王秋月

(湖南醫(yī)藥學(xué)院，湖南懷化 418000)

?

馬尾松樹皮中原花青素抗衰老作用研究

王秋月

(湖南醫(yī)藥學(xué)院，湖南懷化 418000)

[目的]研究馬尾松樹皮中原花青素抗衰老的作用。[方法]以商品化的大豆異黃酮產(chǎn)品作為對照，考察了馬尾松樹皮中原花青素精制物對小白鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)的活力和丙二醛(MDA)含量的影響。[結(jié)果]與大豆異黃酮相比，馬尾松樹皮中原花青素能顯著地提高SOD和GSH-PX的酶活力，在抗脂質(zhì)過氧化方面則與大豆異黃酮相當(dāng)。[結(jié)論]馬尾松樹皮原花青素具有很強(qiáng)的抗衰老作用。

馬尾松：樹皮；原花青素；抗衰老

原花青素(Procyanidins，PC)是一類廣泛存在植物體內(nèi)的多酚類化合物，這種化合物在酸性介質(zhì)中加熱均產(chǎn)生花青素(Cyanidins)，故將這類物質(zhì)命名為原花青素。大量研究表明，原花青素具有抗衰老、抗氧化、抗腫瘤、抗菌、抗病毒等藥理作用。衰老是體內(nèi)一系列自由基導(dǎo)致脂質(zhì)發(fā)生過氧化反應(yīng)產(chǎn)生丙二醛(MDA)，MDA會(huì)引起蛋白質(zhì)、核酸等生命大分子的交聯(lián)聚合對細(xì)胞產(chǎn)生危害[1]。超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)是機(jī)體酶防御體系中清除自由基或活性氧的最主要的抗氧化物酶，它們在人體的抗衰老方面發(fā)揮重要作用[2]。體外研究試驗(yàn)表明，原花青素在抗自由基能力[3]及保護(hù)因自由基引起的脂質(zhì)過氧化和抗DNA損傷能力顯著高于維生素C、維生素E和胡蘿卜素[4-5]。 原花青素在清除自由基和抗氧化能力方面顯著強(qiáng)于蘆丁、兒茶素和抗壞血酸[6]。有報(bào)道用酶學(xué)方法研究對超氧陰離子自由基的清除活性，用免疫化學(xué)方法研究了原花青素對羥基誘導(dǎo)的DNA損傷的清除活性，發(fā)現(xiàn)其清除自由基的能力與它們的化學(xué)性質(zhì)和立體化學(xué)結(jié)構(gòu)密切相關(guān)[7]。

馬尾松(PinusmassonianaLamb.)為松科松屬的常綠喬木，是我國特有的松屬樹種，也是我國松屬樹種中分布最廣泛的樹種，主要分布在淮河流域、漢水流域，西至四川中部、貴州中部、云南東南部，其來源十分廣泛，價(jià)格便宜。根據(jù)國內(nèi)外前期的研究得知，其松樹皮提取物的主要成分為原花青素，平均含量在3.5%以上，與葡萄籽中的原花青素含量相近[8]。從社會(huì)需求來看，馬尾松樹皮原花青素是一種資源豐富、可再生的綠色資源，隨著人們生活水平及健康意識的不斷提高，對原花青素類保健品的需要也會(huì)不斷上升，以林業(yè)副產(chǎn)物馬尾松樹皮作為原料提取天然抗氧化產(chǎn)物用于抗衰老的研究將具有重大的社會(huì)經(jīng)濟(jì)效益。筆者以小鼠為對象，以商品化的大豆異黃酮產(chǎn)品作為對照，研究原花青素在生物體內(nèi)的抗衰老作用，以期為開發(fā)一種成本低廉且無毒副作用的天然抗衰老保健品提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試材。馬尾松樹皮采自懷化學(xué)院校區(qū)；大豆異黃酮保健品購于懷化藥店；小白鼠(20 g±1 g)和動(dòng)物飼料購于貴陽醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

