馮煥琴,徐雪風(fēng),楊宏偉,沈?qū)氃?胡 靜,李朝周,*

(1.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院,甘肅蘭州 730070;2.甘肅省作物遺傳改良和種質(zhì)創(chuàng)新重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,甘肅蘭州 730070;3.甘肅條山農(nóng)林科學(xué)研究所,甘肅白銀 730400)

?

藜麥種子皂苷不同提取方法的比較研究

馮煥琴1,2,徐雪風(fēng)1,2,楊宏偉1,2,沈?qū)氃?,胡 靜3,李朝周1,2,*

(1.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院,甘肅蘭州 730070;2.甘肅省作物遺傳改良和種質(zhì)創(chuàng)新重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,甘肅蘭州 730070;3.甘肅條山農(nóng)林科學(xué)研究所,甘肅白銀 730400)

目的:比較藜麥種子皂苷的不同提取方法,確定最佳提取條件。方法:采用超聲提取法、甲醇回流法和乙醇回流法三種不同方法,在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,通過正交實(shí)驗(yàn)確定最佳的提取溫度、提取時間、提取液濃度和料液比。結(jié)果:藜麥種子皂苷提取的最佳方法為超聲提取法,最佳提取條件為在60 ℃溫度,90%乙醇濃度,1∶15 g/mL的料液比條件下提取1 h,在此條件下皂苷含量為5.06 mg/g。結(jié)論:超聲提取法適宜提取藜麥種子皂苷,該研究可為藜麥種子皂苷的提取開發(fā)利用提供理論依據(jù)和技術(shù)參考。

藜麥,皂苷,正交實(shí)驗(yàn),超聲提取法,甲醇回流法,乙醇回流法

藜麥(Chenopodium quinoa willd)又名南美藜、印第安麥等,為藜科藜屬雙子葉植物,原產(chǎn)于安第斯山脈地區(qū),已有五千多年的種植歷史,是安第斯山脈重要的糧食作物之一[1]。藜麥具有很高的營養(yǎng)價(jià)值,被列為全球十大營養(yǎng)食品之一,不僅富含蛋白質(zhì)及鈣、鐵、鋅和維生素E等微量營養(yǎng)素,而且含有人體所需的全部必需氨基酸,富含多種生物活性物質(zhì)。研究表明,長期食用藜麥,對心臟病、高血壓、高血糖、高血脂等有很好輔助治療作用,此外還有增強(qiáng)免疫力、修復(fù)體力、補(bǔ)充營養(yǎng)、減肥等功效[2-3]。近年來,我國不斷從國外引進(jìn)并種植藜麥,在栽培技術(shù)和物質(zhì)提取方面也取得了一定的進(jìn)展。

皂苷對人體的作用越來越受到人們的重視,研究表明皂苷對腸道有一定的刺激作用,可以改善人體腸道對多種營養(yǎng)物質(zhì)和藥物的吸收[4-5],Estrada[6]等認(rèn)為皂苷對病毒性疾病也有一定的抗性,研究者也用不同的方法從人參[7]、大豆[8]及苦瓜[9]等植物中進(jìn)行了皂苷的提取和含量的測定。據(jù)報(bào)道,藜麥種子中含有0.1%～5%的皂苷,Bramd[10]等認(rèn)為熱加工工藝處理會降低藜麥粉末中皂苷的含量,Stuardo[11]等認(rèn)為堿處理后的藜麥外殼中含有大量的皂苷衍生物,對灰霉病具有較強(qiáng)的抗病性。然而,尚未找到國內(nèi)有關(guān)藜麥種子皂苷提取及含量測定方面的研究。

目前關(guān)于皂苷得提取方法主要有回流法[12]、超聲波提取法[13-14]、閃式提取法[15]以及CO2超臨界萃取法[16]。其中,回流提取法和超聲波提取法具有操作簡便、提取時間短、對設(shè)備要求不高等優(yōu)點(diǎn),而被廣泛應(yīng)用。張晶[17]等在對人參皂苷進(jìn)行提取時,發(fā)現(xiàn)以乙醇為溶劑時,人參皂苷的提取率(5.25%)明顯高于以甲醇為溶劑時的提取率(3.25%)。然而,李維莉等[18]對重樓中皂苷提取的研究表明,甲醇為最佳溶劑。因此,本實(shí)驗(yàn)采用超聲提取法,甲醇回流提取法和乙醇回流提取法三種不同的提取方法,對藜麥種子總皂苷進(jìn)行提取。通過單因素實(shí)驗(yàn)及正交實(shí)驗(yàn)的研究,以總皂苷的含量為指標(biāo),選出最佳的提取方法和提取條件,以期為藜麥皂苷的提取和開發(fā)利用提供科學(xué)的理論依據(jù)和技術(shù)參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

