魏鳳，張文通，李峰，王金良，苗立中，劉吉山，沈志強(qiáng)，

（1.山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院，山東濱州256600；2.山東省畜禽用蜂膠疫苗研究開發(fā)推廣中心，濱州256600；3.山東綠都生物科技有限公司，濱州256600）

一起豬瘟的診治

魏鳳1，2，張文通3，李峰1，王金良1，苗立中1，劉吉山1，沈志強(qiáng)1，3

（1.山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院，山東濱州256600；2.山東省畜禽用蜂膠疫苗研究開發(fā)推廣中心，濱州256600；3.山東綠都生物科技有限公司，濱州256600）

豬瘟（Classical Swine Fever,CSF）是由豬瘟病毒（Classical Swine Fever Virus,CSFV）引起的一種豬的急性、熱性、高度接觸性病毒傳染病。未免疫豬群表現(xiàn)發(fā)熱、厭食、腹瀉與便秘相間，衰竭、死亡等典型癥狀；免疫豬群出現(xiàn)無癥狀或癥狀不明顯的亞臨床感染。豬瘟的特征性病理變化為淋巴結(jié)周邊出血、脾臟邊緣性出血性梗死、腎臟密集出血點、盲腸和結(jié)腸部位出現(xiàn)“紐扣狀”潰瘍等。針對該病我國雖然采取了廣泛的免疫措施并取得了比較好的效果，但由于個別疫苗質(zhì)量把關(guān)不嚴(yán)、豬瘟病毒變異等因素影響，該病仍在全國范圍內(nèi)流行[1-4]。2016年1月，山東某養(yǎng)豬場20日齡左右仔豬發(fā)生了疑似豬瘟病例，現(xiàn)將診斷過程介紹如下。

1 發(fā)病情況

2016年1月初山東某養(yǎng)豬場20日齡左右仔豬發(fā)生了以淋巴結(jié)出血、脾臟邊緣出血、腎臟點狀出血、腸道出血、喉頭出血等為病理特征的病例。該豬場同圈仔豬發(fā)病率100%，死亡率25%。豬場母豬一年免疫兩次豬瘟疫苗，仔豬未免疫豬瘟疫苗。

2 臨床癥狀

患病仔豬主要表現(xiàn)體溫升高，在41℃左右；厭食或食欲減退；嗜睡；個別仔豬顫抖等。

3 病理變化

剖檢病死仔豬發(fā)現(xiàn)：淋巴結(jié)出血、脾臟邊緣出血、腎臟點狀出血、腸道出血、喉頭出血等組織器官病變。

4 實驗室診斷

4.1 病料處理

取病死仔豬扁桃體、脾臟、淋巴結(jié)組織。將采集的病料剪碎，添加3倍滅菌生理鹽水，用勻漿器研磨制成懸液；懸液反復(fù)凍融3次；低速離心取上清液。上清液-80℃冰箱凍存?zhèn)溆谩?/p>

4.2 病毒RT-PCR鑒定

4.2.1 引物設(shè)計根據(jù)GenBankAY663656的mRNA序列，利用Prime 5.0軟件，設(shè)計擴(kuò)增長度約1 065 bp的CSFV E2基因。引物合成單位為生工生物工程（上海）股份有限公司。擴(kuò)增CSFV E2的引物序列如下。

上游引物：5′-ATGGTAACTGGGGCACAAGG-3′；下游引物：5′-TCACACCACCAAGACAACAA-3′。

4.2.2 病毒RNA基因組提取Trizol法提取病毒RNA。詳細(xì)操作方法如下：上述4.1中-80℃凍存的上清液為提取病毒RNA基因組的樣本；取1.5 mL EP管（注：提取RNA所用到的EP管均需DEPC處理）1個，先加入250 μL上清液，再加入750 μL Trizol試劑，渦旋混勻，室溫靜置5 min；再加入200 μL氯仿，然后上下顛倒搖動數(shù)次，室溫靜置10 min；以4℃12 000 r/min離心10 min；取上層液體400 μL加入至另一新的1.5 mL EP管中，再加入異丙醇（預(yù)冷的）200 μL，混勻于-20℃放置30 min；以4℃12 000 r/min離心10 min；棄上清液，用75%乙醇溶液（預(yù)冷的）洗滌沉淀；以4℃12 000 r/min離心10 min；棄上清液，將該EP管放置室溫或37℃溫箱干燥10 min；加入30 μL含DEPC的滅菌水，得到的溶液即為病毒的RNA基因組。

