孟杰，王禮均，朱文俊，黃國杰，陳英，寧鶴

四川省中藥飲片有限責(zé)任公司，四川 成都 611730

含苦杏仁苷中藥材及其飲片二氧化硫超標(biāo)問題研究

孟杰，王禮均，朱文俊，黃國杰，陳英，寧鶴

四川省中藥飲片有限責(zé)任公司，四川 成都 611730

目的 探索按“蒸餾-碘量法”執(zhí)行二氧化硫檢測時含苦杏仁苷的一類中藥材及其飲片即使未經(jīng)硫熏也普遍存在二氧化硫超標(biāo)的原因。方法 采用頂空氣相色譜-火焰光度法對比“蒸餾-碘量法”測定苦杏仁中二氧化硫含量，進(jìn)一步將苦杏仁苷對照品與苦杏仁粉末利用常規(guī)二氧化硫測定裝置進(jìn)行硝酸銀滴定與碘滴定相結(jié)合試驗(yàn)。結(jié)果 含苦杏仁苷的中藥材及其飲片在日常二氧化硫殘留量測定過程中，有部分碘液的消耗來自苦杏仁苷的分解。結(jié)論 不能繼續(xù)沿用常規(guī)碘量法或氫氧化鈉滴定法對含苦杏仁苷的一類中藥材進(jìn)行二氧化硫殘留量檢測。

苦杏仁苷；二氧化硫；殘留量超標(biāo)

在傳統(tǒng)中藥材生產(chǎn)過程中，企業(yè)為使中藥材及其飲片外觀色澤好看，同時防霉變、蟲蛀，多對中藥采用硫磺熏蒸的處理辦法[1]。中藥二氧化硫殘留量超標(biāo)會對人體產(chǎn)生危害，鑒于此，國家藥典委員會在2010年版《中華人民共和國藥典》（以下簡稱《中國藥典》）第二增補(bǔ)本制訂了二氧化硫限量標(biāo)準(zhǔn)，規(guī)定除山藥等10種傳統(tǒng)使用硫磺熏蒸的中藥材外，其余中藥材及其飲片的二氧化硫殘留量不得超過150 mg/kg[2]。而在日常中藥材質(zhì)量檢測過程中，按照2010年版《中國藥典》附錄Ⅸ U二氧化硫殘留量檢測法項(xiàng)下方法測定并計(jì)算中藥材及其飲片的二氧化硫殘留量[3]，筆者發(fā)現(xiàn)市售未經(jīng)硫熏藥材苦杏仁、郁李仁、桃仁、蕤仁，以及現(xiàn)取于新鮮桃核中的桃仁均存在二氧化硫嚴(yán)重超標(biāo)的現(xiàn)象。

苦杏仁苷（amygdalin）廣泛存在于以上幾種傳統(tǒng)中藥中，其含量為苦杏仁、郁李仁、桃仁的質(zhì)量評價指標(biāo)。2010年版《中國藥典》（一部）規(guī)定，苦杏仁、郁李仁、桃仁中苦杏仁苷的含量分別不得少于3.0%、2.0%、2.0%。目前，苦杏仁苷已成為常用的祛痰止咳劑、輔助性抗癌藥物[4-5]?？嘈尤受辗肿邮綖镃20H27NO11，屬于糖苷類化合物，結(jié)構(gòu)式為：

苦杏仁苷易水解，在酸性條件下或苦杏仁酶的作用下分解成葡萄糖及具有特殊香味的苯甲醛和劇毒物質(zhì)氫氰酸，上述過程在室溫下，甚至沒有酸或苦杏仁酶的存在也能迅速發(fā)生[6-7]。

氫氰酸含量測定常用硝酸銀滴定法，其原理在于以氰苷形式存在于植物體內(nèi)的氰化物水解后并進(jìn)行水蒸氣蒸餾，蒸出的氰化氫可被水液吸收，在堿性條件下，以碘化鉀為指示劑，用硝酸銀標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定可測定氰化物的含量[8]。其化學(xué)反應(yīng)如下。

本研究先采用頂空氣相色譜-火焰光度法對比“蒸餾-碘量法”測定苦杏仁中二氧化硫含量，進(jìn)一步利用苦杏仁粉末與苦杏仁苷對照品按照2010年版《中國藥典》附錄Ⅸ U二氧化硫殘留量檢測法進(jìn)行碘滴定液消耗量測定，另按硝酸銀滴定法測定苦杏仁粉末與苦杏仁苷對照品水解后的氫氰酸含量，探索實(shí)際檢測過程中含苦杏仁苷中藥材及其飲片的二氧化硫超標(biāo)原因，以期正確指導(dǎo)含苦杏仁苷的中藥材及其飲片的日常質(zhì)量檢測，以保障醫(yī)療行業(yè)相關(guān)品種的正常供給。

