梁 惠?。ㄉ綎|省蓬萊市大辛店畜牧獸醫(yī)工作站　265612）

雞白痢沙門(mén)氏菌的分離鑒定及耐藥性分析

梁 惠（山東省蓬萊市大辛店畜牧獸醫(yī)工作站265612）

采集蓬萊某養(yǎng)雞場(chǎng)疑似雞白痢病死雞的肝臟、脾臟、腎臟等作為病料，進(jìn)行細(xì)菌的分離、生化鑒定、血清型鑒定及藥敏試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果表明，分離得到的3株分離株均是雞白痢沙門(mén)氏菌，其血清型分別為2株O9、1株O12。藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明：分離株對(duì)頭孢噻呋和阿米卡星高敏；對(duì)卡那霉素、慶大霉素和新霉素中敏；對(duì)環(huán)丙沙星和鏈霉素低敏。因此頭孢噻呋和阿米卡星可以很好的作為該養(yǎng)雞場(chǎng)預(yù)防和治療雞白痢的藥物，然而其他抗生素可以減少其使用量或停用。

雞白痢沙門(mén)氏菌分離鑒定藥敏試驗(yàn)

雞白痢是由雞白痢沙門(mén)氏菌引起的雞的一種敗血性傳染病，嚴(yán)重影響雛雞的成活率和成年雞的生產(chǎn)性能，對(duì)養(yǎng)雞業(yè)危害嚴(yán)重[1]。使用抗生素進(jìn)行治療是防治雞白痢的主要措施之一，由于抗生素藥物的長(zhǎng)期使用以及不合理使用，導(dǎo)致雞白痢沙門(mén)氏菌的耐藥性日益嚴(yán)重[2]，如何選擇有效的藥物進(jìn)行治療，成為一個(gè)問(wèn)題。本試驗(yàn)采集蓬萊某養(yǎng)雞場(chǎng)疑似雞白痢的病料進(jìn)行細(xì)菌分離鑒定及藥敏試驗(yàn)，篩選出有效的藥物，希望能為該養(yǎng)雞場(chǎng)雞白痢的防治提供一定的理論指導(dǎo)。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1病料采集蓬萊某養(yǎng)雞場(chǎng)疑似雞白痢病死雞的肝臟、脾臟、腎臟等作為病料。

1.1.2培養(yǎng)基、試劑SS瓊脂平板、EMB瓊脂平板、三糖鐵培養(yǎng)基、藥敏紙片均購(gòu)自青島生物制品研究所，生化鑒定試劑購(gòu)自上海靜融生化試劑有限公司，沙門(mén)氏菌O多價(jià)抗血清、O單因子抗血清購(gòu)自廣州真知生物技術(shù)有限公司。

1.2方法

1.2.1細(xì)菌分離將采集的病料分別劃線(xiàn)接種于SS培養(yǎng)基、EMB培養(yǎng)基，置37℃生化培養(yǎng)箱培養(yǎng)18-24h，挑取單個(gè)可疑菌落涂片染色鏡檢，并挑取可疑的菌落進(jìn)行反復(fù)劃線(xiàn)直到得到純培養(yǎng)。

1.2.2生化鑒定參考《獸醫(yī)微生物學(xué)》[3]介紹的方法，將分離菌株依次接種在三糖鐵培養(yǎng)基、葡糖糖、乳糖、甘露醇和蔗糖等發(fā)酵管，經(jīng)37℃培養(yǎng)24-48h觀察結(jié)果。

1.2.3血清型鑒定將分離菌株接種在EMB培養(yǎng)基上，然后在37℃生化培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h，用0.5%生理鹽水沖洗培養(yǎng)物，再經(jīng)過(guò)120℃高溫處理2h，得到抗原。分別與沙門(mén)氏菌O多價(jià)抗血清、O單因子血清做玻片凝集試驗(yàn)[4]，同時(shí)用生理鹽水做對(duì)照試驗(yàn)，分別混和均勻后，反應(yīng)1～3min，觀察現(xiàn)象，出現(xiàn)凝集者為陽(yáng)性，則不凝聚者為陰性。

1.2.4藥敏試驗(yàn)將經(jīng)過(guò)純化培養(yǎng)的細(xì)菌接種在TSB培養(yǎng)液中，37℃培養(yǎng)12h，然后取2滴菌液均勻涂于TSA平板上，用無(wú)菌鑷子夾取各種藥敏紙片，平貼于培養(yǎng)基表面，每個(gè)藥敏片的間距不小于20mm，藥敏片的中心距平板的邊緣不小于15mm，最后倒置于生化培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)24h，觀察結(jié)果，抑菌圈直徑的大小作為供試菌株敏感指標(biāo)報(bào)告敏感、中度敏感和低度敏感的結(jié)果。

2　結(jié)果與分析

2.1細(xì)菌分離結(jié)果

經(jīng)培養(yǎng)后，在SS培養(yǎng)基、EMB培養(yǎng)基上出現(xiàn)無(wú)色、半透明、光滑、圓形的小菌落。經(jīng)反復(fù)劃線(xiàn)，得到3株分離株。