藜麥種子為加拿大Salt spring seed company提供的Kasala quinoa品種,于景泰條山集團(tuán)種植收獲的種子。人參皂苷Rg1對照品 上海源葉生物科技有限公司;乙醇為無水乙醇與去離子水配制;甲醇為99.9%甲醇與去離子水配制;5%香草醛溶液(500 mg香草醛溶于10 mL冰乙酸,現(xiàn)配);冰乙酸、高氯酸、正丁醇、石油醚等試劑均為分析純。

1740QT超聲波清洗儀 北京科璽世紀(jì)科技有限公司;HH-6數(shù)顯恒溫水浴鍋 國華電器有限公司;QE萬能粉碎機(jī) 浙江屹立工貿(mào)有限公司;SP-752紫外可見分光光度計(jì) 上海楚度儀器設(shè)備有限公司;JJ200B電子天平 北京尚德利衡電子衡器有限公司;TDZ4-WS低速離心機(jī) 長沙高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)開發(fā)區(qū)湘儀離心機(jī)儀器有限公司;RE-5250旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 上海亞榮生化儀器廠。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取在60 ℃減壓干燥至恒重的人參皂苷 Rg1對照品2.42 mg于25 mL量瓶中,加60%甲醇溶解并稀釋到刻度,搖勻,即為每毫升含0.0968 mg的對照品溶液[19]。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密吸取0.50、0.75、1.00、1.25、1.50、1.75 mL的對照品溶液,分別置于10 mL具塞試管中,揮干溶劑,加入新配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0.20 mL,高氯酸0.80 mL,在60 ℃水浴中加熱15 min,立即置冷水中冷卻,加入冰醋酸5 mL搖勻,放置15 min,相應(yīng)試劑隨行空白對照,測定560 nm處吸收度A,以吸收度為縱坐標(biāo),三七皂苷Rg1含量(mg)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線[20]。

1.2.3 供試樣品溶液的制備 取樣品材料1.00 g(80目),加入一定倍數(shù)相應(yīng)濃度的提取液,在相應(yīng)溫度下提取一定時間后,4000 r/min離心5 min,將濾液移至50 mL容量瓶中,濾渣以同樣倍數(shù)的提取液混勻,在同樣的條件下進(jìn)行二次提取,離心,將濾液并入上述容量瓶中。在提取工藝中改變相應(yīng)的參數(shù)[21-22]。

在上述溶液中加入15 mL石油醚脫脂后,用水飽和正丁醇萃取4次,每次10 mL,合并正丁醇萃取液,再用正丁醇飽和水洗滌2次(10 mL、5 mL),真空濃縮至干,用甲醇溶解,定容至50 mL,待測[23]。

1.2.4 總皂苷含量的測定 取供試樣品溶液0.5 mL,揮干溶劑,按照標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制里面的方法顯色,測其吸光值,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算皂苷含量,取3次平均值作為測量結(jié)果。

1.2.5 單因素實(shí)驗(yàn) 分別以提取溫度、提取時間、提取液濃度和料液比為單一因素,研究不同水平下各因素對藜麥種子皂苷含量的影響。

1.2.5.1 提取溫度對藜麥種子皂苷含量的影響 取五個三角瓶,分別放入1.00 g藜麥種子粉末,料液比均為1∶5,提取液濃度為60%,控制溫度分別為40、50、60、70、80 ℃,回流時間均為0.5 h,按照1.2.2方法測定吸光值。

1.2.5.2 提取時間對藜麥種子皂苷含量的影響 取五個三角瓶,分別放入1.00 g藜麥種子粉末,料液比均為1∶5,提取液濃度為60%,在40 ℃的水浴加熱條件下加熱回流提取,回流時間分別為0.5、1、1.5、2、2.5 h,提取液濃度為60%。按照1.2.4方法測定吸光值。

