孫龍，曹玉美，伍少欽，農(nóng)秀艷，岑玲，韋婧婷，肖有恩，陳澤祥

（1.廣西農(nóng)墾永新畜牧集團(tuán)有限公司良圻原種豬場(chǎng)，廣西南寧530317；2.廣西壯族自治區(qū)獸醫(yī)研究所細(xì)菌研究室，廣西南寧530001）

母豬子宮內(nèi)膜炎致病菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)

孫龍1，曹玉美1，伍少欽1，農(nóng)秀艷1，岑玲1，韋婧婷1，肖有恩1，陳澤祥2

（1.廣西農(nóng)墾永新畜牧集團(tuán)有限公司良圻原種豬場(chǎng)，廣西南寧530317；2.廣西壯族自治區(qū)獸醫(yī)研究所細(xì)菌研究室，廣西南寧530001）

為探究母豬子宮內(nèi)膜炎的致病菌及其耐藥情況，無(wú)菌采集40份子宮內(nèi)膜炎母豬子宮內(nèi)容物進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)及分離鑒定，共分離到細(xì)菌47株，分離率為100%。經(jīng)過(guò)鑒定，分離菌主要為大腸桿菌、葡萄球菌、銅綠假單胞菌等細(xì)菌。對(duì)分離到的細(xì)菌進(jìn)行了藥敏試驗(yàn)。結(jié)果表明，氧氟沙星、頭孢噻肟是敏感性較高的2種抗生素。通過(guò)臨床試驗(yàn)證實(shí)，根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果更改子宮保健方案后能夠提高母豬的斷奶配種率。

母豬；子宮內(nèi)膜炎；細(xì)菌分離；藥敏試驗(yàn)

母豬子宮內(nèi)膜炎是由一系列致病微生物侵入母豬子宮黏膜表層或深層，引起子宮黏膜的黏液性或膿性炎癥過(guò)程，是母豬繁殖障礙最主要的細(xì)菌性疾病之一。本病在豬場(chǎng)生產(chǎn)中十分常見(jiàn)。發(fā)生子宮內(nèi)膜炎的母豬發(fā)情不正常，或發(fā)情正常但屢配不孕而被迫淘汰，使母豬的非生產(chǎn)天數(shù)增加，減少年產(chǎn)胎次，直接影響母豬的繁殖力，導(dǎo)致養(yǎng)豬成本增高，經(jīng)濟(jì)效益下降，由此可見(jiàn)，子宮內(nèi)膜炎控制不理想會(huì)對(duì)豬場(chǎng)的生產(chǎn)力帶來(lái)較大損失。本研究通過(guò)對(duì)子宮內(nèi)膜炎母豬無(wú)菌采集子宮內(nèi)容物進(jìn)行細(xì)菌分離鑒定，了解引發(fā)母豬子宮內(nèi)膜炎的主要致病菌種類，通過(guò)藥敏試驗(yàn)了解致病菌的藥物敏感性，為母豬子宮內(nèi)膜炎的預(yù)防和治療提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)時(shí)間與地點(diǎn)

試驗(yàn)于2015年5—7月在廣西農(nóng)墾永新畜牧集團(tuán)良圻原種豬場(chǎng)進(jìn)行。

1.2 試驗(yàn)材料

血瓊脂平板、伊紅美藍(lán)（EMB）培養(yǎng)基、麥康凱培養(yǎng)基、M-H培養(yǎng)基、膽硫乳（DHL）培養(yǎng)基、SC增菌培養(yǎng)基、胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基（TSB）均購(gòu)自北京陸橋生物試劑公司，16s rRNA引物購(gòu)自Life公司，藥敏紙片購(gòu)自杭州濱和微生物試劑有限公司。

1.3 樣品采集

患病豬外陰部位用0.3%新潔而滅溶液清洗消毒后，用滅菌輸精管按人工授精的方法送入子宮腔，注入滅菌生理鹽水20 mL，并立即回抽，待回液10mL左右，用封口膜封住輸精瓶口，低溫避光保存后立即送往實(shí)驗(yàn)室4℃保存。

1.4 細(xì)菌的分離純化

混勻樣品，無(wú)菌操作抽取樣品200 μL加入預(yù)先準(zhǔn)備好的營(yíng)養(yǎng)肉湯、SC增菌液、TSB肉湯培養(yǎng)基中，37℃溫箱中增菌培養(yǎng)24 h，然后在血瓊脂平板、麥康凱平板、TSA平板進(jìn)行分離培養(yǎng)純化，并通過(guò)伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基及DHL培養(yǎng)基進(jìn)行初步鑒定。

1.5 菌落觀察

對(duì)平板上生長(zhǎng)的菌落大小、形狀、顏色、質(zhì)地、光澤進(jìn)行觀察并記錄。挑取單個(gè)菌落進(jìn)行革蘭氏染色，并通過(guò)顯微鏡油鏡觀察。

