鮑禮智，郭志福，沈 明，李 然，陳 挺，余云華，趙仙先，鄭 興

(第二軍醫(yī)大學(xué)附屬上海長(zhǎng)海醫(yī)院心血管內(nèi)科，上海 200433)

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技術(shù)方法

新型實(shí)驗(yàn)大鼠尾靜脈穿刺用途四聯(lián)固定器的設(shè)計(jì)及其效用評(píng)價(jià)

鮑禮智，郭志福，沈 明，李 然，陳 挺，余云華，趙仙先，鄭 興

(第二軍醫(yī)大學(xué)附屬上海長(zhǎng)海醫(yī)院心血管內(nèi)科，上海 200433)

目的改進(jìn)清醒大鼠固定技術(shù)，提高成組實(shí)驗(yàn)大鼠尾靜脈穿刺效率。方法采用聚苯乙烯、聚氯乙烯材料自制四聯(lián)大鼠固定器。40只成年雄性SD大鼠(262±15 g)隨機(jī)分成A、B兩組，每組20只，A組使用自制四聯(lián)固定器，B組使用市售有機(jī)玻璃大鼠固定器。在清醒狀態(tài)下由單人操作行尾靜脈穿刺并注射生理鹽水200 μL，完成大鼠固定、尾靜脈水浴加溫、穿刺注射、壓迫止血的全過程。觀察并記錄穿刺時(shí)間、總操作時(shí)間、大鼠躁動(dòng)次數(shù)等指標(biāo)。結(jié)果A組一次穿刺成功率80%，穿刺時(shí)間(9.25±3.70)s，總操作時(shí)間(47.05±4.65)s，大鼠躁動(dòng)次數(shù)(1.4±0.8)次；B組一次穿刺成功率85%，穿刺時(shí)間(9.95±4.38)s，總操作時(shí)間(122.45±7.71)s，大鼠躁動(dòng)次數(shù)(2.5±1.2)次。結(jié)論自制四聯(lián)大鼠固定器結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，使用方便，明顯縮短尾靜脈穿刺點(diǎn)操作時(shí)間，提高了大鼠配合度及穿刺操作效率，是一種安全有效的設(shè)計(jì)。

大鼠；尾靜脈穿刺；固定裝置；方法

在大鼠實(shí)驗(yàn)中，尾靜脈穿刺采血或注射是常用的方法，具有損傷小、應(yīng)激反應(yīng)少、短期內(nèi)可多次重復(fù)等優(yōu)勢(shì)。為了減少對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的影響和方便實(shí)驗(yàn)人員的操作，一般需要保持大鼠的清醒狀態(tài)并將其固定良好，將鼠尾引出后進(jìn)行穿刺操作。目前市場(chǎng)上的大鼠固定器大多是有機(jī)玻璃或不銹鋼材質(zhì)制成，單體結(jié)構(gòu)，固定位點(diǎn)較多，每次實(shí)驗(yàn)都要重復(fù)同樣的固定操作，增加了操作人員的勞動(dòng)強(qiáng)度，也浪費(fèi)了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。筆者根據(jù)大鼠自身習(xí)性，設(shè)計(jì)了一種簡(jiǎn)單易操作的新型四聯(lián)固定裝置，通過應(yīng)用這種裝置進(jìn)行尾靜脈穿刺操作，可以滿足成組大鼠實(shí)驗(yàn)中快速、批量、安全、妥當(dāng)?shù)奈察o脈穿刺要求，使操作步驟更加流暢。

1 材料和方法

1.1 大鼠固定裝置的設(shè)計(jì)

