李淑紅,葛俊偉

(東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)學(xué)院，黑龍江 哈爾濱 150030)

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優(yōu)化鴨病毒性肝炎弱毒活疫苗(CH60株)的生產(chǎn)工藝參數(shù)

李淑紅,葛俊偉

(東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)學(xué)院，黑龍江 哈爾濱 150030)

鴨肝炎病毒屬于小核糖核酸病毒，分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ3個血清型。目前，我國只發(fā)現(xiàn)鴨病毒性肝炎病毒I型。鴨病毒性肝炎弱毒活疫苗(CH60株)可用于預(yù)防I型鴨肝炎。根據(jù)制苗用毒液的制備工藝環(huán)節(jié)中，不同的雞胚接種日齡、毒種不同的稀釋倍數(shù)對雞胚死亡的高峰時間、每胚的平均收獲單產(chǎn)結(jié)果都不同。目前存在雞胚的死亡時間靠前，收率低等問題，為了得到更穩(wěn)定的產(chǎn)品質(zhì)量，還需要進(jìn)一步優(yōu)化疫苗的生產(chǎn)工藝參數(shù)。

鴨；病毒性肝炎弱毒活疫苗(CH60株)；雞胚接種日齡；毒種稀釋倍數(shù)

1 材料

毒種：鴨病毒性肝炎雞胚化弱毒株(CH60株)，由哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司提供，符合毒種標(biāo)準(zhǔn)要求。雞胚：選用哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司SPF雞場提供的SPF種蛋，分別孵化成9日齡、10日齡和11日齡的雞胚。0.85%生理鹽水：由哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司配制、滅菌。

2 方法

分組:將雞胚接種日齡和毒種稀釋倍數(shù)交叉做試驗。雞胚按孵化日齡分為9日齡、10日齡、11日齡。每個日齡的SPF雞胚450枚。9日齡、10日齡、11日齡雞胚均來源于同一批次SPF種蛋。毒種稀釋倍數(shù)分別為50倍、100倍、5000倍。

接種:將鴨病毒性肝炎雞胚化弱毒株(CH60株)用0.85%滅菌生理鹽水分別做50倍、100倍、5000倍稀釋，分別接種9日齡、10日齡、11日齡SPF雞胚，經(jīng)絨毛尿囊腔接種0.2mL/胚。先用75%的消毒酒精噴灑于蛋殼氣室部位進(jìn)行消毒，作用30s，然后用蛋錐在氣室正上方中間部位打孔，接種后封蠟，放37℃繼續(xù)孵育，不必翻蛋。

孵育和觀察：接種24h后，每6h照蛋1次，直到96h。記錄每一時間段的死胚數(shù)，取24～96h死亡的雞胚，置2～8℃冷卻。

收獲：將冷卻4～24h的雞胚，用無菌手術(shù)分別收取絨毛尿囊液及羊水、胎兒、絨毛尿囊膜，每若干個混為一組，置于滅菌瓶中。每組分別取樣進(jìn)行無菌檢驗，并測定收獲雞胚的病毒含量。

通過觀察不同雞胚接種日齡和毒種稀釋倍數(shù)對雞胚死亡高峰時段的影響以及每胚收獲單產(chǎn)的影響，來選擇最適合的雞胚接種日齡和毒種稀釋倍數(shù)。

3 結(jié)果與分析

表1 不同日齡和不同稀釋倍數(shù)對雞胚影響的測定結(jié)果

續(xù)表：

試驗次數(shù)組別日齡稀釋倍數(shù)接種數(shù)量(枚)死亡高峰時段(h)胚收獲單產(chǎn)(mL)病毒含量(雞胚)395015030～424.037.0A105015030～484.117.17115015036～544.186.5910015030～483.986.83B1010015042～544.397.01110015048～544.556.839500015036～484.227.0C10500015048～665.327.011500015054～785.657.17

由表1可以看出將鴨病毒性肝炎雞胚化弱毒株(CH60株)做50倍稀釋分別接種9日齡、10日齡、11日齡SPF雞胚時，對雞胚死亡高峰時段、胚收獲單產(chǎn)的影響差異不大。

將鴨病毒性肝炎雞胚化弱毒株(CH60株)做100倍稀釋分別接種9日齡、10日齡、11日齡SPF雞胚時，10日齡、11日齡較9日齡在雞胚死亡高峰時段上推后6～12h，10日齡接種較9日齡接種平均單產(chǎn)提高9.64%；11日齡接種較9日齡接種平均單產(chǎn)提高13.45%。

將鴨病毒性肝炎雞胚化弱毒株(CH60株)做5000倍稀釋分別接種9日齡、10日齡、11日齡SPF雞胚時，10日齡、11日齡較9日齡在雞胚死亡高峰時段上推后12～18h，10日齡接種較9日齡接種平均單產(chǎn)提高24.27%；10日齡接種較9日齡接種平均單產(chǎn)提高35.68%。

4 討論

本次優(yōu)化鴨病毒性肝炎弱毒活疫苗(CH60株)生產(chǎn)工藝參數(shù)試驗，意在尋找鴨病毒性肝炎病毒在雞胚繁殖過程中，在確保半成品病毒含量達(dá)到規(guī)程標(biāo)準(zhǔn)要求的前提下提高收獲率，通過選擇不同雞胚接種日齡與毒種稀釋倍數(shù)的交叉試驗比較，將鴨病毒性肝炎雞胚化弱毒株(CH60株)進(jìn)行5000倍稀釋接種11日齡雞胚，雞胚死亡高峰向后推遲，收獲單產(chǎn)提高。毒種稀釋倍數(shù)較小時，無論雞胚日齡大小，因為單位體積內(nèi)的病毒含量大，對雞胚致死的差異度大，放大毒種稀釋倍數(shù)，接種不同日齡雞胚，結(jié)果差異顯著。

2016-10-28

李淑紅(1979-),女,遼寧康平人,本科,獸醫(yī)師，主要從事獸用生物制品的生產(chǎn)工作。 通訊作者：葛俊偉(1977-),男,河南新鄉(xiāng)人,博士,副教授,碩士生導(dǎo)師，研究領(lǐng)域：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)。

10.19369/j.cnki.2095-9737.2016.12.006

S858.32

B

2095-9737(2016)12-0011-02