程斌，周愛(ài)珍，凌慶枝

1.浙江醫(yī)藥高等專(zhuān)科學(xué)校，浙江 寧波 325035；2.浙江中醫(yī)藥大學(xué)，浙江 杭州 310053

浙產(chǎn)女貞子中紅景天苷含量動(dòng)態(tài)變化及區(qū)域差異性研究

程斌1，2，周愛(ài)珍1，凌慶枝1

1.浙江醫(yī)藥高等專(zhuān)科學(xué)校，浙江 寧波 325035；2.浙江中醫(yī)藥大學(xué)，浙江 杭州 310053

目的 采用高效液相色譜法測(cè)定不同生長(zhǎng)期、不同區(qū)域浙產(chǎn)女貞子中的紅景天苷含量，為更合理、有效地從女貞子中提取紅景天苷提供依據(jù)。方法 色譜柱：Kromasil C18（4.6 mm×150 mm, 5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-水（10∶90）；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：220 nm；柱溫：室溫；進(jìn)樣量：20 μL。結(jié)果 紅景天苷在0.71～3.55 μg范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系（r＝0.999 4）；加樣回收率在95.6%～98.6%之間，平均加樣回收率為96.88%，RSD＝1.32%（n＝5）。結(jié)論 紅景天苷在女貞子中的含量隨生長(zhǎng)期延長(zhǎng)逐漸下降，不同區(qū)域、不同采收期女貞子中紅景天苷的含量不同。

女貞子；紅景天苷；含量變化；區(qū)域差異；浙江

紅景天苷是景天科紅景天屬植物的主要有效成分之一，具有抗缺氧、保護(hù)心腦血管、抗肝纖維化等多種藥理作用，作為藥品、保健食品的原料得到廣泛開(kāi)發(fā)應(yīng)用，但天然紅景天植物資源逐漸匱乏，導(dǎo)致紅景天苷價(jià)格昂貴，已成為其進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用的瓶頸。女貞子為木犀科植物女貞Ligustrum Lucidum Ait.的干燥成熟果實(shí)，主產(chǎn)于浙江、江蘇、安徽等地，為臨床常用補(bǔ)虛藥，味甘、苦，性涼，歸肝、腎經(jīng)，具有滋補(bǔ)肝腎、明目烏發(fā)功效，常用于治療肝腎陰虛引起的目暗不明、視力減退、須發(fā)早白。女貞子化學(xué)成分包括三萜類(lèi)、黃酮類(lèi)、裂環(huán)環(huán)烯醚萜類(lèi)和對(duì)羥基苯乙醇苷類(lèi)等化合物[1-2]，其中紅景天苷含量可觀，有望成為紅景天苷的另一有效的天然來(lái)源[3-4]。且女貞子在浙江地區(qū)藥材資源豐富，隨著天然紅景天植物資源逐漸匱乏，從女貞子中提取紅景天苷具有較大的開(kāi)發(fā)前景。

目前，2010年版《中華人民共和國(guó)藥典》（一部）以特女貞苷為指標(biāo)成分[5-6]，香港中藥材標(biāo)準(zhǔn)以紅景天苷為指標(biāo)成分對(duì)女貞子進(jìn)行質(zhì)量控制[7]，表明紅景天苷及裂環(huán)環(huán)烯醚萜苷類(lèi)的含量代表了女貞子藥材的內(nèi)在質(zhì)量。女貞子中紅景天苷測(cè)定的方法已有報(bào)道[8-12]，本研究考察浙產(chǎn)女貞子不同成果期（9－12月）紅景天苷含量的動(dòng)態(tài)變化及浙江不同地區(qū)女貞子紅景天苷含量的差異，從而確定女貞子的最佳采收時(shí)間及采收區(qū)域，為更合理、有效地從女貞子中提取紅景天苷提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

Agilent 1100高效液相色譜儀（美國(guó)Agilent公司），HP色譜工作站（美國(guó)Agilent公司），Kromasil C18色譜柱（4.6 mm×150 mm，5 μm），UV-2300掃描型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海美譜達(dá)），JA2003N型電子天平（感量0.001 g，上?？萍純x器公司），KQ-250E型醫(yī)用超聲波清洗器（江蘇昆山市超聲儀器有限公司）。

紅景天苷對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，供含量測(cè)定用，批號(hào)110818-200404）；乙腈（山東禹王，色譜純），水為自制高純水，其余試劑均為分析純。

分別在寧波、溫州、衢州、湖州4個(gè)地區(qū)，于女貞子3個(gè)不同成果期（10、11、12月）采集女貞子藥材，采樣植物經(jīng)浙江醫(yī)藥高等專(zhuān)科學(xué)校楊雄志教授鑒定為木犀科植物女貞Ligustrum Lucidum Ait.的干燥成熟果實(shí)。詳見(jiàn)表1。

