胡傳利,閆穎穎

(江蘇省連云港市東?？h畜牧獸醫(yī)站，江蘇 連云港 222300)

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近三年東?？hH5高致病性禽流感免疫抗體監(jiān)測及分析

胡傳利,閆穎穎

(江蘇省連云港市東?？h畜牧獸醫(yī)站，江蘇 連云港 222300)

為了全面了解和掌握東?？h近幾年禽流感的免疫效果，科學評價基層免疫工作質量，作為實驗室檢測人員的筆者匯總了從2013～2015年3年的試驗結果，共采集血樣5888份，合格數(shù)量是5147，合格率是87.41%，合格率高于農業(yè)部要求的70%的標準。

高致病性禽流感；抗體水平；監(jiān)測與分析

禽流感是由A型流感病毒引起多種家禽及野鳥發(fā)病的高度接觸性傳染病，又名歐洲雞瘟。高致病性禽流感是世界養(yǎng)禽業(yè)最重要的疫病之一[1]，給養(yǎng)禽業(yè)帶來了巨大的損失。在我國采取以疫苗免疫為主的綜合性防治措施來防控該病。每年東?？h不定期對已免疫家禽H5高致病性禽流感免疫抗體進行檢測，掌握抗體水平，同時適時指導防疫，這樣對防控高致病性禽流感的發(fā)生和流行具有十分重要的作用。現(xiàn)將東?？h從2013～2015年高致病性禽流感免疫抗體檢測結果分析討論如下。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗動物來自江蘇省連云港市東?？h21個鄉(xiāng)鎮(zhèn)的部分規(guī)模雞場和散養(yǎng)戶。

血清樣品：采集全縣21個鄉(xiāng)鎮(zhèn)的部分規(guī)模雞場和散養(yǎng)戶雞的全血，血液凝固后以3000r/min離心5min，吸出血清，4℃保存。如果近期不進行檢測的話最好冷凍保存。

主要儀器：V型96孔微量反應板，離心機，微量振蕩器，微量移液器及相配的槍頭，洗板機，滅菌離心管。

禽流感標準抗原和陽性血清：禽流感病毒H5亞型血凝抑制試驗抗原和陽性血清購自青島易邦生物工程有限公司。

1.2 試驗方法

1.2.1 單位抗原校正

①首先用微量移液槍向反應板的第2～6孔加生理鹽水25μL。第1孔不加。②用微量移液槍吸取4U抗原25μL分別加入第1孔、第2孔，從第2孔開始擠壓6次混合，后吸出25μL至第3孔，依次倍比稀釋到第5孔，棄去25μL。③用移液槍再吸取1%紅細胞懸液依次加入到1～6孔，每孔25μL。④于微量振蕩器振蕩1min。室溫靜置30min后觀察結果。⑤結果觀察：第1、2、3孔為完全凝聚，第4孔紅細胞為50%沉淀，第5孔為對照完全沉淀，如果出現(xiàn)以上結果，表明所配4U抗原準確，校正成立。一定要進行4U抗原的校正，否則影響后面的試驗結果。

1.2.2 抗體檢測方法

按照國標GB/T18936-2003《高致病性禽流感診斷技術》和禽流感微量紅細胞凝聚抑制試驗(SN/T1182.2-2004)[2]規(guī)定，采用血凝抑制試驗，集中對血清樣品機械實驗室檢測，并作系統(tǒng)分析。

1.2.2.1 血凝試驗操作方法

①在V型微量反應板中，每孔加入25μL的PBS；②第1孔加入25μL抗原，依次作25μL的對比稀釋至11孔；③每孔加入25μL PBS；④每孔加入25μL 1%的紅細胞；⑤將反應板在振蕩器上震蕩1～2min，室溫靜置40min；⑥結果判定：將反應板傾斜，觀察紅細胞有無呈淚滴狀流淌，完全無淚滴樣流淌的最高稀釋倍數(shù)為血凝效價。

1.2.2.2 血凝抑制試驗操作方法

①根據(jù)血凝試驗測定的效價，計算配置4U抗原。血凝效價除以4即為含4U抗原的稀釋倍數(shù)。②反應板中第1～11孔加入25μL的PBS，第12孔加入20μL的PBS；③第1孔加入25μL的血清；④在反應板上將血清作25μL的稀釋，至第10孔；⑤第1～11孔均加入25μL的4U抗原，室溫下靜置30min。⑥每孔加入25μL1%的紅細胞，輕晃均勻后，室溫靜置30min，當對照孔紅細胞呈顯著紐扣狀時判定結果。

