黃思勇， 金顯平

(恩施職業(yè)技術(shù)學(xué)院，湖北恩施 445000)

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復(fù)方丹參片丹參酮類化合物含量測(cè)定

黃思勇， 金顯平

(恩施職業(yè)技術(shù)學(xué)院，湖北恩施 445000)

[目的]完善復(fù)方丹參片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。[方法]采用高效液相色譜法(HPLC)測(cè)定復(fù)方丹參片中丹參酮類成分的含量。[結(jié)果]丹參酮ⅡA在0.10～0.50 μg時(shí)線性關(guān)系良好，平均加樣回收率為100.59%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.38%。[結(jié)論]該方法簡(jiǎn)便快速、重現(xiàn)性好，可作為復(fù)方丹參片質(zhì)量控制的方法。

復(fù)方丹參片；丹參酮類化合物；含量測(cè)定；高效液相色譜法(HPLC)

復(fù)方丹參片由丹參、三七、冰片三味中藥組成，具有活血化瘀、理氣止痛的功效[1]?！吨袊?guó)藥典》2015年版復(fù)方丹參片含量測(cè)定中對(duì)丹參藥材的丹參酮ⅡA、丹酚酸B含量進(jìn)行了測(cè)定，對(duì)三七藥材的人參皂苷Rg1、Rb1、三七皂苷R1、人參皂苷Re進(jìn)行了含量測(cè)定，該質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)對(duì)復(fù)方丹參片的主藥丹參、處方中貴重中藥材三七的含量進(jìn)行了測(cè)定，符合復(fù)方制劑質(zhì)量控制指標(biāo)的要求[2]。為使復(fù)方丹參片的質(zhì)量控制更加準(zhǔn)確和全面，筆者選取丹參酮ⅡA作為對(duì)照，采用一測(cè)多評(píng)法對(duì)復(fù)方丹參片中丹參酮類化合物的含量進(jìn)行了測(cè)定。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 主要儀器。高效液相色譜儀：DIONEX(U3000)；色譜工作站：Chameleon；檢測(cè)器：VWD3100紫外；色譜柱：Acclaim 120 C18(5 μm，250.0 mm×4.6 mm)；分析天平：AL204 (感量0.1mg，METTLER TOLEDO)；KQ-2500超聲波清洗儀(江蘇省昆山市超聲儀器有限公司)。

1.1.2 藥劑與試劑。復(fù)方丹參片：市售品，規(guī)格為每片重0.32 g，相當(dāng)于飲片0.60 g。丹參酮ⅡA對(duì)照品：批號(hào)110766-201520，含量以98.9%計(jì)，購(gòu)買于中國(guó)食品藥品檢定研究院。乙腈為色譜純，其余試劑為分析純，水為純凈水。

1.2 方法

1.2.1 對(duì)照品溶液的配制。稱取適量丹參酮ⅡA對(duì)照品置于棕色量瓶中，加甲醇制成濃度為20 μg/mL的溶液即為對(duì)照品溶液。

1.2.2 供試品溶液的配制。稱取1.0 g復(fù)方丹參片粉末(過三號(hào)篩)，置于50 mL棕色量瓶中，加甲醇定量，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，初濾，0.45 μm有機(jī)系微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，即為供試品溶液。

1.2.3 色譜條件[2]。以Acclaim 120 C18柱(4.6 mm×250.0 mm,5 μm)為色譜柱；以乙腈為流動(dòng)相A，以0.02%磷酸溶液為流動(dòng)相B，按照表1中的規(guī)定梯度進(jìn)行洗脫；柱溫為30 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為270 nm；進(jìn)樣量為10 μL。

表1 流動(dòng)相梯度洗脫

1.2.4 丹參酮線性關(guān)系考察。吸取丹參酮ⅡA對(duì)照品溶液5、10、15、20、25 μL，分別注入液相色譜儀，測(cè)定丹參酮ⅡA峰面積。

1.2.5 精密度試驗(yàn)。吸取丹參酮ⅡA對(duì)照品溶液10 μL注入高效液相色譜儀，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定丹參酮ⅡA峰面積。

1.2.6 供試品溶液的穩(wěn)定性試驗(yàn)。取復(fù)方丹參片供試品溶液，于0、2、4、6、12 h分別吸取10 μL注入液相色譜儀，測(cè)定丹參酮ⅡA、隱丹參酮、丹參酮I峰面積。

1.2.7 重現(xiàn)性試驗(yàn)。取同一批樣品6份，每份1.0 g，按照供試品溶液的制備方法和含量測(cè)定方法進(jìn)行樣品制備及含量測(cè)定。

1.2.8 加樣回收率試驗(yàn)。取已知含量的樣品6份，每份1.0 g，置于50 mL棕色量瓶中，分別加入適量丹參酮ⅡA對(duì)照品，按照供試品溶液的制備方法和含量測(cè)定方法進(jìn)行樣品制備及含量測(cè)定。

1.2.9 樣品含量測(cè)定。取3批樣品進(jìn)行含量測(cè)定，以丹參酮ⅡA對(duì)照品為參照，以其相應(yīng)的峰為S峰，計(jì)算隱丹參酮、丹參酮I的相對(duì)保留時(shí)間，其相對(duì)保留時(shí)間應(yīng)在規(guī)定值的±5%范圍內(nèi)[2]。相對(duì)保留時(shí)間及校正因子見表2。以丹參酮ⅡA的峰面積為對(duì)照，分別乘以校正因子，計(jì)算隱丹參酮、丹參酮I、丹參酮ⅡA的含量[2]。