1.2.5.3 提取液濃度對藜麥種子皂苷含量的影響 取五個三角瓶,分別放入1.00 g藜麥種子粉末,料液比均為1∶5,在40 ℃的水浴加熱條件下回流提取,回流時間均為0.5 h,提取液濃度分別為50%、60%、70%、80%、90%。按照1.2.4方法測定吸光值。

1.2.5.4 料液比對藜麥種子皂苷含量的影響 取五個三角瓶,分別放入1.00 g藜麥種子粉末,提取液濃度為60%,在40 ℃的溫度下回流提取,回流時間均為0.5 h,料液比分別為1∶5、1∶10、1∶15、1∶20、1∶25。按照1.2.4方法測定吸光值。

1.2.6 正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) 在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,以提取溫度、提取時間、提取液濃度和料液比為考察因素,設(shè)計(jì)L9(34)正交實(shí)驗(yàn)來確定超聲提取法、甲醇回流法和乙醇回流法的最佳提取條件(表1),并通過比較藜麥種子皂苷含量來確定提取皂苷的最佳方法。

表1 藜麥種子皂苷不同提取法正交實(shí)驗(yàn)因素水平表Table 1 Factors and levels of orthogonal test of quinoa seeds saponin by different extraction methods

2 結(jié)果與分析

2.1 超聲提取法

圖1 各因素對藜麥種子皂苷含量的影響Fig.1 Effect of each factor on the saponin content of quinoa seeds

2.1.1 單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果 圖1A表示超聲溫度對藜麥種子皂苷含量的影響,由圖可知,隨著超聲溫度的增加,藜麥種子皂苷含量逐漸升高,當(dāng)溫度達(dá)到60 ℃左右時,皂苷含量顯著增加,從1.35 mg/g增加到1.87 mg/g,因此,藜麥種子超聲溫度范圍選擇在50～70 ℃。超聲時間對藜麥種子皂苷含量的影響如圖1B,隨著超聲時間的增加,藜麥種子和提取劑接觸時間增長,皂苷含量明顯升高,當(dāng)超聲時間達(dá)到1.5 h時,皂苷含量顯著增加并達(dá)到最大值1.29 mg/g,因而選擇超聲時間范圍為1～2 h。由圖1C可知,隨著提取液中乙醇濃度的增加,藜麥種子中更多的皂苷轉(zhuǎn)移到提取液中,皂苷含量逐漸升高,當(dāng)乙醇濃度為80%時,皂苷含量達(dá)到最大值2.19 mg/g,因而選取乙醇濃度范圍為70%～90%。由圖1D可知,隨著料液比的增加,藜麥種子皂苷含量逐漸增高,當(dāng)料液比達(dá)到1∶10時,藜麥種子皂苷含量達(dá)到最大值,選取料液比范圍為1∶5～1∶15。

2.1.2 正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)結(jié)果 單因素確定超聲提取法提取藜麥種子皂苷的適宜條件為:超聲溫度60 ℃,超聲時間1.5 h,乙醇濃度為80%,料液比為1∶10,在此基礎(chǔ)上以藜麥種子皂苷含量為評價(jià)指標(biāo)進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn),結(jié)果見表2、表3。

表2 超聲提取法提取藜麥種子皂苷正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果Table 2 Orthogonal experiment design and results of extracting saponin from quinoa seeds by ultrasonic extraction

表3 超聲提取法提取藜麥種子皂苷正交實(shí)驗(yàn)方差分析Table 3 Analysis of variance(ANOVA)of the orthogonal experiment extracting total saponin from quinoa seeds by ultrasonic extraction

由表2的正交實(shí)驗(yàn)分析結(jié)果可知,在四個因素中,影響藜麥種子總皂苷含量的主次順序?yàn)?乙醇濃度>料液比>超聲溫度>超聲時間。由表3的方差分析也可以看出,提取液濃度和料液比對藜麥種子皂苷含量影響最大,達(dá)到顯著水平,而超聲溫度和超聲時間這兩個因素對藜麥種子皂苷含量的影響則較小,未達(dá)顯著水平。K值確定的最優(yōu)組合為A2B1C3D3,即在60 ℃的溫度,90%的乙醇濃度,1∶15的料液比條件下提取1 h。

2.2 甲醇回流提取法

圖2 各因素對藜麥種子皂苷含量的影響Fig.2 Effect of each factor on the saponin content of quinoa seeds