1.2.2.3 結果判定

以完全抑制4U抗原的最高血清稀釋倍數(shù)為該血清的血凝抑制效價。當陽性對照血清的試驗結果符合血凝抑制試驗的要求，陰性血清效價不高于1∶4時候，試驗才成立。被檢樣品血凝抑制效價小于等于1∶4的為陰性，大于等于1∶16的為陽性。

2 試驗結果

2.1 不同年份免疫抗體合格率情況

表1 不同年份免疫抗體合格率情況

由表1可見2013～2015年共檢測5888份血清，2013年的合格率為82.06%，2014年的合格率為87.15%，2015年的合格率為96.21%，近三年整體的合格率為87.41%。

2.2 免疫次數(shù)與免疫效果的相關分析

表2 免疫次數(shù)與免疫效果的相關分析

由表2可見，免疫次數(shù)越多，合格率越高。

2.3 不同飼養(yǎng)方式免疫抗體合格率情況

表3 不同飼養(yǎng)方式免疫抗體合格率情況

由表3可見，規(guī)模場的合格率遠高于散養(yǎng)戶的合格率。

3 分析與討論

從以上數(shù)據(jù)可以看出，近三年東?？h的高致病性禽流感的抗體水平為87.41%，遠遠高于農業(yè)部規(guī)定的70%的要求。我們通過這幾年的試驗也驗證了一點，免疫1次的合格率僅為31.52%，而免疫2次以上的合格率高達88.74%，隨著免疫次數(shù)的增加，抗體合格率明顯升高，免疫效果與免疫次數(shù)成正比的關系。

規(guī)模場比散養(yǎng)戶的抗體合格率高，據(jù)分析其原因是，規(guī)模場的技術力量強，技術人員操作熟練，保證了禽流感的抗體合格率。另外，規(guī)模場防疫意識比較強，管理實行規(guī)范化、科學化、常態(tài)化；而散養(yǎng)戶，養(yǎng)殖量小，硬件設施跟不上，防疫意識差，免疫工作不到位，所以抗體水平低。

禽流感抗體監(jiān)測工作是評價和指導防控工作的重要措施。在家禽養(yǎng)殖中，長期對AI的血清學監(jiān)測是十分必要，通過血清學監(jiān)測，可以準確掌握疫情動態(tài)，科學地進行綜合免疫預防禽流感，尤其是高致病性禽流感。禽流感防控是一項長期持久的工作，但只要認真做好疫情的監(jiān)測，及時采取有關措施，緊急免疫預防，禽流感疫情是完全可以得到有效控制和消滅的。

從最近三年的數(shù)據(jù)可以看出，禽流感抗體的合格率是逐年提高的，說明東?？h在禽流感防控這方面做的很到位，尤其是在2016年更加大了力度，要求各鄉(xiāng)鎮(zhèn)(街道、場、區(qū))及相關養(yǎng)殖企業(yè)要高度重視監(jiān)測結果，針對存在問題，要追本溯源，明確責任，免疫抗體未達標的鄉(xiāng)鎮(zhèn)(街道)要深刻反思、認真查找原因，及時組織整改。一要開展補免。要針對規(guī)模場、小規(guī)模養(yǎng)殖及散養(yǎng)畜禽的不同特點，實行分類指導，強化程序免疫與集中免疫相結合，不留死角，確?？贵w合格率達標。二要加強對自免規(guī)模養(yǎng)殖場的監(jiān)管。大力推廣使用政府采購的免費疫苗。要加強對防疫員、規(guī)模場技術人員防疫知識的普及，適時開展免疫技術培訓，規(guī)范免疫操作。三要加強疫苗存儲、運輸?shù)拳h(huán)節(jié)的冷鏈管理，及時保養(yǎng)維修，確保疫苗質量。四要適時開展免疫監(jiān)測采樣，根據(jù)監(jiān)測結果進行疫情分析，及時補免，確保全縣畜禽重大動物疫病免疫抗體處于有效保護狀態(tài)。

[1] 劉素梅,楊士清,張連英,等.禽流感區(qū)域控制重點環(huán)節(jié)-抗體監(jiān)測應用技術的探討[J].當代畜牧，2006(03)：9.

[2] 國家標準化管理委員會.SN/T1182.2-2004禽流感微量紅細胞凝聚抑制試驗[S].北京：中國標準出版社,2004.

2016-07-21 修改日期：2016-07-22

胡傳利(1979-)，女，江蘇東海人，碩士研究生，獸醫(yī)師，主要從事動物門診診療及實驗室檢測工作。

10.19369/j.cnki.2095-9737.2016.11.002

S851.3

A

2095-9737(2016)11-0002-02