婁 麗，侯 娜，李 茂，鄧倫秀

(貴州省林業(yè)科學(xué)研究院，貴州 貴陽(yáng) 550005)

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虎舌紅不同類型葉黃酮含量及抗氧化活性研究*

婁 麗，侯 娜，李 茂，鄧倫秀▲

(貴州省林業(yè)科學(xué)研究院，貴州 貴陽(yáng) 550005)

以虎舌紅不同類型葉為試材，以蘆丁作為參照，利用比色法測(cè)定還原力與羥自由基作為判定抗氧化活性強(qiáng)弱的綜合指標(biāo)，對(duì)虎舌紅不同類型葉總黃酮含量及抗氧化性進(jìn)行比較研究。結(jié)果表明：虎舌紅不同類型中紅毛紅花的虎舌紅葉總黃酮含量最大，含量達(dá)到20.908mg/g，紅毛紅花的虎舌紅葉抗氧化性最好。

虎舌紅，黃酮，抗氧化活性

虎舌紅(Ardisiamamillata)紫金?？谱辖鹋僦参铮植加谀戏礁魇?，作為集藥療和觀賞為一體的植物?；⑸嗉t含有生物堿、多糖、揮發(fā)油、黃酮等多種有效成分[1-4]，黃酮類化合物是紫金牛屬植物的重要活性化合物之一，其具有清除自由基、治療心血管系統(tǒng)疾病、降血脂、降血壓、抗病毒、鎮(zhèn)痛等功效[5]，開(kāi)發(fā)前景廣闊。目前，凌育趙等通過(guò)紅外光譜法對(duì)虎舌紅提取物的總黃酮進(jìn)行測(cè)定[8]，而有關(guān)綜合探究虎舌紅不同類型的葉黃酮含量及抗氧化活性研究尚未見(jiàn)報(bào)道。本試驗(yàn)在對(duì)虎舌紅不同類型葉黃酮含量測(cè)定的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步探討虎舌紅不同類型葉黃酮的還原力及對(duì)羥自由基清除效果，以期開(kāi)發(fā)利用虎舌紅資源提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試材料為貴州野生珍稀花木中試基地培育的不同類型虎舌紅葉片(紅花紅毛、紅花白毛、綠葉、紅葉白毛)，于2015年9月采集成熟葉，清洗后在40℃烘箱中烘干至恒重粉碎，過(guò)60目篩備用。

試劑：乙醇、蘆丁標(biāo)準(zhǔn)樣(西安榮升有限公司)、硝酸鋁、氫氧化鈉、亞硝酸鈉、硫酸亞鐵、鄰二氮菲、硝酸鋁。

儀器：中草藥粉碎機(jī)FW117(天津泰斯特儀器有限公司)；GR-200電子天平； LD5-10型離心機(jī)；EPOCH超微量微孔板分光光度計(jì)。

1.2 試驗(yàn)方法

先提取虎舌紅不同類型葉的提取物黃酮，然后進(jìn)行還原力測(cè)定和羥自由基清除率試驗(yàn)，根據(jù)虎舌紅各樣品測(cè)定結(jié)果進(jìn)行抗氧化活性綜合評(píng)價(jià)。吸光度值越大表明該虎舌紅樣品的還原力越強(qiáng)，羥自由基清除率越大，表明該虎舌紅樣品的抗氧化性越強(qiáng)。

1.3 項(xiàng)目測(cè)定

準(zhǔn)確稱蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品2.0 mg，置于10 mL容量瓶中，加入70 %乙醇溶液適量，超聲波溶解，繼續(xù)加入70 %乙醇溶液溶定容至刻度，搖勻，即20 μg/mL的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)溶液。精密吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL于25 mL的容量瓶中，加入1.0 mL濃度為50 mg/mL的硝酸鋁溶液1.0 mL，搖勻，放置6 min，再加入40 mg/mL的氫氧化鈉溶液8 mL，搖勻，用無(wú)水乙醇定容至刻度，搖勻，放置15 min，用EPOCH超微量微孔板分光光度計(jì)在510 nm波長(zhǎng)測(cè)定吸光值。以蘆丁濃度C對(duì)吸光值A(chǔ)做曲線得到此方程y= 0.005 05x+ 0.076 75(R2= 0.999 01)。標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1。由該方程計(jì)算虎舌紅不同類型葉黃酮的質(zhì)量濃度C，并計(jì)算萃取率。