2.2.1 單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果 圖2A表示提取溫度對藜麥種子皂苷含量的影響,隨著提取溫度的增加,提取液流動性變大,藜麥種子皂苷含量逐漸增加,在提取溫度達(dá)到60 ℃的時候顯著增加并達(dá)到最大值1.87 mg/g,提取溫度范圍選擇為50～70 ℃。由圖2B可見,隨著時間的增加,藜麥種子皂苷含量逐漸增加,當(dāng)提取時間達(dá)到1 h時皂苷含量達(dá)到最大,藜麥種子皂苷提取時間范圍選取為0.5～1.5 h。圖2C中,隨著甲醇濃度的增加,藜麥種子皂苷含量呈現(xiàn)上升趨勢,且當(dāng)甲醇濃度達(dá)到80%時,皂苷含量達(dá)到最大值。因此,在藜麥種子皂苷提取中,甲醇濃度范圍均選取為70%～90%。料液比對藜麥種子皂苷含量的影響見圖2D,當(dāng)液料比為1∶5時,皂苷含量為0.40 mg/g,當(dāng)料液比達(dá)到1∶10時,材料接觸面積達(dá)到最優(yōu),總皂苷含量顯著增加并達(dá)到1.87 mg/g。因而,確定選取料液比范圍為1∶5～1∶15。

2.2.2 正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)結(jié)果 單因素確定的甲醇回流法提取藜麥種子皂苷的適宜條件為:提取溫度60 ℃,提取時間1 h,甲醇濃度80%,液料比1∶10。在此基礎(chǔ)上以藜麥種子皂苷含量為評價(jià)指標(biāo)進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn),見表4,表5。

表4 甲醇回流提取法提取藜麥 種子皂苷正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果Table 4 Orthogonal experiment design and results of extracting saponin from quinoa seeds by methanol reflux extraction

表5 甲醇回流提取法提取藜麥種子皂苷正交實(shí)驗(yàn)方差分析Table 5 Analysis of variance(ANOVA)of the orthogonal experiment extracting saponin from quinoa seeds by methanol reflux extraction

由表4的正交實(shí)驗(yàn)分析結(jié)果可知,影響藜麥種子皂苷含量的主次因素為:甲醇濃度>料液比>提取溫度>提取時間。由表5的方差分析可知,甲醇濃度對藜麥種子皂苷含量影響最大,且達(dá)到顯著水平,提取溫度,提取時間以及料液比對藜麥種子皂苷含量影響較小,未達(dá)顯著水平。由K值確定的最優(yōu)組合為A2B3C3D3,即在60 ℃溫度,90%的甲醇濃度和1∶15的液料比條件下提取1.5 h。

2.3 乙醇回流提取法

圖3 各因素對藜麥種子皂苷含量的影響Fig.3 Effect of each factor on the saponin content of quinoa seeds

2.3.1 單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果 圖3A表示在提取溫度對藜麥種子皂苷含量的影響,隨著提取溫度的變化,在溫度達(dá)到60 ℃時藜麥種子皂苷含量顯著增加并達(dá)到最大值1.82 mg/g,隨后逐漸下降并基本保持不變。因此,溫度范圍選擇為50～70 ℃。提取時間對藜麥種子皂苷含量的影響趨勢見圖3B,當(dāng)提取時間為1 h時,皂苷含量均顯著增加達(dá)到最大值1.59 mg/g,繼續(xù)增加時間,皂苷含量逐漸下降。因此,選取提取時間范圍為0.5～1.5 h。圖3C中,隨著提取液中乙醇濃度的增加,藜麥種子皂苷含量逐漸升高,當(dāng)乙醇濃度達(dá)到80%時,皂苷含量顯著增加并達(dá)到最大值3.17 mg/g。因此,選取乙醇濃度范圍為70%～90%。由圖3D可知,隨著料液比的增加,藜麥種子皂苷含量呈上升趨勢,當(dāng)液料比達(dá)到1∶10時,藜麥種子皂苷含量達(dá)到最大值,繼續(xù)增加料液比,皂苷含量逐漸下降。因此,選取料液比范圍為1∶5～1∶15。

2.3.2 正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)結(jié)果 單因素實(shí)驗(yàn)確定乙醇回流提取法提取藜麥種子皂苷的適宜條件為:提取溫度60 ℃,提取時間1 h,乙醇濃度80%,料液比為1∶10,在此基礎(chǔ)上以藜麥種子皂苷含量為評價(jià)指標(biāo)進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn),結(jié)果見表6、表7。