注：1：固定盒；2：納鼠筒；3：遮光蓋；4：加溫瓶；5：鼠尾引出槽；6：固定件；7：卡箍；8：EP管凹槽。

本實(shí)驗(yàn)所涉及的大鼠固定裝置，由固定盒、四個(gè)周徑可調(diào)式納鼠筒、固定件和加溫瓶組成，固定盒采用聚丙乙烯泡沫材料，為上端開口的中空長(zhǎng)方體結(jié)構(gòu)(附帶遮光作用的蓋子)；納鼠筒為后端開口的中空結(jié)構(gòu)，前段呈圓錐狀設(shè)有多個(gè)圓形通氣孔，后段呈圓柱狀。納鼠筒兩兩上下對(duì)齊，后端開口朝向一致地設(shè)置于固定盒內(nèi)部，納鼠筒后端與固定盒側(cè)壁相抵、前端通過固定件可拆卸地固定在固定盒內(nèi)部。固定盒的側(cè)壁、對(duì)應(yīng)成對(duì)納鼠筒后端開口的中間位置設(shè)有鼠尾引出槽，僅將鼠尾暴露在固定盒外供實(shí)驗(yàn)者操作，既保證了安全，又排除了干擾，提高了穿刺效率。加溫瓶設(shè)置于固定盒開有鼠尾引出槽的側(cè)壁的外側(cè)。固定盒開設(shè)鼠尾引出槽的側(cè)壁上沿設(shè)置有若干凹槽，可以用于放置1～2 mL體積的注射藥物容器，例如EP管。納鼠筒外側(cè)套有卡箍、通過卡箍的縮放調(diào)節(jié)納鼠筒的大小。固定件為兩根通過螺紋連接的內(nèi)套管和外套管，內(nèi)套管一端固定在納鼠筒的前端，外套管通過旋轉(zhuǎn)伸縮與固定盒側(cè)壁相抵。固定件還可以采用簡(jiǎn)單的合適大小的聚苯乙烯材料方塊或壓縮彈簧(圖1)。

1.2 大鼠尾靜脈穿刺注射方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象及分組

10～12周SPF級(jí)雄性成年SD大鼠40只，體重260±15 g，均購(gòu)自上海西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司【SCXK(滬)2013-0016】。所有操作均在第二軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心小動(dòng)物屏障實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行【SYXK(滬)2012-0003】，并按實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用的3R原則給予人道的關(guān)懷。適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，隨機(jī)分成A、B兩組，每組20只，A組使用上述自制四聯(lián)固定器，B組使用市售有機(jī)玻璃大鼠固定器(編號(hào)YXGDJ，購(gòu)自上海元象醫(yī)療器械有限公司)(圖2)。1.2.2 穿刺及尾靜脈注射步驟

在大鼠清醒狀態(tài)下實(shí)驗(yàn)人員單人操作，采用29G注射器(舒銳牌一次性使用無菌胰島素注射器，美國(guó)BD公司生產(chǎn))行尾靜脈穿刺并注射生理鹽水200 uL，完成大鼠固定、尾靜脈45℃水浴加溫(30 s)、左側(cè)尾靜脈消毒穿刺注射、無菌紗布?jí)浩戎寡?60 s)的全過程。

1.2.3 觀察指標(biāo)

穿刺時(shí)間：從針尖刺入皮膚到可見回血的時(shí)間；操作時(shí)間：從捕捉大鼠到放回鼠籠的時(shí)間；大鼠躁動(dòng)次數(shù)：操作過程中大鼠出現(xiàn)尖叫、尾巴發(fā)生矢狀面位移大于2 cm或冠狀面軸向扭動(dòng)大于90度的次數(shù)。1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

圖2 市售單體大鼠固定器Fig.2 Saled single fixture made of organic glass

2 結(jié)果

穿刺時(shí)間：A組一次穿刺成功率80%，穿刺時(shí)間(9.25±3.70)s，總操作時(shí)間(47.05±4.65)s，大鼠躁動(dòng)次數(shù)(1.4±0.8)次；B組一次穿刺成功率85%，穿刺時(shí)間(9.95±4.38)s，總操作時(shí)間(122.45±7.71)s，大鼠躁動(dòng)次數(shù)(2.5±1.2)次。一次穿刺成功率和穿刺時(shí)間兩組間比較無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，躁動(dòng)次數(shù)和總操作時(shí)間A組明顯低于B組，統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著(P<0.01)。

