李進(jìn) 張隆隆 劉宇華 黃曉君 周建湘（廣東福壽仙生物科技有限公司，廣東 廣州 510470）

以金納米簇為熒光探針測(cè)定產(chǎn)品中微量硒

李進(jìn) 張隆隆 劉宇華 黃曉君 周建湘（廣東福壽仙生物科技有限公司，廣東 廣州 510470）

合成了雞蛋白蛋白（CEA）保護(hù)的水溶性金納米簇（CEA-AuNCs），研究了硒對(duì)金納米簇?zé)晒忖绲挠绊?，確定了最優(yōu)分析條件。在最佳實(shí)驗(yàn)條件下,硒在0.5-10μg/g范圍時(shí),金納米簇的熒光猝滅程度與硒濃度呈線性關(guān)系,線性回歸方程為:F0/F=0.05910C+1.0021,線性相關(guān)系數(shù)為0.9992。對(duì)5個(gè)樣品進(jìn)行了測(cè)定,5次測(cè)定值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差＜4%,加標(biāo)回收率在94%-106%范圍內(nèi)。

中草藥；化妝品；硒；金納米簇；熒光探針

硒是一種人體必需的準(zhǔn)金屬微量元素，但硒化物對(duì)皮膚有強(qiáng)烈的刺激性，造成紅斑、水瘡或潰瘍。氧化硒會(huì)引起皮膚劇痛和麻木，經(jīng)吸收會(huì)造成內(nèi)臟中毒。因此,硒的定量檢測(cè)具有重要意義。金納米簇的優(yōu)異熒光特性，引起分析化學(xué)的廣泛關(guān)注。本文利用硒對(duì)金納米簇?zé)晒忖缣匦?，建立了硒的分析新方法?/p>

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

F-4500型熒光分光光度計(jì)(日本日立公司)。雞蛋白蛋白（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司);氯金酸(湖南試劑廠);硒標(biāo)準(zhǔn)使用液[ρ(Se)=1.0μg/ml]:將硒標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液逐級(jí)稀釋成硒標(biāo)準(zhǔn)使用溶液。其他輔助試劑均為分析純。實(shí)驗(yàn)用水為二次去離子水。

1.2 金納米簇的制備

取10mL氯金酸溶液(10 mmol/L，37℃)加入到10mL雞蛋白蛋白溶液(50 mg/mL，37℃)中攪拌混勻，2分鐘之后，加入1mL 1mol/L的NaOH溶液，然后將混合液置于37℃水浴中連續(xù)攪拌20個(gè)小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，得到棕色溶液，所制備的金納米簇置于冰箱（4℃）避光儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 硒含量的測(cè)定

依次向5mL比色管中加入0.2mL金納米簇、0.5mL硒稀釋溶液和2mL pH 5.9的磷酸二氫鉀-磷酸氫二鈉緩沖液(PBS),用水定容,混勻。在30℃水浴中反應(yīng)15min,以520nm為激發(fā)波長(zhǎng),測(cè)定其熒光強(qiáng)度(F),按同樣的方法測(cè)定試劑空白的熒光強(qiáng)度(F0)。

2 結(jié)果與討論

2.1 反應(yīng)時(shí)間和反應(yīng)溫度的選擇

向金納米簇溶液中加入10μg/mL的硒溶液時(shí),體系熒光強(qiáng)度迅速下降,5min后基本達(dá)到穩(wěn)定,并在60min內(nèi)不變。在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中,反應(yīng)時(shí)間定為10min。因此可以實(shí)現(xiàn)對(duì)硒的快速檢測(cè)。研究了溫度對(duì)反應(yīng)體系的影響。實(shí)驗(yàn)表明,在30℃左右時(shí)反應(yīng)迅速,重現(xiàn)性好。因此,后續(xù)實(shí)驗(yàn)均在30℃水浴中進(jìn)行。

2.2 緩沖體系pH值和濃度的選擇

研究考察了不同pH值（4.5-8.0）的PBS緩沖溶液對(duì)反應(yīng)體系相對(duì)熒光的影響，結(jié)果表明,在

p H 5.0-6.5時(shí),硒溶液對(duì)金納米簇的熒光猝滅程度隨p H的增大而增大;當(dāng)pH為6.5時(shí),反應(yīng)體系的熒光猝滅程度最大,并且穩(wěn)定。當(dāng)pH＞6.5時(shí),熒光猝滅程度隨p H升高反而降低。后續(xù)實(shí)驗(yàn)均在pH為6.5的體系中進(jìn)行。

2.3 分析特性

研究了硒濃度對(duì)金納米簇?zé)晒獾拟缜闆r,在0.5-10μg/g范圍時(shí)，體系熒光猝滅程度與硒濃度呈線性關(guān)系,其線性回歸方程為F0/F=0.05910C+1.0021，相關(guān)系數(shù)為0.9968,檢測(cè)限為0.1μg/g,能滿足化妝品中硒的測(cè)定要求。

2.4 產(chǎn)品中微量硒的測(cè)定

稱取中草藥、化妝品試樣1-2g置于消化管中，加入10mL硝酸由低溫至高溫加熱消解，當(dāng)消解液體積減少到2 mL-3 mL,移去熱源,冷卻。加入高氯酸繼續(xù)加熱消解,不時(shí)緩緩搖動(dòng)使均勻,消解至冒白煙，取下。稍冷后加入鹽酸4 mL繼續(xù)加熱至產(chǎn)生白煙，立即取下，并用水定容，取得待測(cè)溶液。

按前面所述測(cè)定方法對(duì)硒含量及回收率測(cè)定，測(cè)定3種中草藥和2種市售化妝品，并每個(gè)樣平行測(cè)定5次，5次測(cè)定值的值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差小于4%,加標(biāo)回收率在94%-106%范圍內(nèi),表明該法的準(zhǔn)確性和精密度均較高,可用于硒的定量分析。

表1 樣品中硒含量測(cè)定

3 結(jié)語

本文基于硒對(duì)金納米簇?zé)晒鈴?qiáng)度的猝滅，建立了微量硒測(cè)定的新方法。具有靈敏度高、檢出限低、方法快速簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)，適于實(shí)際應(yīng)用中測(cè)定中草藥、化妝品的硒含量。

李進(jìn)（1987-），男，碩士學(xué)歷，湖南益陽人。