4.2.3 病毒的RT-PCR反轉(zhuǎn)錄步驟為：取1.5 mL EP管（注：提取RNA所用到的EP管均需DEPC處理）1個，加入RNA提取物10 μL、下游引物（20 μmol/L）2 μL，70℃水浴10 min；取出后再加入5× first stand buffer 4 μL、dNTP（10 mmol/L）3 μL、MMLV酶1.0 μL，放置42℃水浴60 min；取出后放置70℃水浴15 min，得到的溶液即為cDNA。

PCR體系：cDNA 4 μL、上游引物（20 μmol/L）和下游引物（20 μmol/L）各0.5 μL、10×PCR Buffer 2.5 μL、dNTP（10 mmol/L）1.0 μL、滅菌水16.5 μL。

PCR反應(yīng)程序：94℃3 min、94℃45 s、55℃45 s、72℃1 min，35個循環(huán)，72℃10 min。

PCR產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳：將PCR產(chǎn)物用瓊脂糖凝膠（濃度為1%）電泳檢測。電泳結(jié)果與設(shè)計擴(kuò)增大小片段相符（設(shè)計片段大小為1 065 bp）。結(jié)果見圖1。

圖1 豬瘟病毒的RT-PCR

回收該RT-PCR產(chǎn)物，連接到pMD-T載體，然后送往生工生物工程（上海）股份有限公司進(jìn)行測序。將測序的核苷酸序列在NCBI里進(jìn)行Blast。結(jié)果顯示與豬瘟病毒毒株同源性最高達(dá)99%。

5 治療及體會

（1）采取隔離措施。禁止發(fā)病舍與其他舍之間人和物的流動。

（2）消毒措施。對發(fā)病舍及四周進(jìn)行嚴(yán)格消毒。

（3）緊急接種措施。對發(fā)病舍及整個豬場豬群緊急接種正規(guī)廠家豬瘟高效細(xì)胞苗（發(fā)病舍每頭接種4頭份，其他豬群每頭接種2頭份）。間隔2周再加強(qiáng)免疫1次（按照豬瘟高效細(xì)胞苗使用說明書推薦劑量進(jìn)行免疫）。

（4）對發(fā)病仔豬肌肉注射正規(guī)廠家生產(chǎn)的黃芪多糖和長效土霉素（按照藥物說明書使用）。

通過采取上述措施，兩周后豬場發(fā)病仔豬死亡率已大幅下降，僅零星死亡。發(fā)病仔豬食欲及飲欲明顯得到好轉(zhuǎn)。

該豬場母豬曾1年2次用豬瘟脾淋苗進(jìn)行豬群免疫，仍出現(xiàn)仔豬發(fā)生豬瘟現(xiàn)象。這可能與豬瘟脾淋苗質(zhì)量不合格有關(guān)。建議該豬場免疫豬瘟疫苗后進(jìn)行免疫監(jiān)測，測其抗體水平，以確保豬群豬瘟疫苗免疫合格。

[1]單虎，李明義，沈志強(qiáng).現(xiàn)代獸醫(yī)獸藥大全[M].北京：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，2011：304-307.

[2]蔡寶祥.家畜傳染病學(xué)[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，1999：147-151.

[3]蔡奕琪，朱燕秋，王悅彬.2001—2008年豬瘟抗體和豬瘟病毒監(jiān)測結(jié)果分析[J].養(yǎng)豬，2009（3）：73-74.

[4]韓慶功，崔艷紅，張智勇.ELISA檢測技術(shù)在豬瘟診斷中的應(yīng)用[J].生物技術(shù)通報，2007（5）：76-83.