圖1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線

樣品中黃酮提取率計(jì)算公式：

E=y×V/(W×VI×1 000)

式中：E為樣品的總黃酮提取率(以蘆丁計(jì)算)；A為樣品溶液顯色后的吸光值；V為樣液總體積，mL；V1為檢測(cè)時(shí)取樣體積，mL；W為虎舌紅樣品質(zhì)量，g。

1.4 還原力的測(cè)定

吸取虎舌紅葉黃酮提取物的樣品溶液2 mL置于試管中，先加入濃度為0.2 mol/L的pH為5.6磷酸緩沖液2.0 mL，然后加入1 %的鐵氰化鉀2.0 mL，搖勻后置于50℃水浴20 min，水浴后急速冷卻，最后加入2.5 mL濃度為10 %的三氯乙酸，3 000 r/min條件下離心10 min。取上清液5.0 mL，加入4.0 mL蒸餾水和1 mL濃度為0.1 %的氯化鐵水溶液，搖勻后反應(yīng)10 min，以蒸餾水為參比，用EPOCH超微量微孔板分光光度計(jì)在700 nm下測(cè)定吸光值。通過(guò)吸光值的大小判定還原力的強(qiáng)弱。

1.5 對(duì)羥自由基清除能力的測(cè)定

采用改進(jìn)的水楊酸法對(duì)羥自由基的清除能力[6]進(jìn)行測(cè)定。吸取1 mL虎舌紅提取液，依次加入9 mmol/L硫酸亞鐵0.5 mL，9 mmol/L水楊酸溶液1 mL，最后加入30 %過(guò)氧化氫溶液0.5 mL啟動(dòng)反應(yīng)，搖勻，靜置10 min，以30 %過(guò)氧化氫作為參比，用EPOCH超微量微孔板分光光度計(jì)于510 nm處測(cè)定反應(yīng)體系的吸光度，記為A1；不加提取液的吸光值記為A0，不加水楊酸溶液的吸光值記為A2，計(jì)算羥自由基清除率：

清除率(%)=A0-A1+A2/A0×100

2 結(jié)果與分析

2.1 虎舌紅不同類型的總黃酮量比較

由表1可看出虎舌紅不同類型的黃酮含量存在差異，其中黃酮含量以虎舌紅的紅毛紅花類型為最高，達(dá)到20.908 mg/g，虎舌紅其他類型的黃酮含量大小依次為：紅毛白花>綠葉>紅葉白毛。有研究表明：遺傳與環(huán)境是影響植物次生代謝物的兩個(gè)主要方面[7]。本試驗(yàn)采樣的不同類型虎舌紅立地條件、栽培管理措施一致，因此，造成不同類型間虎舌紅的黃酮含量的差異主要來(lái)源于遺傳的差異。

表1 虎舌紅不同類型的總黃酮含量統(tǒng)計(jì)表

2.2 虎舌紅不同類型提取物的還原力

從圖2可以看出，虎舌紅不同類型還原能力存在差異，其中紅毛紅花抗氧化活性最強(qiáng)，510 nm處最大吸光值為0.384，而紅葉白毛虎舌紅的抗氧化活性最小，吸光值為0.184。因此，虎舌紅不同類型的還原力為：紅毛紅花>紅毛白花>綠株>紅葉白毛。因此，虎舌紅不同類型葉提取物的還原力與黃酮含量有相關(guān)性。

圖2 虎舌紅不同類型提取物的還原力

2.3 虎舌紅不同類型提取物清除羥自由基的能力

由圖3看見(jiàn)，虎舌紅不同類型的提取物對(duì)羥自由基有一定的清除能力，紅葉白毛虎舌紅的提取物對(duì)羥自由基的清除率相對(duì)其他品種較弱，清除率為29.3 %；紅毛紅花、紅毛白花、綠株的虎舌紅三類型對(duì)羥自由基的清除率在37.8 %～40.0 %，紅花紅毛的虎舌紅對(duì)羥自由基的清除率最強(qiáng)，清除率為40.0 %。