表6 乙醇回流提取法提取藜麥種子 皂苷正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果Table 6 Orthogonal experiment design and results of extracting saponin from quinoa seeds by ethanol reflux extraction

由表6可知,在四個因素中,影響藜麥種子皂苷含量的主次因素順序?yàn)?乙醇濃度>料液比>提取時間>提取溫度。表7的方差分析顯示,提取液中乙醇濃度對藜麥種子皂苷含量影響最大,達(dá)顯著水平。確定的最優(yōu)組合為A1B2C3D3,即在50 ℃溫度,90%的乙醇濃度和1∶15料液比的條件下提取1 h。

表7 乙醇回流提取法提取藜麥種子 皂苷正交實(shí)驗(yàn)方差分析Table 7 Analysis of variance(ANOVA)of the orthogonal experiment extracting saponin from quinoa seeds by ethanol reflux extraction

2.4 驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)

通過正交實(shí)驗(yàn)可得出超聲提取法、甲醇回流法和乙醇回流法的最優(yōu)提取條件,但因?yàn)樽顑?yōu)條件在正交實(shí)驗(yàn)里沒有出現(xiàn),因而需要做驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn),以此來驗(yàn)證正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。從表8可以看出,超聲提取法提取藜麥種子皂苷含量比甲醇回流法和乙醇回流法的高,由此可以看出,超聲提取法占有相對的優(yōu)勢。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)通過三個不同方法對藜麥種子皂苷進(jìn)行提取,分別對超聲提取法、甲醇回流提取法和乙醇回流提取法提取工藝進(jìn)行了研究。在單因素的基礎(chǔ)上,篩選出正交實(shí)驗(yàn)所需的最佳提取條件,和單因素相比,由于正交實(shí)驗(yàn)中各個因素都處于最優(yōu)狀態(tài),因而皂苷含量顯著增加,在不考慮交互作用的情況下,得出超聲提取法的各個因素中對藜麥種子皂苷含量影響主次順序?yàn)?乙醇濃度>料液比>超聲溫度>超聲時間,甲醇回流法中的各個因素對藜麥種子皂苷含量影響主次因素為:甲醇濃度>料液比>提取溫度>提取時間,乙醇回流法中各因素對藜麥種子皂苷含量影響主次因素順序?yàn)?乙醇濃度>料液比>提取時間>提取溫度。這都說明提取液濃度和料液比對藜麥種子皂苷提取有顯著差異,表明這兩個因素對藜麥種子皂苷含量影響較大。這個結(jié)論與孫于杰[24]研究結(jié)果相一致,認(rèn)為乙醇體積分?jǐn)?shù)對皂苷含量影響顯著。李健[25]等研究表明,影響皂苷含量的主次因素為:提取時間>乙醇濃度>提取溫度>料液比,這可能與提取方法有關(guān)。

表8 不同方法提取藜麥種子皂苷的比較Table 8 Comparison among different methods of extracting saponin from quinoa seeds

三種不同方法提取的藜麥種子皂苷含量以乙醇回流提取法最低,超聲提取法最高。隨著提取溫度的升高,皂苷的溶解度增加,但當(dāng)溫度過高時,皂苷被破壞,反而不利于皂苷的提取。超聲提取法能在較低溫度下提取有效成分,從而避免高溫對皂苷成分的破壞[26-27]。在三種提取方法中,皂苷含量達(dá)到最大值,分析其原因,是因?yàn)槌曁崛》ɡ贸暡ㄔ谝后w介質(zhì)中產(chǎn)生巨大的壓力,從而對藜麥種子粉末產(chǎn)生巨大的沖擊,使得藜麥種子粉末中皂苷更容易轉(zhuǎn)移到提取液中,比另外兩種方法更加有效。Woldemichael[28]等研究表明,藜麥種子皂苷含量高達(dá)20%～30%,但藜麥中皂苷含量的高低受光照和土壤水分含量不同等因素的影響。本實(shí)驗(yàn)測得藜麥種子皂苷含量和Woldemichael等人的研究略有差異,可能是藜麥品種不同以及產(chǎn)地不同等因素所致。

4 結(jié)論

通過對超聲提取法、甲醇回流提取法和乙醇回流提取法提取藜麥種子皂苷的比較分析,確定超聲提取法提取藜麥種子皂苷含量最高,并通過單因素及正交實(shí)驗(yàn)確定超聲提取法提取藜麥種子皂苷的最佳條件為:提取溫度60 ℃,提取時間1 h,提取液濃度90%,料液比為1∶15,在此條件下提取的皂苷含量為5.06 mg/g。