1 儀器與試藥

天美GC7900氣相色譜儀，火焰光度檢測器（FPD），Agilent 7694E頂空進(jìn)樣器，SPB-3空氣發(fā)生器，Waters 2695高效液相色譜儀，Waters 2996二極管陣列檢測器，SHIMADZU AUW220D萬分之一電子天平，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，循環(huán)水式多用真空泵，調(diào)溫電熱套，恒溫磁力攪拌器，兩頸燒瓶，樣品粉碎機(jī)，移液槍。

苦杏仁苷標(biāo)準(zhǔn)品（中國食品藥品檢定研究院，批號110820-201004），市售苦杏仁苷對照品（純度＞90%），碘滴定液（成都市食品藥品檢測中心，濃度0.010 036 mol/L），硝酸銀滴定液（成都市食品藥品檢測中心，濃度0.103 4 mol/L），二氧化硫標(biāo)準(zhǔn)溶液（北京萬佳首化生物科技有限公司，濃度1000 μg/mL），0.1 g/L甲醛吸收液，鹽酸，氫氧化鈉，無水亞硫酸鈉；同批次已知未經(jīng)硫熏的苦杏仁，一份采用硫熏進(jìn)行處理，另一份不作處理。

2 方法

2.1 頂空氣相色譜-火焰光度法測定二氧化硫含量

2.1.1 儀器條件 色譜柱：Agilent HP-PLOT/Q毛細(xì)管色譜柱（柱長30 m，內(nèi)徑0.32 mm，涂布厚度20 μm）。氣相色譜（GC）參數(shù)：程序升溫（初始溫度50 ℃，保持1 min，以10 ℃/min升至150 ℃，保持5 min），載氣為氮?dú)?，載氣流量2 mL/min，分流進(jìn)樣（1∶1），進(jìn)樣口溫度230 ℃，檢測器溫度300 ℃，氫氣流量50 mL/min，輔助氣（氮?dú)猓┝髁?0 mL/min，采用硫化物測定濾光片。頂空進(jìn)樣器參數(shù)：進(jìn)樣環(huán)容積3 mL，頂空瓶溫度95 ℃，進(jìn)樣環(huán)溫度100 ℃，傳輸管溫度120 ℃，平衡時間30 min，高速震蕩，GC循環(huán)時間40 min，加壓時間30 s，放空時間15 s。進(jìn)樣時間30 s。理論板數(shù)按二氧化硫峰計(jì)算不低于50 000[7]。

2.1.2 溶液制備與測定 精密吸取二氧化硫標(biāo)準(zhǔn)溶液，加水制成每1 mL含5、10、20、40、60、80、100 μg的溶液，搖勻，作為對照品溶液。精密吸取與供試品中二氧化硫殘留量接近的對照品溶液1 mL，置20 mL頂空瓶中，迅速準(zhǔn)確加入0.5 mol/L氫氧化鈉溶液5 mL，密封，放入頂空進(jìn)樣器，頂空進(jìn)樣。分別取硫熏與未經(jīng)硫熏的苦杏仁細(xì)粉2.0 g，精密稱定，置20 mL頂空瓶中，迅速準(zhǔn)確加入0.2 mol/L鹽酸溶液6 mL，密封，沸水浴中加熱30 min，放入頂空進(jìn)樣器，頂空進(jìn)樣。

2.2 蒸餾-碘量法測定二氧化硫含量

分別取硫熏與未硫熏的苦杏仁粉末，按2010年版《中國藥典》附錄Ⅸ U二氧化硫殘留量檢測法項(xiàng)下方法，即“蒸餾-碘量法”操作，計(jì)算二氧化硫殘留量。

2.3 高效液相色譜結(jié)合硝酸銀滴定、碘滴定法測定2.3.1 苦杏仁苷含量測定 按2010年版《中國藥典》（一部）“苦杏仁”項(xiàng)下含量測定方法，采用高效液相色譜法（HPLC）測定苦杏仁樣品及苦杏仁苷對照品中苦杏仁苷的含量。

2.3.2 碘滴定液消耗量測定 取苦杏仁粉末（過二號篩）10.0 g，重復(fù)3次，精密稱定。另取苦杏仁苷對照品，每份中苦杏仁苷含量相當(dāng)于10.0 g苦杏仁粉末，重復(fù)3次，按2010年版《中國藥典》（一部）附錄Ⅸ U二氧化硫殘留量測定法測定各樣品的碘滴定液消耗量。