1.1.2 試劑。MDA測定試劑盒、SOD測定試劑盒和GSH-PX測定試劑盒(南京建成生物工程公司)；DM301型大孔樹脂(天津南開大學(xué)化工廠)；兒茶素對照品(Sigma，98%)；無水乙醇、甲醇均為分析純；蒸餾水實(shí)驗(yàn)室自制。

1.1.3 儀器。TU-1901雙光束紫外可見分光光度計(jì)(北京普析通用有限責(zé)任公司)；真空冷凍干燥機(jī)(美國Labconco)；恒溫水浴鍋(上?？莆鰧?shí)驗(yàn)儀器廠)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)；電子分析天平(上海奧豪斯公司)；酒精計(jì)(河間市景和宏利玻儀廠)；低速離心機(jī)(上海離心機(jī)廠)。

1.2 方法

1.2.1 原花青素粗提物制備。稱取10 g馬尾松樹皮粉末，按照乙醇濃度70%、料液比1∶30、提取溫度70 ℃、加熱回流3 h的最佳提取工藝得到乙醇浸膏[6]。浸膏經(jīng)真空冷凍干燥得馬尾松樹皮原花青素粗提物粉末。

1.2.2 原花青素精制物制備。將4 g經(jīng)過預(yù)處理的DM301型大孔吸附樹脂裝入(2.2 cm×40 cm)的玻璃層析柱中，稱取5 g原花青素粗提物粉末溶解于100 mL蒸餾水中，以2 mL/min 的流速將粗制原花青素水溶液加入樹脂柱中，吸附完全后，用水沖洗至流出液無色，再用100 mL 80%乙醇洗脫。將得到的洗脫液減壓蒸餾除去乙醇后冷凍干燥得原花青素精制物。

1.2.3 動(dòng)物試驗(yàn)?zāi)Ｐ徒ⅰ?0只老鼠在飼養(yǎng)環(huán)境溫度保持在26 ℃，室內(nèi)濕度控制在50%，保持室內(nèi)自由通風(fēng)的條件下喂養(yǎng)飼料，喂養(yǎng)2周后進(jìn)行隨機(jī)分組，分別為空白對照組、原花青素I組(低劑量)、原花青素Ⅱ組(中劑量)、原花青素Ⅲ組(高劑量)、大豆異黃酮陽性對照組(表1)。 每小組設(shè)計(jì)試驗(yàn)動(dòng)物10只，飼養(yǎng)8周，眼眶取血，通過試劑盒說明書分別測得小鼠血清中SOD和GSH-PX的活力以及MDA含量。

表1 各劑量組飼料喂給量和給藥量

Table 1 The feeding dosage and administration dosage of each dosage group

組別Group喂給飼料Feedingdosageg/(d·只)給藥量Administrationdosagemg/(d·只)空白對照組Blankcontrolgroup50原花青素(低劑量)Procyanidins(lowdos?age)51原花青素(中劑量)Procyanidins(middledosage)52原花青素(高劑量)Procyanidins(highdos?age)54異黃酮(低劑量)Isoflavone(lowdosage)51異黃酮(中劑量)Isoflavone(middledosage)52異黃酮(高劑量)Isoflavone(highdosage)54

1.2.6 MDA測定原理。機(jī)體通過酶系統(tǒng)與非酶系統(tǒng)產(chǎn)生氧自由基，氧自由基能攻擊生物膜中不飽和脂肪酸引發(fā)脂質(zhì)過氧化作用，生成脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物如MDA使細(xì)胞損傷。MDA的高低間接反映了機(jī)體細(xì)胞受自由基攻擊的嚴(yán)重程度。過氧化脂質(zhì)降解產(chǎn)物中的MDA可與硫代巴比妥酸(TBA)縮合形成紅色產(chǎn)物在532 nm處有最大吸收峰。

1.3 數(shù)據(jù)處理 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理由SPSS統(tǒng)計(jì)軟件處理，試驗(yàn)數(shù)量性狀資料采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，兩組間比較用t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 馬尾松樹皮原花青素對GSH-PX的影響 從表2可看出，與空白對照組相比，不同劑量的原花青素均能顯著地提高小鼠血清中GSH-PX酶活力(P<0.05)，表明此動(dòng)物模型設(shè)計(jì)合理。與商品化的異黃酮相比，低劑量和中劑量組的原花青素能顯著提高小鼠血清中GSH-PX酶的活力(P<0.05)，高劑量組的原花青素與高劑量的異黃酮?jiǎng)t差異不顯著(P>0.05)。