3 討論

大鼠尾靜脈穿刺是動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中靜脈注射給藥和采血的常用方法[1-3]。固定牢靠、配合良好、操作流暢是穿刺順利的基本條件。目前市售及文獻(xiàn)報(bào)道[4-7]的大鼠固定器多為單體結(jié)構(gòu)，存在固定節(jié)點(diǎn)多、操作步驟繁瑣等不足，普遍重視固定牢靠而忽略實(shí)驗(yàn)者的操作體驗(yàn)。大鼠尾靜脈主要有3條，分別位于背側(cè)和左右兩側(cè)[8-9]，穿刺前水浴加溫有利于提高穿刺成功率，穿刺后局部壓迫有利于保護(hù)血管。本研究自制的四聯(lián)固定器，納鼠筒大小及松緊度通過卡箍來調(diào)節(jié)，采用圓形設(shè)計(jì)便于穿刺時(shí)根據(jù)選取的靜脈位置旋轉(zhuǎn)微調(diào)，避免操作中鼠尾擰扭，使大鼠的體位更舒適，更配合穿刺操作。四聯(lián)結(jié)構(gòu)有利于集中進(jìn)行鼠尾加溫、靜脈穿刺，穿刺結(jié)束可用無菌紗布覆蓋穿刺部位并卡壓在鼠尾引出槽中，起到壓迫止血、防止藥物回滲等作用，極大地縮短了操作時(shí)間，簡(jiǎn)化了操作流程，同時(shí)利用大鼠群居優(yōu)勢(shì)和喜暗特性，采用四聯(lián)結(jié)構(gòu)和遮光設(shè)計(jì)，進(jìn)一步提升了大鼠的配合度,從而更大程度減少固定及穿刺操作帶來的應(yīng)激反應(yīng)[10]。本實(shí)驗(yàn)以尾靜脈注射為效用評(píng)價(jià)對(duì)象，同樣用于尾靜脈穿刺采血亦十分便捷，有文獻(xiàn)報(bào)道單次最多可采集到1.5 mL血液[3]。

總之，通過對(duì)總操作時(shí)間及大鼠配合度的比較，證實(shí)了自制尾靜脈穿刺用途四聯(lián)固定器的優(yōu)化作用，有利于降低穿刺注射的操作強(qiáng)度，提高效率，在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)操作中有較好的應(yīng)用價(jià)值。

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A four combined holder for tail vein puncture in conscious rats: design, construction and feasibility testing

BAO Li-zhi, GUO Zhi-fu, SHEN Ming, LI Ran, CHEN Ting, YU Yun-hua, ZHAO Xian-xian, ZHENG Xing.

(Department of Cardiology, Changhai Hospital, Shanghai 200433,China)

Objective To improve fixation methods and tail vein puncture efficiency in conscious rats group． Methods A new four combined holder was designed and made of materials of polystyrene and Polyvinyl chloride.SD rats were randomly divided into A group and B group，twenty rats in each group．Rats in group A fixed by a self-made four combined holder,and rats in group B fixed by common fixture made of organic glass which was commercially available．Then the tail vein injection experiment was conducted respectively by one people． Results It took (9.25±3.70) seconds in group A and(9.95±4.38)seconds in group B to finish the experiment from puncture to see blood return in syringe，and took(47.05±4.65)seconds in group A and(122.45±7.71)seconds in group B to finish the experiment from capture to finish the injection. Futhermore,it was observed(1.4±0.8)times in group A and(2.5±1.2)times in group B with agitation. Conclusions The new four combined rat holder has simple structure, being easy to use, which could significantly shorten the tail vein puncture time and improve the efficiency of the cooperation degree of rats and puncture operation.

Rat；Tail vein puncture；Fixtures；Method

國(guó)家自然科學(xué)基金(81470517)。

鮑禮智(1980-)，男，博士生，研究方向：分子心臟病學(xué)研究。

郭志福(1978-)，男，副教授，研究方向：心血管活性多肽研究，E-mail： guozhifu@126.com；鄭興(1957-)，男，教授，研究方向：分子心臟病學(xué)研究，E-mail： zhengxing57530@163.com。

R-332

A

1671-7856(2016)11-0077-04

10.3969.j.issn.1671-7856. 2016.11.014

2016-07-10