；Ratio of liquid to solid was 30∶1（mL/g）；Shaking slowly and adsorbing lasted for 4 hours at 20℃.Under the optimal conditions，decolorization rate and retention rate were（80.09±1.06）%and（87.90±2.04）%respectively.The results of the pharmacological experiment showed that decolorized polysaccharides from Acanthopanan trifoliatus（L.）Merr.were able to lower the blood glucose of hyperglycemia mice induced by streptozotocin.The blood glucose inhibition ratio reached to 43.04%in the group of high-dose polysaccharide.ConclusionThe bleaching process is stable and feasible，and can be used for the purification of crude polysaccharides from Acanthopanan trifoliatus（L.）Merr..And the crude polysaccharides after decoloration can lower blood glucose in our experitment.

Acanthopanan trifoliatus（L.）Merr./production＆preparation；crude polysaccharides/analysis；macroporous resin；decoloration；diabetes mellitus/TCD therapy；disease models，animal；mice

R285.5

A

1007-3213（2016）06-0840-06

10.13359/j.cnki.gzxbtcm.2016.06.020

2016-03-08

何冠成（1993-），男，本科生；E-mail：howardhe1017@163.com

楊慧文（1983-），女，高級(jí)實(shí)驗(yàn)師；E-mail：halley_yang@hotmail.com

廣東省建設(shè)中醫(yī)藥強(qiáng)省科研課題（編號(hào)：20151267，粵中醫(yī)[2015]11號(hào)）；廣東藥科大學(xué)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃—?jiǎng)?chuàng)新訓(xùn)練項(xiàng)目（編號(hào)：201510573044）