表1 采集女貞子樣品信息表

2 方法與結(jié)果

2.1 對(duì)照品溶液的制備

取紅景天苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含紅景天苷0.568 mg的對(duì)照品儲(chǔ)備溶液；精密吸取濃度為0.568 mg/mL的紅景天苷對(duì)照品儲(chǔ)備液2.5 mL，置10 mL棕色量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，得紅景天苷濃度為0.142 mg/mL的對(duì)照品溶液，低溫避光貯藏，備用。

2.2 供試品溶液的制備

取女貞子干燥粉末，過(guò)3號(hào)篩，稱取1.0 g樣品，精密稱定，置25 mL容量瓶中，加60%甲醇定容，密塞，搖勻，超聲處理（功率250 W，頻率40 kHz）30 min，取出，放冷，補(bǔ)足揮發(fā)的甲醇至刻度，密塞，搖勻，過(guò)膜，取續(xù)濾液，即得。

2.3 色譜條件

色譜柱：Kromasil C18（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙睛-水（10∶90）等度洗脫；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：220 nm；柱溫：室溫。分別吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液20 μL，按上述色譜條件進(jìn)樣，色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 女貞子中紅景天苷HPLC圖

2.4 線性關(guān)系考察

取“2.1”項(xiàng)下對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣5、10、15、20、25 μL，在上述色譜條件下測(cè)定，以紅景天苷進(jìn)樣量（μg）分別對(duì)相應(yīng)峰面積積分值進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y＝2964.7X＋1003.4（r＝0.999 4），表明紅景天苷在0.71～3.55 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取紅景天苷濃度為0.142 mg/mL的對(duì)照品溶液20 μL，在上述色譜條件下連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣6次；取上述對(duì)照品溶液在第1、2、3、4、5日分別進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果日內(nèi)精密度峰面積的RSD＝0.32%，日間精密度峰面積的RSD＝0.47 %，表明紅景天苷對(duì)照品溶液的日內(nèi)精密度和日間精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一產(chǎn)地、同一生長(zhǎng)期的女貞子樣品（2號(hào)），按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在上述色譜條件下分別于0、1、2、4、8、12、24、48 h進(jìn)樣20 μL，測(cè)定，結(jié)果供試品溶液中紅景天苷峰面積的RSD分別為0.29%，表明供試品溶液在48 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一產(chǎn)地、同一生長(zhǎng)期的女貞子樣品（2號(hào)）5份，每份約1.0 g，精密稱定，按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在上述色譜條件下進(jìn)樣20 μL，測(cè)定。結(jié)果樣品中紅景天苷平均含量為3.084 mg/g，RSD＝1.9%，表明重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

取已知含量的女貞子樣品（2號(hào)）5份，每份約0.5 g，精密稱定，分別精密加入濃度為0.568 mg/mL的紅景天苷對(duì)照品儲(chǔ)備溶液2.6 mL，按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在上述色譜條件下進(jìn)樣20 μL，測(cè)定，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果紅景天苷加樣回收率在95.6%～98.6%之間，平均回收率為96.88 %，RSD＝1.32%，符合要求，見(jiàn)表2。

表2 紅景天苷加樣回收試驗(yàn)（n＝5）

2.9 樣品含量測(cè)定

取寧波、溫州、衢州、湖州4個(gè)產(chǎn)地分別于10、11、12月采收的女貞子樣品，每批各3份，每份約1.0 g，精密稱定，按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在確定的色譜條件下進(jìn)樣20 μL，采用外標(biāo)二點(diǎn)法測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 不同產(chǎn)地、不同生長(zhǎng)期女貞子樣品中紅景天苷含量測(cè)定結(jié)果（n＝3）

3 討論

全紫外波長(zhǎng)掃描表明，紅景天苷在220 nm波長(zhǎng)處有較高吸收，峰面積的積分值較高，故此含量測(cè)定的檢測(cè)波長(zhǎng)為220 nm。分別以甲醇-水（20∶80）和乙腈-水（20∶80）作為流動(dòng)相等度洗脫，考察不同流動(dòng)相條件下樣品中紅景天苷的分離效果。結(jié)果表明，乙腈-水（20∶80）系統(tǒng)中，各峰均有較好的峰型，紅景天苷響應(yīng)良好，但分離度欠佳。故在此基礎(chǔ)上調(diào)整兩者的比例為乙腈-水（10∶90），結(jié)果顯示，紅景天苷有較好的分離度和響應(yīng)值。

紅景天苷極性大，易溶于甲醇、乙醇，因提取溶劑、濃度、方法對(duì)女貞子中紅景天苷的溶出有很大影響，故本試驗(yàn)分別考察了不同提取溶劑（水、甲醇、乙醇）、提取方法（超聲、回流）和濃度（60%、80%、100%）條件下女貞子中紅景天苷的分離效果。結(jié)果表面，用60%甲醇超聲提取，樣品中紅景天苷的峰型較好，峰面積較高，提取簡(jiǎn)便。