2 結(jié)果與分析

2.1 丹參酮線性關(guān)系 以丹參酮ⅡA的進(jìn)樣量C(μg)為橫坐標(biāo)、參酮ⅡA的峰面積A為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得到線性回歸方程：A=606.84.34C-1.106，r=0.999 6(n=5)。結(jié)果表明，在0.10～0.50 μg范圍內(nèi)參酮ⅡA的進(jìn)樣量與峰面積線性關(guān)系較好。由圖1可知，丹參酮類化合物的峰與其相鄰的成分峰分離效果好，滿足測(cè)定要求。

注：1.丹參酮ⅡA;2.丹參酮I;3.隱丹參酮。Note: 1. Tanshinones ⅡA; 2. Tanshinones I; 3. Cryptotanshinone. 圖1 供試品種和對(duì)照品的HPLC圖譜Fig.1 HPLC of tested substances and reference substances

2.2 精密度 結(jié)果表明，6次測(cè)得丹參酮ⅡA峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.37%，儀器的精密度良好。

2.3 穩(wěn)定性 結(jié)果表明，測(cè)得丹參酮ⅡA峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.02%，隱丹參酮峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.88%，丹參酮I峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.02%。表明復(fù)方丹參片供試品溶液至少在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4 重現(xiàn)性 結(jié)果表明，該批樣品中丹參酮類化合物含量的平均值為1.12 mg/片，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.70%(n=6)。

表2 各待測(cè)成分相對(duì)保留時(shí)間及校正因子

Table 2 Relative retention time and correction factor of tested components

待測(cè)成分(峰)Testedcomp?onents(peak)相對(duì)保留時(shí)間Relativeretentiontime∥min校正因子Correctionfactor隱丹參酮Cryptotanshinone0．751．18丹參酮ITanshinonesI0．791．31丹參酮ⅡATanshinonesⅡA1．001．00

2.5 加樣回收率 結(jié)果表明，丹參酮ⅡA的平均加樣回收率為100.89%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.44%。表明該試驗(yàn)方法準(zhǔn)確可靠。

2.6 樣品含量測(cè)定 結(jié)果表明，3批樣品的丹參酮類化合物含量為1.13、1.11、1.13 mg/片。

3 結(jié)論與討論

《中國(guó)藥典》2015年版一部對(duì)復(fù)方丹參片的含量測(cè)定中[2]對(duì)丹酚酸B和丹參酮ⅡA進(jìn)行了含量測(cè)定；金樟照等[3-10]采用高效液相色譜技術(shù)對(duì)不同產(chǎn)地的丹參藥材、丹參飲片進(jìn)行了指紋圖譜研究，結(jié)果表明不同產(chǎn)地的丹參藥材、丹參飲片的共性成分有差別，但都含有脂溶性成分丹參酮ⅡA、隱丹參酮、丹參酮I，以及水溶性成分丹酚酸B。因此，《中國(guó)藥典》2015年版對(duì)復(fù)方丹參片中的丹參選擇丹參酮ⅡA、丹酚酸B作為含量測(cè)定的指標(biāo)性成分較合理。但丹參酮類成分僅選用丹參酮ⅡA作為指標(biāo)性成分不能夠全部反映不同產(chǎn)地丹參藥材生產(chǎn)的復(fù)方丹參片的質(zhì)量?！吨袊?guó)藥典》2015年版一部對(duì)丹參藥材的質(zhì)量控制也選取了丹參酮類成分，因此，該研究認(rèn)為選取丹參酮類成分控制復(fù)方丹參片的質(zhì)量更合理。參照《中國(guó)藥典》2015年版一部丹參藥材的測(cè)定方法，采取高效液相色譜技術(shù)對(duì)丹參酮類成分進(jìn)行含量測(cè)定，方法可行，簡(jiǎn)單，重現(xiàn)性好，可以作為復(fù)方丹參片中丹參酮類成分的含量測(cè)定方法。以丹參酮類化合物的含量作為復(fù)方丹參片中丹參含量測(cè)定的控制指標(biāo)，可以減少或避免因丹參產(chǎn)地不同而影響復(fù)方丹參片的質(zhì)量。參考文獻(xiàn)

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Determination of Tanshinones Content in Danshen Tablets

HUANG Si-yong, JIN Xian-ping

(Enshi Technical College, Enshi, Hubei 445000)

[Objective] To improve the quality standard of Danshen tablets. [Method] Tanshinones content in Danshen tablets was detected by HPLC method. [Result] Tanshinones ⅡA showed good linear relationship within the range of 0.10-0.50 μg; the average recovery rate was 100.59%(RSD=1.38%). [Conclusion] This method is simple, rapid and reproducible, it can be used as a method for quality control of Danshen tablets.

Danshen tablets; Tanshinones; Content determination；HPLC

黃思勇(1982- )，男，湖北建始人，講師，從事藥品質(zhì)量控制研究。

2016-09-18

S 567.5+3

A

0517-6611(2016)33-0121-02