甲醇回流提取法提取的藜麥種子皂苷含量低于超聲提取法,且甲醇回流提取法提取時間較長,甲醇毒性較大,因而較難普及。乙醇回流提取法用時雖和超聲提取法相當(dāng),但其提取的藜麥種子皂苷含量最低,同樣不適用于藜麥種子皂苷的提取。

綜合分析,超聲提取法提取的皂苷含量比甲醇回流法和乙醇回流法都要高,且有研究表明,超聲提取法有提取效率高,工藝運(yùn)行成本低,用時少,綜合經(jīng)濟(jì)效益顯著等優(yōu)點(diǎn)[29]。因而在藜麥種子皂苷的提取方法中以超聲提取法為最佳。

[1]王晨靜,趙習(xí)武,陸國權(quán),等.藜麥特性及開發(fā)利用研究進(jìn)展[J]. 浙江農(nóng)林大學(xué)學(xué)報(bào),2014,31(2):296-301.

[2]Bhargava A,Shukla S,Ohri D. et al. Chenopodium quinoa-An Indian perspective[J]. Industrial Crops and Products,2006,23(1):73-87.

[3]Vega-Gálvez A,Miranda M,Vergara J,et al. Nutrition facts and functional potential of quinoa(Chenopodium quinoa Willd.),an ancient Andean grain:a review[J]. Journal of the Science of Food and Agriculture,2010,90(15):2541-2547.

[4]Gee J M,Price K R,Ridout C L. Saponins of quinoa(Chenopodium quinoa):effects of processing on their abundance in quinoa products and their biological effects on intestinal mucosal tissue[J]. Journal of the Science of Food and Agriculture,1993,63(2):201-209.

[5]Oakenfull D,Sidhu G S. Could saponins be a useful treatment for hypercholesterolaemia[J]. European Journal of Clinical Nutrition,1990,44:79-88.

[6]Estrada A,LI Bing,Laarveld B. Adjuvant action of Chenopodium quinoa saponins on the induction of antibody responses to intragastric and intranasal administered antigens in mice[J]. Comp Immunol Microbiol Infect Dis,1998,21(3):225-236.

[7]楊雨,鄭斯文,金銀萍,等. 人參皂苷的提取分離方法研究進(jìn)展[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2014,42(5):214-217.

[8]梁曉芳,王步軍. 大豆中異黃酮和皂苷的提取、制備研究進(jìn)展[J]. 大豆科學(xué),2014,33(1):57-59.

[9]張武軍,黃穎楨,張玉燦. 超聲提取苦瓜皂苷的工藝優(yōu)化研究[J]. 中國農(nóng)學(xué)通報(bào),2015,31(34):128-134.

[10]Brady k,Ho c t,Rosen R T,et al. Effects of processing on the nutraceutical profile of quinoa[J]. Food Chem,2007,100(3):1209-1216.

[11]Stuardo M,Martin R S. Antifungal properties of quinoa(Chenopodium quinoa Willd.)alkali treated sponins against Botrytis cinerea[J]. Ind Crops Prod,2008,27(3):296-302.

[12]孫逸來. 不同提取方法對黃芪中免疫活性成分提取率的影響[J]. 科技展望,2015,33:181-182.

[13]劉江,段志剛,段寶忠,等. 南重樓中4種重樓皂苷超聲提取工藝[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2016,07:158-160.

[14]伊長文,葉麗勤,孟敏. 絲瓜皮中總皂苷超聲輔助提取工藝研究[J]. 安徽工程大學(xué)學(xué)報(bào),2016,01:1-4.

[15]郭殷銳,蘇雪芬,張廣唱,等. 正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選吳茱萸中吳茱萸堿和吳茱萸次堿的閃式提取工藝[J]. 廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2016,03:380-383.

[16]張樂,宋鳳瑞,王琦,等. 人參中稀有皂苷超臨界二氧化碳提取[J]. 應(yīng)用化學(xué),2010,27(3):1483-1485.

[17]張晶,陳全成,弓曉杰,等. 不同提取方法對人參皂苷提取率的影響[J]. 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2003,01:71-72.