表2 馬尾松樹皮原花青素對小鼠血清GSH-PX酶活力的影響

Table 2 Effects of procyanidins inP.massonianabark on the enzyme activity of GSH-PX in mice blood serum

組別Group動(dòng)物個(gè)數(shù)AnimalnumberGSH-PXU空白對照組Blankcontrolgroup10272．08±9．38原花青素(低劑量)Procyanidins(lowdosage)101083．33±28．18?△原花青素(中劑量)Procyanidins(mid?dledosage)101170．90±13．06?△原花青素(高劑量)Procyanidins(highdosage)101252．08±9．55?異黃酮(低劑量)Isoflavone(lowdos?age)10628．24±17．59異黃酮(中劑量)Isoflavone(middledosage)10864．59±21．95異黃酮(高劑量)Isoflavone(highdos?age)101083．50±12．72

注：*、△分別表示與空白對照組比較、與異黃酮組比較差異顯著(P<0.05)。

Note：* and △ indicated significant differences(P< 0.05)compared with blank control group and isoflavone group.

2.2 馬尾松樹皮原花青素對SOD的影響 由表3可見，與空白對照組相比，不同劑量的原花青素均能顯著地提高小鼠血清中SOD酶的活力(P<0.05)，表明此動(dòng)物模型設(shè)計(jì)合理。與異黃酮相比，低劑量的原花青素能顯著提高小鼠血清中SOD酶的活力(P<0.05)，而中劑量和高劑量組的原花青素組與對應(yīng)劑量的異黃酮?jiǎng)t差異不顯著(P>0.05)。

表3 馬尾松樹皮原花青素對小鼠血清中SOD活力的影響

Table 3 Effects of procyanidins inP.massonianabark on the enzyme activity of SOD in mice serum

組別Group動(dòng)物個(gè)數(shù)AnimalnumberSODU/mL空白對照組Blankcontrolgroup1025．48±6．87原花青素(低劑量)Procyanidins(lowdos?age)10275．39±9．08?△原花青素(中劑量)Procyanidins(middledosage)10303．65±15．68?原花青素(高劑量)Procyanidins(highdos?age)10431．50±11．07?異黃酮(低劑量)Isoflavone(lowdosage)1081．82±9．29異黃酮(中劑量)Isoflavone(middledosage)10263．42±10．95異黃酮(高劑量)Isoflavone(highdosage)10358．97±13．84

注：*、△分別表示與空白對照組比較、與異黃酮組比較差異顯著(P<0.05)。

Note：* and △ indicated significant differences(P< 0.05)compared with blank control group and isoflavone group.

2.3 馬尾松樹皮原花青素對MDA含量的影響 從表4可看出，與空白對照組相比，低劑量組的原花青素不能明顯地抑制小鼠血清中MDA含量的上升，中劑量和高劑量組的原花青素能顯著地抑制小鼠血清中MDA含量的上升(P<0.05)。與異黃酮相比，低劑量和高劑量組的原花青素與對應(yīng)劑量組的異黃酮?jiǎng)t差異不顯著(P>0.05)，而中劑量組的原花青素能顯著抑制小鼠血清中MDA含量的上升(P<0.05)。

表4 馬尾松樹皮原花青素對小鼠血清中MDA含量的影響

Table 4 Effects of procyanidins inP.massonianabark on the MDA content in mice serum

組別Group動(dòng)物個(gè)數(shù)AnimalnumberMDAnmol/mL空白對照組Blankcontrolgroup109．14±0．43原花青素(低劑量)Procyanidins(lowdos?age)107．02±0．35原花青素(中劑量)Procyanidins(middledosage)104．88±1．08?△原花青素(高劑量)Procyanidins(highdos?age)104．35±0．31?異黃酮(低劑量)Isoflavone(lowdosage)106．85±0．23異黃酮(中劑量)Isoflavone(middledosage)106．20±0．38異黃酮(高劑量)Isoflavone(highdosage)104．51±0．29

注：*、△分別表示與空白對照組比較、與異黃酮組比較差異顯著(P<0.05)。

Note：* and △ indicated significant differences(P< 0.05)compared with blank control group and isoflavone group.