1.6 引物的設(shè)計(jì)與合成

利用16s rRNA兩端的保守序列及參考文獻(xiàn)報(bào)道，設(shè)計(jì)引物27F/1492R序列，由Life公司合成，擴(kuò)增目的片段長(zhǎng)度為1.5 kb左右。獲得目的條帶后送廣州Invitrogen公司測(cè)序。

1.7 藥敏試驗(yàn)

對(duì)分離純化后的細(xì)菌進(jìn)行藥物敏感試驗(yàn)。所選藥物有頭孢噻肟、頭孢拉定、慶大霉素、氧氟沙星、左旋氧氟沙星、新霉素、卡那霉素、大觀霉素、強(qiáng)力霉素、阿奇霉素、恩諾沙星、鏈霉素、環(huán)丙沙星、阿莫西林、青霉素、諾氟沙星、氨芐西林、復(fù)方磺胺嘧啶等18種常用藥物。藥敏效果判定：抑菌圈直徑≥20 mm為高敏，抑菌圈直徑在15～20 mm為中敏，抑菌圈直徑＜15 mm為低敏或不敏感。

1.8 動(dòng)物臨床試驗(yàn)

對(duì)實(shí)驗(yàn)室篩選的幾種抗生素在不同母豬場(chǎng)進(jìn)行臨床試驗(yàn)，分為混飼給藥和注射給藥兩種途徑，統(tǒng)計(jì)試驗(yàn)豬的斷奶配種率，從臨床上驗(yàn)證高敏抗生素在體內(nèi)的抑菌殺菌效果，從而探索出最佳的臨床子宮護(hù)理保健方案。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 病原菌的分離檢測(cè)結(jié)果

從不同母豬場(chǎng)共40份子宮內(nèi)容物樣品中共分離到細(xì)菌47株，通過(guò)培養(yǎng)基鑒別和16s rRNA測(cè)序結(jié)果，最終測(cè)得主要為大腸桿菌、葡萄球菌、銅綠假單胞菌、變形桿菌、沙門氏菌等5種細(xì)菌，并以大腸桿菌、葡萄球菌為主，分別占所有檢出菌株比例的59.6%、23.4%。銅綠假單胞菌、變形桿菌和沙門氏菌占比相對(duì)較低。具體分布見(jiàn)表1。

表140 份母豬子宮內(nèi)膜炎細(xì)菌學(xué)檢查結(jié)果

2.2 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

將分離到的主要致病菌28株大腸桿菌和11株葡萄球菌應(yīng)用紙片法進(jìn)行藥敏試驗(yàn)以篩選敏感藥物，結(jié)果如表2所示。分離的28株大腸桿菌中，對(duì)頭孢噻肟、大觀霉素、氧氟沙星、左旋氧氟沙星、頭孢拉定、阿奇霉素具有較高的敏感性，高度敏感菌株比例均能達(dá)到50%以上，而對(duì)常規(guī)使用的子宮保健藥物青霉素、鏈霉素均出現(xiàn)耐藥性。

分離到的11株葡萄球菌對(duì)頭孢噻肟、頭孢拉定、氧氟沙星、左旋氧氟沙星高度敏感比例最大，對(duì)喹諾酮類抗生素較為敏感。而對(duì)氨基糖苷類抗生素基本都產(chǎn)生耐藥，對(duì)常規(guī)使用較為頻繁的青霉素也出現(xiàn)了耐藥性。

表2 大腸桿菌和葡萄球菌的藥敏試驗(yàn)

2.3 臨床試驗(yàn)結(jié)果

實(shí)驗(yàn)室分離細(xì)菌并進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，篩選出兩種敏感的抗生素，在兩個(gè)2 000頭規(guī)模的母豬場(chǎng)內(nèi)進(jìn)行試驗(yàn)。A場(chǎng)試驗(yàn)主要驗(yàn)證林可霉素+大觀霉素對(duì)子宮炎病菌的抑制作用，B場(chǎng)試驗(yàn)主要驗(yàn)證氧氟沙星對(duì)子宮炎病菌的抑制作用，產(chǎn)后8 d進(jìn)行斷奶配種率的統(tǒng)計(jì)分析。具體試驗(yàn)分組及結(jié)果見(jiàn)表3和表4。

表3 A場(chǎng)兩種產(chǎn)后保健方案的對(duì)比結(jié)果

表4 B場(chǎng)3種保健方案對(duì)比結(jié)果

A場(chǎng)試驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，試驗(yàn)組（林可霉素+大觀霉素組）較對(duì)照組（紐弗羅+金霉素組）具有更高的斷奶配種率，試驗(yàn)組和對(duì)照組斷奶配種率分別為89.1%、86.8%；但采食量試驗(yàn)組（林可霉素+大觀霉素組）不及對(duì)照組（紐弗羅+金霉素組），說(shuō)明林可霉素+大觀霉素在口感方面沒(méi)有紐弗羅+金霉素好，影響了母豬的采食量。