2.3.3 硝酸銀滴定法測定氫氰酸含量 取苦杏仁粉末（過二號篩）10.0 g，重復(fù)3次，精密稱定。另取苦杏仁苷對照品，每份中苦杏仁苷含量相當(dāng)于10.0 g苦杏仁粉末，重復(fù)3次，按2010年版《中國藥典》（一部）附錄Ⅸ U二氧化硫殘留量測定法連接各儀器部件并測定，將指示劑淀粉換為10%碘化鉀溶液2 mL并向錐形瓶中加入6 mol/L氨水8 mL，滴定液換為0.103 4 mol/L AgNO3，加熱樣品并開始滴定，至錐形瓶中出現(xiàn)渾濁且不能散去為終點(diǎn)，記錄硝酸銀標(biāo)準(zhǔn)液消耗體積，并做試劑空白試驗(yàn)。

3 結(jié)果與分析

3.1 頂空氣相色譜-火焰光度法與“蒸餾-碘量法”測定結(jié)果

按“2.1”“2.2”項(xiàng)下方法測定二氧化硫含量，所得GC圖見圖1，測定結(jié)果見表1。

圖1 苦杏仁中二氧化硫GC圖

表1 硫熏與未硫熏苦杏仁樣品不同檢測方法二氧化硫含量測定結(jié)果（mg/kg）

根據(jù)表1可知，采用頂空氣相色譜-火焰光度法測定未硫熏苦杏仁結(jié)果未檢測到二氧化硫的存在，而采用“蒸餾-碘量法”測定結(jié)果平均含有370 mg/kg二氧化硫，該結(jié)果大大超出了2010年版《中國藥典》對二氧化硫的限量，表明單純“蒸餾-碘量法”不適用于該類藥材的二氧化硫檢測。結(jié)合以上2種方法對硫熏苦杏仁二氧化硫殘留量的測定結(jié)果：95 mg/kg（硫熏，氣相法）＋370 mg/kg（未硫熏，碘量法）＝465≈468 mg/kg（硫熏，碘量法）。表明采用“蒸餾-碘量法”對苦杏仁進(jìn)行二氧化硫殘留量測定時，只要扣除苦杏仁自身成分對碘液的消耗量，結(jié)果仍然準(zhǔn)確。

3.2 苦杏仁苷含量測定結(jié)果

按“2.3.1”項(xiàng)下方法測定，苦杏仁苷HPLC圖見圖2。

以峰面積計(jì)算供試品與苦杏仁苷對照品中苦杏仁苷含量，結(jié)果見表2。本試驗(yàn)所使用的苦杏仁苷對照品純度為91.71%，苦杏仁粉末中苦杏仁苷含量為5.17%。

圖2 苦杏仁中苦杏仁苷HPLC圖

表2 供試品與純品苦杏仁苷含量測定結(jié)果（%）

3.3 碘滴定液消耗量測定結(jié)果

按“2.3.2”項(xiàng)下方法測定并計(jì)算碘滴定液消耗量，結(jié)果見表3。方差分析顯示，在本試驗(yàn)條件下，苦杏仁苷總量相同的苦杏仁粉末和苦杏仁苷對照品對碘滴定液的消耗量無明顯差異，說明苦杏仁粉末在二氧化硫測定過程中對碘滴定液的消耗作用來自其所含的苦杏仁苷。

表3 碘滴定液消耗量

3.4 硝酸銀滴定液消耗量測定結(jié)果

按“2.3.3”項(xiàng)下方法測定并計(jì)算硝酸銀滴定液消耗量，結(jié)果見表4。方差分析顯示，在本試驗(yàn)條件下，與苦杏仁苷總量相同的苦杏仁粉末和苦杏仁苷對照品對硝酸銀滴定液的消耗量無明顯差異，說明二者所含苦杏仁苷水解后產(chǎn)生的氰化氫量相同。結(jié)合上項(xiàng)進(jìn)一步說明，未硫熏苦杏仁粉末在二氧化硫測定過程中對碘滴定液的消耗作用全部來自其所含的苦杏仁苷水解產(chǎn)生的氰化氫。

表4 硝酸銀滴定液消耗量

4 討論

本試驗(yàn)結(jié)果表明，含苦杏仁苷未經(jīng)硫熏的中藥材及其飲片在按2010年版《中國藥典》（一部）附錄Ⅸ U二氧化硫殘留量檢測法檢測其二氧化硫含量時，苦杏仁苷在酸性條件下水解產(chǎn)生氰化氫并被氮?dú)夤娜胧占?，溶于水后產(chǎn)生的氫氰酸最終導(dǎo)致碘滴定液的消耗，而長期以來采用被消耗的碘滴定液體積計(jì)算此類中藥材及其飲片的二氧化硫含量被證明是不合理的。同理，若采用2015年版《中國藥典》（四部）二氧化硫殘留量測定方法第一法“酸堿滴定法”測定含苦杏仁苷的中藥材二氧化硫殘留量，理論上同樣會因水解后產(chǎn)生的氰化氫被吸收，最終導(dǎo)致氫氧化鈉滴定液消耗而使結(jié)果不準(zhǔn)確。