3 討論

抗衰老藥物的研制一直都受到人們的廣泛關(guān)注。體外大量試驗(yàn)證明，原花青素有較強(qiáng)的抗自由基功能，然而在生物體內(nèi)有清除自由基的抗氧化物酶如SOD和GSH-PX能夠起到抗衰老的作用。原花青素強(qiáng)大的抗氧化功能可能是由于其能提供-OH基和H+與自由基發(fā)生反應(yīng)從而保護(hù)一些抗氧化物酶免受氧化和避免脂質(zhì)過氧化。該試驗(yàn)以商品化的抗衰老保健品大豆異黃酮作對照，研究馬尾松樹皮原花青素精制物對小白鼠SOD和GSH-PX活力以及MDA含量的影響，結(jié)果表明，原花青素精制物各劑量組(低、中和高)均能顯著提高小白鼠血清中抗氧化酶SOD和GSH-PX的活力；在抑制MDA方面與大豆異黃酮相當(dāng)。參考文獻(xiàn)

[1] BARJA G.Free radicals and aging[J].Trends Neurosci，2004，27(10)：595-600.

[2] GIARDINO R，GIAVARESI G，F(xiàn)INI M，et al.The role of different chemical modifications of superoxide dismutase in preventing a prolonged muscular ischemia/ reperfusion injury[J].Artif Cell Blood Substit Immobil Biotechnol，2002，30(3)：189-198.

[3] 王秋月，郁建平，蔡立，等.馬尾松樹皮中原花青素體外抗自由基作用的研究[J].食品工業(yè)科技，2010，31(8)：81-83.

[4] 刁海鵬，孫體健，姬小蕾，等.高效液相法測定爬山虎紅色素中原花青素含量[J].現(xiàn)代食品科技，2009，25(5)：566-568.

[5] 田云，盧向陽，易克，等.天然植物抗氧化劑研究進(jìn)展[J].中草藥，2005，36(3)：468-470.

[6] CASTILLO J，BENAVENTE-GARCIA O，LORENTE J，et al.Antioxidant activity and radioprotective effects against chromosomal damage induced in vivo by X-ray of flavan-3-ols(procyanidins)fromgrape seeds(Vitisvinifera)：Comparative syudy versus other phenolic and organic compounds[J].J Agric food chem.，2000，48(5)：1738-1745.

[7] LOTITO S B，ACTIS-GORETTA L，RENART M L.Influence of oligomer chain lengh on the antioxidant activity of procyandins[J].Biochem Biorhys Res Comun，2000，276(3)：945-951.

[8] 王秋月，郁建平，楊文坤.馬尾松樹皮中原花青素提取純化工藝研究[J].山地農(nóng)業(yè)生物學(xué)報(bào)，2009，28(5)：436-440.

Anti-aging Effects of Procyanidins from the Bark ofPinusmassoniana

WANG Qiu-yue

(Hunan University of Medicine, Huaihua, Hunan 418000)

[Objective] To research the anti-aging effects of procyanidins from the bark ofPinusmassoniana. [Method] With commercial soybean isoflavones products as the references, we investigated the effects of procyanidins refined extracts fromP.massonianabark on the SOD, GSH-PX activity and MDA content in mouse serum. [Result] Compared with soy isoflavones, procyanidins inP.massonianabark could significantly enhanced the enzyme activities of SOD and GSH-PX, which were equal to the soy isoflavone in the aspect of anti-lipid peroxidation. [Conclusion] Procyanidins fromP.massonianabark has strong anti-aging effects.

P.massoniana; Bark; Procyanidins; Anti-aging

王秋月(1980- )，女，湖南懷化人，講師，碩士，從事應(yīng)用生物化學(xué)與生化分離工程研究。

2016-09-21

S 789.1

A

0517-6611(2016)33-0118-03