B場(chǎng)試驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，氧氟沙星組比阿莫西林組及青霉素+鏈霉素組具有更高的斷奶配種率，且對(duì)子宮流膿的控制情況也優(yōu)于阿莫西林組和青霉素+鏈霉素組兩組。采食量方面沒(méi)有較大影響，說(shuō)明氧氟沙星組可以較好地控制子宮內(nèi)膜炎的發(fā)生，提高斷奶配種率，減少母豬的非生產(chǎn)天數(shù)。

3 討論

子宮內(nèi)膜炎是影響母豬斷奶再次發(fā)情的主要疾病，主要由幾種病原體的混合感染引起，是臨床中降低豬場(chǎng)非生產(chǎn)天數(shù)和增加母豬淘汰率的主要因素，不同地區(qū)甚至不同的畜牧公司病原菌的種類差異較大。本次試驗(yàn)從本公司4個(gè)母豬場(chǎng)中出現(xiàn)子宮內(nèi)膜炎母豬的40份病料中分離到細(xì)菌47株，主要病原菌是大腸桿菌、葡萄球菌、銅綠假單胞菌、變形桿菌、沙門氏菌，檢出率分別為70.0%、27.5%、10.0%、5.0%和5.0%。大腸桿菌和變形桿菌是條件性致病菌，在豬抵抗力降低或環(huán)境較差時(shí)，細(xì)菌會(huì)進(jìn)入子宮并大量繁殖，可單獨(dú)或與其他細(xì)菌配合引起母豬子宮內(nèi)膜炎的發(fā)生。葡萄球菌是常見(jiàn)的革蘭氏陽(yáng)性菌，往往會(huì)引起急性炎癥或化膿性感染。本次試驗(yàn)分離到較多的大腸桿菌和葡萄球菌，與文獻(xiàn)報(bào)道的基本一致，而子宮感染分離率較高的鏈球菌在本次試驗(yàn)中沒(méi)有分離到。

藥敏試驗(yàn)是對(duì)分離到的致病菌在分離培養(yǎng)后進(jìn)行的藥物敏感性試驗(yàn)，能夠指導(dǎo)臨床用藥。本次試驗(yàn)還對(duì)檢出率較高的大腸桿菌和葡萄球菌進(jìn)行了藥敏試驗(yàn)，結(jié)果顯示，本公司豬場(chǎng)使用率較低的頭孢類抗生素對(duì)大腸桿菌和葡萄球菌具有較高的敏感性，大觀霉素對(duì)大腸桿菌具有較高的抑制作用，而對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌葡萄球菌的作用較弱。豬場(chǎng)實(shí)際應(yīng)用過(guò)程中，大觀霉素雖能提高斷奶配種率，卻遇到采食量稍有下降的問(wèn)題，可能是生產(chǎn)工藝不好、口感欠佳造成的。氧氟沙星屬喹諾酮類藥物，抗菌譜廣，抗菌活性高，對(duì)分離到的大腸桿菌和葡萄球菌都具有較強(qiáng)的抑制作用。根據(jù)藥物代謝動(dòng)力學(xué)/藥物效力動(dòng)力學(xué)理論，喹諾酮類藥物屬于濃度依賴性藥物，是抗菌活性在很大范圍內(nèi)隨藥物濃度的增大而增加的一類藥物，跟作用時(shí)間關(guān)系不大，因此相對(duì)高劑量的給藥能夠獲得較好的效果。臨床使用氧氟沙星對(duì)產(chǎn)后母豬進(jìn)行連續(xù)3 d的肌肉注射能夠明顯提高母豬的斷奶配種率。但由于氧氟沙星不是獸用專用藥，在食用動(dòng)物上的廣泛使用可能會(huì)造成細(xì)菌的耐藥，造成在人身上用時(shí)效果減退，因此2015年6月9日農(nóng)業(yè)部發(fā)布公告自2016年1月1日起停止經(jīng)營(yíng)、使用洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、諾氟沙星等4種原料藥的各種鹽、脂及其各種制劑。以后子宮炎細(xì)菌分離及藥敏試驗(yàn)要避免使用此4類抗生素進(jìn)行試驗(yàn)。