傳統(tǒng)女貞子的采收時(shí)間在每年冬至前后，此時(shí)女貞子果實(shí)呈紫黑色且飽滿。但本研究顯示，紅景天苷含量隨成熟度提高逐漸降低，其質(zhì)量呈下降趨勢(shì)，但其生物產(chǎn)量逐漸提高，故在綜合考慮藥材質(zhì)量與其生物產(chǎn)量變化趨勢(shì)的情況下，建議10月可作為浙產(chǎn)女貞子藥材的適宜采收期。本試驗(yàn)建立了女貞子中紅景天苷的質(zhì)控方法，考察了浙江省內(nèi)不同區(qū)域女貞子中紅景天苷的含量，結(jié)果顯示寧波地區(qū)平均含量最高，可為女貞子中紅景天苷的開(kāi)發(fā)提供依據(jù)。

[1] 仝會(huì)娟,胡魁偉.近十五年中藥女貞子研究進(jìn)展[J].中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥, 2009,4(36)：1-3.

[2] 曹蘭秀,周永學(xué),頓寶生,等.女貞子總黃酮對(duì)高脂模型小鼠脂代謝的分子靶點(diǎn)的研究[J].中成藥,2010,32(10)：1789.

[3] 黃新蘋(píng),王武朝.中藥女貞子的化學(xué)成分研究進(jìn)展[J].國(guó)際藥學(xué)研究雜志,2011,38(1)：47.

[4] 蔣葉娟,姚衛(wèi)峰,張麗,等.女貞子化學(xué)成分的UPLC-ESI-Q-TOF-MS分析[J].中國(guó)中藥雜志,2012,37(15)：2304.

[5] 李夢(mèng).HPLC法測(cè)定女貞子中齊墩果酸的含量[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)2008,36(24)：10519-10526.

[6] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：一部[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010：43.

[7] Department of Health, the Government of the Hong Kong Special Ad-minstrative Region of the People's Republic of China(香港特別行政區(qū)衛(wèi)生署).The Hong Kong Chinese Materia Standards (HKC-MMS) (香港中藥材標(biāo)準(zhǔn)第三冊(cè))[M]. Hong Kong,2010：89.

[8] 黃雯,蘇子仁,畢文川,等.HPLC法測(cè)定女貞子藥材中女貞苷的含量[J].藥物分析雜志,2009,29(5)：825-826.

[9] 李元圓,何玉鈴,張永勛.HPLC法同時(shí)測(cè)定臺(tái)灣市售女貞子中紅景天苷女貞子苷的含量[J].藥物分析雜志,2013,33(2)：230-233.

[10] 李澤運(yùn),陳曉輝,馬風(fēng).HPLC法同時(shí)測(cè)定二至丸中紅景天昔、女貞子昔和膨蟆菊內(nèi)醞的含量[J].藥物分析雜志,2011,31(1)：19.

[11] 郭娜,馬芳,范斌.超高效液相色譜法測(cè)定女貞子不同炮制品中女貞苷含量[J].中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志,2010,16(12)：1171-1173.

[12] 李曼玲,徐丹.女貞子不同市售品,炮制品及不同果實(shí)部位中紅景天苷的含量測(cè)定[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2010,16(2)：14-15.

Study on Dynamic Changes and Regional Differences of Content of Salidroside in Ligustri

Lucidi Fructus in Zhejiang Province

CHENG Bin1,2, ZHOU Ai-zheng1, LING Qing-zhi1(1. Zhejiang

Objective To determine content of Salidroside in Ligustri Lucidi Fructus at different growth stages and in different regions in Zhejiang Province by HPLC; To provide the basis for more rational, efficient extraction of Salidroside from Ligustri Lucidi Fructus. Methods The Kromasil C18column (4.6 mm×150 mm, 5 μm) was used with mobile phase of acetonitrile-water (10:90); flow rate was 1.0 mL/min; detection wavelength was 220 nm; column temperature was set at room temperature; injection volume was 20 μL. Results Salidroside was in good linear range within 0.71–3.55 μg (r=0.999 4). The recovery rate of Salidroside was 95.6%–98.6% and the average recovery rate was 96.88%, RSD was 1.32% (n=5). Conclusion The content of Salidroside in Ligustri Lucidi Fructus gradually decreased with the extending of growing season. The contents of Salidroside were different at different growth stages and in different regions.

Ligustri Lucidi Fructus; Salidroside; content changes; regional differences; Zhejiang Province

10.3969/j.issn.1005-5304.2016.04.025

R284.1

A

1005-5304(2016)04-0095-03Pharmaceutical College, Ningbo 325035, China; 2. Zhejiang Chinese Medical University, Hangzhou 310053, China)

2015-07-03）

（

2015-07-21；編輯：陳靜）

浙江省教育廳一般科研項(xiàng)目（Y201226174）；高等學(xué)校訪問(wèn)工程師校企合作項(xiàng)目（FW2012004）；浙江醫(yī)藥高等專(zhuān)科學(xué)校校級(jí)科研課題（ZPCSR2010002）