2.2生化鑒定結(jié)果

3株分離菌生化特性一致，具體表現(xiàn)為，在TSI中不分解乳糖及蔗糖，下層底部分解葡萄糖呈酸性變黃色，斜面呈紅色；3株分離株發(fā)酵葡萄糖、甘露醇產(chǎn)酸產(chǎn)氣，不利用乳糖，發(fā)酵木糖，肌醇、衛(wèi)矛醇反應(yīng)為陰性，沒(méi)有H2S生成，生化反應(yīng)符合沙門(mén)氏菌的特性，具體結(jié)果見(jiàn)表1。

表1　糖發(fā)酵試驗(yàn)結(jié)果

2.3血清型測(cè)定結(jié)果

將分離到的3個(gè)菌株分別與沙門(mén)氏菌O多價(jià)抗血清做玻片凝集試驗(yàn)1～2min后，反應(yīng)結(jié)果全部呈陽(yáng)性凝集。分別與O單因子血清玻片凝集試驗(yàn)時(shí)，發(fā)現(xiàn)有2株和O9因子出現(xiàn)了顆粒凝集的現(xiàn)象，1株與O12因子出現(xiàn)了顆粒凝集的現(xiàn)象。生理鹽水對(duì)照組不發(fā)生凝集反應(yīng)。通過(guò)以上試驗(yàn)鑒定，確定該3株分離菌中有2株O9血清型，1株O12血清型。

2.4藥敏試驗(yàn)結(jié)果

3株細(xì)菌對(duì)阿米卡星和頭孢噻呋的表現(xiàn)為高敏；而對(duì)慶大霉素、新霉素、卡那霉素表現(xiàn)為中敏；對(duì)環(huán)丙沙星以及鏈霉素則表現(xiàn)為低敏或不敏感，見(jiàn)表2。

表2　藥物的抑菌圈平均直徑

3　討論

（1）雛雞雞白痢與禽傷寒的臨床表現(xiàn)及病理變化相似，但兩者的病原體分別為雞白痢沙門(mén)氏菌與雞傷寒沙門(mén)氏菌，雞白痢沙門(mén)氏菌與雞傷寒沙門(mén)氏菌的生化特性存在顯著差異，本試驗(yàn)分離的3株分離菌均不發(fā)酵衛(wèi)矛醇，這與雞傷寒沙門(mén)氏菌的生化特性不相符，而符合雞白痢沙門(mén)氏菌的生化特性，因此說(shuō)明分離菌為雞白痢沙門(mén)氏菌。（2）本試驗(yàn)藥敏試驗(yàn)的結(jié)果與金艷麗[5]的測(cè)定結(jié)果差別很大，這表明雞白痢沙門(mén)氏菌由于用藥種類(lèi)和用藥習(xí)慣的不同會(huì)使雞白痢沙門(mén)氏菌耐藥性發(fā)生變化，本地區(qū)耐藥性較高主要是因?yàn)楂F醫(yī)臨床上使用頻率較高的鏈霉素和環(huán)丙沙星藥，這可能與雞場(chǎng)由于疾病的壓力而長(zhǎng)期大量使用此類(lèi)抗生素進(jìn)行藥物預(yù)防或飼料中添加過(guò)多的原因?qū)е?，由此警示臨床治療時(shí)應(yīng)慎用此類(lèi)藥物[6]。而分離株對(duì)頭孢噻呋和阿米卡高度敏感，因此頭孢噻呋和阿米卡星可以很好的作為該養(yǎng)雞場(chǎng)預(yù)防和治療雞白痢的藥物。（3）本試驗(yàn)分離得到的雞白痢沙門(mén)氏菌血清型為O9和O12，與江蘇徐州市的呂華申、孫鵬[7]分離到O9、O12和O1不同，這說(shuō)明雞白痢是由多種血清型雞白痢沙門(mén)氏菌混合感染而引起的，在以后的檢驗(yàn)檢疫過(guò)程中，應(yīng)該多挑取疑似菌落并且逐一的進(jìn)行病原體的分離與鑒定，以確定其血清型，本試驗(yàn)分離株血清型的確定為該養(yǎng)雞場(chǎng)以后疫苗的研究及預(yù)防提供一定的理論基礎(chǔ)。

[1] 王新華, 銀梅. 禽病檢驗(yàn)與防治[M]. 北京: 中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社, 2013: 222-225.

[2] 張凌云. 雞場(chǎng)沙門(mén)氏菌的分離鑒定及耐藥性研究[D]. 沈陽(yáng): 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué), 2011: 7-8.

[3] 陸承平. 獸醫(yī)微生物學(xué)[M]. 北京: 中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社, 2011: 155-158.

[4] 馬興樹(shù). 禽傳染病實(shí)驗(yàn)診斷技術(shù)[M]. 北京: 化學(xué)工業(yè)出版社, 2005: 280-282.

[5] 金艷麗. 雞白痢沙門(mén)氏菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)[J]. 山東畜牧獸

醫(yī). 2014(1): 12-14.

[6] 嚴(yán)曉玲, 邵紅. 雞白痢沙門(mén)氏菌臨床分離株的耐藥性分析[J]. 黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)學(xué)報(bào), 2012, 24(2): 23-26.

[7] 呂華申, 孫鵬. 江蘇徐州市雞白痢沙門(mén)氏菌的分離鑒定和耐藥性分析[J]. 中國(guó)動(dòng)物檢疫. 2014, 31(12): 50-51.

S852.61

A

1007-1733(2016)12-0015-02

（2016–08–26）