在我國(guó)當(dāng)前的養(yǎng)殖條件下，母豬子宮內(nèi)膜炎的情況依然嚴(yán)重，是影響母豬的產(chǎn)后發(fā)情率的主要因素。環(huán)境中常在的條件性致病菌是母豬子宮內(nèi)膜炎主要感染菌，其中大腸桿菌是本病的主要感染菌。良好的豬舍環(huán)境和徹底的空欄消毒是控制本病的最佳解決方案。依靠藥物治療只能起到緩解的作用，很難對(duì)患病動(dòng)物進(jìn)行根除。同時(shí)，在使用藥物進(jìn)行產(chǎn)后保健時(shí)還應(yīng)遵循交叉用藥和輪換用藥的原則，不能長(zhǎng)時(shí)間的依靠某一種抗生素，這樣才會(huì)盡量減少細(xì)菌耐藥性的產(chǎn)生。

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（致謝：本試驗(yàn)得到廣西壯族自治區(qū)獸醫(yī)研究所細(xì)菌研究室陳澤祥研究員團(tuán)隊(duì)的大力支持，特此表示衷心感謝。）

（編輯：富春妮）

不吃肉會(huì)導(dǎo)致?tīng)I(yíng)養(yǎng)缺乏

【法國(guó)《費(fèi)加羅報(bào)》10月27日?qǐng)?bào)道】題：不攝入動(dòng)物蛋白，難以避免營(yíng)養(yǎng)缺乏

法國(guó)雷恩農(nóng)學(xué)院人類營(yíng)養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人菲利普·勒格朗接受本報(bào)記者采訪，主要內(nèi)容如下：

《費(fèi)加羅報(bào)》問(wèn)：為什么肉類攝入問(wèn)題在我們的膳食平衡中非常敏感？

菲利普·勒格朗答：肉類是蛋白質(zhì)的重要和均衡的來(lái)源。蛋白質(zhì)構(gòu)成了對(duì)人體非常重要的氨基酸。簡(jiǎn)而言之，沒(méi)有蛋白質(zhì)就沒(méi)有生命。但我們不清楚如何靠自己來(lái)產(chǎn)出氨基酸，因此必須從飲食中獲取。

問(wèn)：植物也含有蛋白質(zhì)。我們是否可以擺脫動(dòng)物蛋白？

答：植物食品和動(dòng)物食品的蛋白質(zhì)富含度差別非常大。動(dòng)物在進(jìn)食時(shí)自身也在合成蛋白質(zhì)，因此它們向我們提供了無(wú)與倫比的多種氨基酸，其中一些氨基酸是我們無(wú)法自己制造的，而植物提供的不可或缺的氨基酸較少。

問(wèn)：是否可以說(shuō)沒(méi)有肉制品的素食飲食結(jié)構(gòu)必然不均衡？

答：顯然如此!素食需要精確的計(jì)算以及大量飲食才能達(dá)到人體必需的營(yíng)養(yǎng)。另外，貧血的風(fēng)險(xiǎn)會(huì)增加。在提供可吸收的鐵元素方面，肉類是無(wú)可比擬的來(lái)源，它在提供維生素B12方面同樣如此?？傊?，要成為素食者就需要時(shí)間，因?yàn)檫@很復(fù)雜，而復(fù)雜就意味著風(fēng)險(xiǎn)。素食者通常缺乏維生素，輕度貧血……他們還需額外補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)食品。

問(wèn)：避免營(yíng)養(yǎng)不良的最佳食譜是什么？

答：什么都吃，但要適量。這樣就能遠(yuǎn)離營(yíng)養(yǎng)不良。正因如此，我們才是雜食動(dòng)物！魚(yú)和雞蛋作為紅肉的替代也是動(dòng)物蛋白的良好來(lái)源，而紅肉能提供更多的維生素B12和鐵。最根本的是不要排斥任何一類食品。比如，如果我們不愛(ài)喝奶或者對(duì)奶消化不良，那么我們也不能放棄所有奶制品，可以繼續(xù)吃奶酪或喝酸奶。

問(wèn)：對(duì)不同的年齡段是否有特別的建議？

答：成年人可以少吃一點(diǎn)動(dòng)物蛋白，因?yàn)槌赡耆松眢w具有不可思議的適應(yīng)性。但要求小孩或老人吃素食則會(huì)帶來(lái)巨大的營(yíng)養(yǎng)不良風(fēng)險(xiǎn)。目前的社會(huì)試圖將蔬菜視為有百利而無(wú)一害的食品，這是錯(cuò)誤的。為了達(dá)到健康的最佳狀態(tài)以及恪守預(yù)防在先的原則，應(yīng)該選擇雜食。

但請(qǐng)注意，這并不意味著每天吃兩次肉。在當(dāng)下這個(gè)飽食的社會(huì)，一些人確實(shí)吃肉過(guò)量。

（轉(zhuǎn)自參考消息[N]，2015-10-29）

S858.28

A

1002-1957(2016)01-0121-03

2015-12-10

孫龍（1988-），男，山東昌邑人，執(zhí)業(yè)獸醫(yī)師，碩士，研究方向?yàn)橐?guī)?；i場(chǎng)主要疫病的控制與凈化. E-mail：461579682@qq.com