由于苦杏仁苷水解產(chǎn)生的氫氰酸可以采用硝酸銀滴定法準(zhǔn)確定量，且形成的AgCN非常穩(wěn)定，但考慮到該滴定結(jié)束時產(chǎn)生的渾濁狀態(tài)會影響“碘-淀粉”溶液是否變藍(lán)的判斷，所以對含苦杏仁苷的中藥材及其飲片二氧化硫?qū)嶋H測定工作，可以通過在同等條件下先采用硝酸銀標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行滴定從而定量1份樣品中的氰根離子，并通過計(jì)算得出氰根離子對碘或氫氧化鈉滴定液的理論消耗值，再二次利用碘量法或酸堿滴定法測定第2份樣品，通過碘滴定液或氫氧化鈉滴定液消耗量扣除氰根離子的計(jì)算消耗量，以計(jì)算二氧化硫含量。

此外，可采用頂空氣相色譜-火焰光度法，通過測定氣相中二氧化硫含量，間接測定樣品中的二氧化硫含量，該方法具有操作簡便、快速、準(zhǔn)確、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，同樣適用于各種中藥材及其飲片中二氧化硫殘留量檢測[9]。還可采用離子色譜法，將中藥材以水蒸氣蒸餾法進(jìn)行處理，樣品中的亞硫酸鹽系列物質(zhì)加酸處理后轉(zhuǎn)化為二氧化硫，隨水蒸氣蒸餾，并被雙氧水吸收、氧化為硫酸根離子，采用離子色譜儀檢測，最后得出二氧化硫計(jì)算結(jié)果[10]。

對于含有苦杏仁苷的中藥材及其飲片，本研究表明已不能繼續(xù)沿用常規(guī)碘量法或氫氧化鈉滴定法對其進(jìn)行二氧化硫殘留量檢測，望有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)制定部門引起足夠重視并及時加強(qiáng)研究，在新定標(biāo)準(zhǔn)中對相關(guān)品種的二氧化硫檢測方法進(jìn)行特別規(guī)定，以期正確指導(dǎo)含苦杏仁苷的中藥材及其飲片的日常質(zhì)量檢測，保障醫(yī)療行業(yè)相關(guān)品種的正常供給。

[1] 王兆基,關(guān)錫耀,汪潔,等.中藥材中二氧化硫的含量測定[J].中草藥, 2000,31(2)：97-99.

[2] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：第二增補(bǔ)本[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社,2010：附錄.

[3] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社,2010：附錄61.

[4] 邢國秀,李楠,楊美燕,等.天然苦杏仁苷的研究進(jìn)展[J].中成藥,2003, 25(12)：1007-1009.

[5] 常軍,肖依文,吳文婷,等.苦杏仁苷抗腫瘤機(jī)理研究進(jìn)展[J].藥物生物技術(shù),2014,21(6)：597-599.

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Research on Sulfur Dioxide Exceeding Standard in Chinese Herbal Medicine and Decoction Pieces Containing Amygdalin

MENG Jie, WANG Li-jun, ZHU Wen-jun, HUANG Guo-jie, CHEN Ying,

NING He (Sichuan Traditional Chinese Medicine Decoction Pieces Co., LTD., Chengdu 611730, China)

Objective To explore the causes of some Chinese herbal medicine and decoction pieces containing amygdalin existing the problem of excessive sulfur dioxide even without sulfur smoked through “distill-iodometry”. Methods Headspace gas chromatography-flame photometric method was compared with distill-iodometry method to detect the content of sulfur dioxide in Semen Armeniacae Amarae, and silver nitrate titration and iodometric titration were used to determine the pure amygdalin and sample through conventional sulfur dioxide determination device. Results In the process of determination of sulfur dioxide residues in Chinese herbal medicine and decoction pieces containing amygdalin, some iodine consumption was caused by amygdalin decomposing. Conclusion Conventional iodometric method and sodium hydroxide titration method can no longer be used for detection of sulfur dioxide residue amount of Chinese herbal medicine and decoction pieces containing amygdalin.

amygdalin; sulfur dioxide; residue amount exceeding standard

10.3969/j.issn.1005-5304.2016.01.019

R284.1

A

1005-5304(2016)01-0082-04

2015-07-03）

（

2015-07-25；編輯：陳靜）

王禮均，E-mail：13060049032@163.com