[18]李維莉,彭永芳,李銀,等. 超聲法提取重樓中重樓皂苷的研究[J]. 中成藥,2010,02:218-220.

[19]謝茵,邢桂琴,劉秀芬. 三七提取液中三七總皂苷的分離純化工藝研究[J].山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2006,37(6):613-615.

[20]趙麗,朱善元,黃文強(qiáng),等. 田七須根總皂苷的提取工藝研究[J]. 黑龍江畜牧獸醫(yī),2016,10:160-161+166.

[21]張軍武,趙琦. 不同提取方法對黃芪總皂苷含量的影響[J]. 西部中醫(yī)藥,2012,25(4):26-28.

[22]曹珍艷,魏冰,李彬. 醇提濃縮法提取蒺藜皂苷的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 生物化工,2015,01:26-28.

[23]張中,謝明勇,王遠(yuǎn)興,等. 比色法測定苦瓜總皂苷[J]. 南昌大學(xué)學(xué)報(bào):理科版,2005,29(5):447-449.

[24]孫于杰,王瑩,侯林,等. 超聲法提取遠(yuǎn)志中細(xì)葉遠(yuǎn)志皂苷的工藝優(yōu)選[J]. 中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2012,18(2):53-55.

[25]李健,陳姝娟,劉寧. 肉桂總皂苷提取工藝的研究[J]. 天然產(chǎn)物研究與開發(fā),2008,20(5):922-925.

[26]縱偉,夏文水. 超聲強(qiáng)化提取大葉紫薇葉中總?cè)频难芯縖J]. 食品與機(jī)械,2006,22(2):14-16.

[27]張海容,劉露琛. 超聲提取青蒿多糖的工藝優(yōu)化[J]. 食品研究與開發(fā),2006,27(5):46-48.

[28]Woldemichael G M.,Wink M. Identification and biological activities of triterpenoid saponins from Chenopodium quinoa[J]. Agric Food Chem,2001,49(5):2327-2332.

[29]令狐晨,阿依吐倫·斯馬義.皂苷提取純化及其抗氧化活性的研究進(jìn)展[J]. 廣州化工,2015,43(6):7-10.

Comparative studies on different extraction process of saponin from quinoa seeds

FENG Huan-qin1,2,XU Xue-feng1,2,YANG Hong-wei1,2,SHEN Bao-yun3,HU Jing3,LI Chao-zhou1,2,*

(1.College of Life Science and Technology,Gansu Agricultural University,Lanzhou 730070,China;2.Gansu Key Laboratory of Crop Genetics & Germplasm Enhancement,Lanzhou 730070,China;3.Agricultural and Forestal Science Research Institution of Gansu Tiaoshan Group,Baiyin 730400,China)

Objective:Throughthecomparisonofdifferentextractionconditionsofsaponinfromquinoaseedsandselectthebestmethodsandoptimalprocess.Methods:Theeffectsofextractiontemperature,time,extractionconcentrationandratioofmaterialtoliquidonthecontentofsaponinwereinvestigatedbyorthogonaltestbasedonthesinglefactorexperiments,anddifferentmethodsincludingultrasonicextractionmethod,methanolrefluxmethodandethanolrefluxmethodwerecompared.Results:Theoptimumconditionswereextractiontimeof1h,extractiontemperatureof60 ℃,ethanolconcentrationof90%andliquidof1∶15(g∶mL).Underthiscondition,thecontentofsaponinwas5.06mg/g.Conclusion:Ultrasonicextractionmethodisthebestoneinsaponinextractionfromquinoaseeds.Thestudyprovidedascientifictheorysupportandtechnicalreferenceforthesaponinextractionfromquinoaseeds.

quinoa;saponin;orthogonaltest;ultrasonicextraction;methanolrefluxmethod;ethanolrefluxmethod

2016-04-25

馮煥琴(1992- )，女，碩士研究生，研究方向：天然產(chǎn)物的提取與分離，E-mail:1763451352@qq.com。

*通訊作者:李朝周(1963-)，男，博士，教授，主要從事植物抗性生理及相關(guān)領(lǐng)域的教學(xué)和研究，E-mail:licz@gsau.edu.cn。

國家科技支撐計(jì)劃課題項(xiàng)目(2012BAD06B03)；甘肅省農(nóng)牧廳項(xiàng)目(GNSW-2012-21)。

TS210.4

B

1002-0306(2016)21-0216-07

10.13386/j.issn1002-0306.2016.21.033