圖3 虎舌紅不同類型提取物清除羥自由基的能力

3 結(jié)論與討論

研究結(jié)果表明紅毛紅花的虎舌紅總黃酮體外還原力和對(duì)羥自由基有較好的清除率，其中紅毛紅花虎舌紅的總黃酮含量最大，達(dá)到20.908 mg/g，其他三類型虎舌紅的總黃酮含量為：16.602～12.011 mg/g，試驗(yàn)結(jié)果與凌育趙應(yīng)用紅外光譜法測(cè)得虎舌紅中的總黃酮含量為19.47 mg/g有一定差異[8]。這可能源于采用的測(cè)定黃酮的方法和采用虎舌紅材料的不同造成的結(jié)果?；⑸嗉t中紅毛紅花、紅毛白花還原力分別為0.384、0.364，相對(duì)綠株、紅葉白毛均較好；不同類型虎舌紅提取物對(duì)羥自由基清除力紅毛紅花最強(qiáng)，對(duì)羥自由基清除率為40.0 %，紅毛白花、綠株清除率無(wú)太大差異，羥自由基清除率最小為紅葉白毛。虎舌紅葉片提取液中總黃酮的抗氧化性研究表明，在本實(shí)驗(yàn)中紅毛紅花總黃酮含量最大，其提取液對(duì)羥自由基有較好的清除作用及還原效果。

抗氧化活性研究表明，虎舌紅總黃酮含量越高，抗氧化效果越強(qiáng)，紅毛紅花優(yōu)于其他三類虎舌紅?；⑸嗉t資源在我國(guó)稀少，在南方各地有野生資源，而且虎舌紅在觀賞方面得到越來(lái)越廣泛的應(yīng)用，但其抗氧化等藥理活性價(jià)值并未充分利用，本實(shí)驗(yàn)中表明黃酮含量較高，其抗氧化性較強(qiáng)。因此，虎舌紅總黃酮物質(zhì)具有抗氧化活性，使其有望作為天然抗氧化劑利用其功能性的開(kāi)發(fā)利用，具有較高的研究?jī)r(jià)值。為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)虎舌紅總黃酮天然抗氧化劑提供了科學(xué)依據(jù)。

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Total flavonoids content in different types of Ardisia mamillata and their antioxidant activity*

LOU Li，HOU Na，LI Mao，DENG Lunxiu▲

(GuizhouForestryofAcadamy，Guiyang550005，China)

Using different types ofArdisiamamillataas research objects，Rutin as reference，reducing power and hydroxyl free radical(determined by colorimetric method)as comprehensive indexes to evaluate the antioxidant activity，we compared the total flavonoids content in different types ofArdisiamamillataand their antioxidant activity.The results showed that，Ardisiamamillatawith red flowers and red villi had the highest flavonoids content，up to 20.908 mg/g，therefore it had the highest antioxidant activity.

Ardisiamamillata，flavonoids，antioxidant activity

R

A

2016-09-09；

2016-10-09

貴州省科技廳服務(wù)企業(yè)行動(dòng)計(jì)劃“貴州鄉(xiāng)土珍稀花卉研發(fā)團(tuán)隊(duì)服務(wù)企業(yè)行動(dòng)計(jì)劃”(項(xiàng)目編號(hào)：黔科合平臺(tái)人才[2016]5711)；貴州省林業(yè)廳項(xiàng)目“珍稀觀賞植物虎舌紅苗木繁育關(guān)鍵技術(shù)研究”(項(xiàng)目編號(hào)：黔林科合J字[2012])；貴州省科技廳中藥現(xiàn)代化項(xiàng)目“花椒屬、紫金牛屬藥用植物資源圃營(yíng)建與良種”(項(xiàng)目編號(hào)：黔科合ZY字[2012]3002號(hào))。

婁 麗(1989-)，女，貴州貴陽(yáng)人，研究員，研究方向：林木生物技術(shù)。

▲通訊作者：鄧倫秀(1969-)，女，貴州桐梓人，研究員，研究方向：園林植物培育。