（編輯：柳青）

孫思邈的“順時氣”養(yǎng)生法

初唐著名醫(yī)學(xué)家、百歲老人孫思邈，有“孫真人”“藥王”之稱。他結(jié)合自己長期的實踐經(jīng)驗，提出在不同的季節(jié)里，應(yīng)有不同的生活方式。他在《千金要方》中說：“衣食寢處皆適，能順時氣者，始盡養(yǎng)生之道?！?/p>

春季，生之氣

可晚睡早起，多在戶外。心情要舒暢，可踏青問柳，登山賞花，陶冶性情。

飲食上可吃些麥、蔥、花生、香菜等辛甘發(fā)散之品。春天減衣服不要太快，即“春捂”。但衣服可穿薄一點，頭腳不要穿戴太厚。

夏季，長之季

可以晚睡早起，使志無怒。要注意心神的保養(yǎng)、精神的調(diào)攝，以達(dá)到“心靜自然涼”的效果。

飲食上宜食清淡、少油膩、易消化之品，切忌貪涼飲冷。宜用清心瀉火消暑之品，如苦瓜、赤豆、綠豆、西瓜等。

秋季，收之氣

應(yīng)早睡早起，多曬太陽，注意養(yǎng)“收之氣”。

多吃些蜂蜜、百合、蓮子、銀耳等清補(bǔ)潤燥之品。晨起要按摩，順應(yīng)陽氣；入夜后不要出聲誦讀，以防寒氣侵襲。無禁忌癥的話，每天讓機(jī)體“凍一凍”，即“秋凍”，可提高抗病能力，如進(jìn)行冷水浴等。

冬季，藏之氣

宜早睡晚起，應(yīng)養(yǎng)“藏之氣”，保持一種知足常樂的心理狀態(tài)。

多吃溫?zé)嶂?，如羊肉、雞肉、狗肉等。素體陰虧者，宜進(jìn)食阿膠、龜肉、鰻魚、黑木耳等滋補(bǔ)陰液之品及用藥酒防寒侵。不要過度活動，最好待日出后活動。注意保暖，但不要過度溫暖，“冬日凍腦”對提高人體的適應(yīng)能力、抵抗力是有幫助的。

（轉(zhuǎn)自《健康養(yǎng)生》2015-5期鄺棗園/文）

長壽老人炎癥水平低

日本慶應(yīng)義塾大學(xué)百壽綜合研究中心和英國紐卡斯?fàn)柎髮W(xué)公布的一項研究發(fā)現(xiàn)：長壽老人體內(nèi)的炎癥水平較低，且端粒較長。

研究人員以684名百歲老人及其536名85～99歲高齡家屬為對象，檢測分析了他們的造血、代謝、肝腎功能以及細(xì)胞老化（端粒體長度）等生化指標(biāo)，從中發(fā)現(xiàn)兩個共同特征，即端粒體更長和體內(nèi)不容易發(fā)炎。隨著年歲增長，那些長壽老人與普通老人相比，端粒體能保持更長的長度，他們80來歲時的端粒體長度與60來歲時的平均長度相等。同時，在百歲老人及其直系子孫體內(nèi)，隨著年歲增長而增多的炎癥標(biāo)志物出現(xiàn)得更少。

日本研究團(tuán)隊另一項涉及1 554名高齡老人及其子女的研究也顯示：體內(nèi)炎癥標(biāo)志物最少的老人，認(rèn)知功能和生活自理能力也更強(qiáng)。抑制慢性炎癥有助于人們放緩衰老速度。

研究人員表示：炎癥是驅(qū)動人類衰老進(jìn)程的重要因素之一，他們希望能從抑制炎癥的角度，開發(fā)出能有效改善老人生活質(zhì)量的方法。

（轉(zhuǎn)自《晚晴·環(huán)球老年》姚力杰/文）

S858.285.3

A

1002-1957(2016)04-0108-02

2016-05-30

山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院院地科技合作引導(dǎo)計劃項目（214 YDHZ32）；山東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系生豬創(chuàng)新團(tuán)隊項目（SDAIT-06-022-15）

魏鳳（1979-），女，河南遂平人，助理研究員，碩士，主要從事生物制品研究工作.E-mail：xuehan2008@126.com