曾祥燕，顏萍花，王 淼，蔡 毅（廣西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，南寧 530001）

壯藥藤茶的生藥學(xué)鑒別研究Δ

曾祥燕＊，顏萍花，王 淼，蔡 毅#（廣西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，南寧 530001）

目的：建立壯藥藤茶的生藥學(xué)鑒別方法。方法：觀察壯藥藤茶原植物、藥材性狀和顯微鑒別特征；采用薄層色譜法（TLC）對藥材進(jìn)行定性鑒別。結(jié)果：藤茶原植物枝、葉、花形態(tài)特征顯著；藥材莖、須、葉鑒別特征顯著；藥材莖橫切面、葉橫切面、葉表面、粉末鑒別特征顯著；藥材的TLC圖斑點清晰，分離度好。結(jié)論：該研究所建方法可用于壯藥藤茶的生藥學(xué)鑒別。

藤茶；原植物鑒別；性狀鑒別；顯微鑒別；薄層色譜法；生藥學(xué)

藤茶為葡萄科蛇葡萄屬植物顯齒蛇葡萄Ampelopsis grossedentata（Hand.-Mazz.）W.T.Wang的干燥嫩莖葉，又名甜茶藤、端午茶、藤婆茶、龍須茶等。藥用始見于清代劉善述的《草木便方》[1]，其味甘、淡，性涼，有清熱解毒、利濕消腫功效，主治黃疸型肝炎、感冒風(fēng)熱、咽喉腫痛等癥，該藥在我國南方民間應(yīng)用廣泛[2]?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，藤茶內(nèi)含大量黃酮類物質(zhì)[3]，其中主要活性成分為二氫楊梅素，具有抗病毒、降血糖、降血脂、抗腫瘤、抗血栓、保肝護(hù)肝、抗氧化等作用[4-8]。為制訂壯藥藤茶質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和進(jìn)一步開發(fā)利用其資源，本試驗對其進(jìn)行了系統(tǒng)的生藥學(xué)鑒別研究。

1 材料

1.1 儀器

DM2500型光學(xué)顯微鏡、DFC500型圖像分析軟件、RM2145型半自動輪轉(zhuǎn)切片機(jī)（德國Leica公司）；FA1104型電子分析天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；KQ5200B型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司，功率：250 W，頻率：40 kHz）。

1.2 試劑

二氫楊梅素對照品（筆者自制，經(jīng)碳譜和氫譜確定結(jié)構(gòu)，高效液相色譜法測定純度＞98%）；硅膠G薄層板（青島海洋化工廠公司）；試驗所用試劑均為分析純，水為純化水。

1.3 藥材

藤茶藥材分別采于廣西不同地區(qū)（見表1），經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院蔡毅教授鑒定為真品（表中TC-4為對照藥材）。

表1 藤茶藥材來源Tab 1 Origin of A.grossedentata

2 方法與結(jié)果

2.1 原植物形態(tài)

木質(zhì)藤本。小枝圓柱形，有顯著縱棱紋，無毛。卷須二叉狀分枝，與葉對生。葉為1～2回羽狀復(fù)葉，2回羽狀復(fù)葉者基部一對3小葉，小葉卵圓形，卵橢圓形或長卵橢圓形，頂端急尖或漸尖；基部寬楔形或近圓形，邊緣有稀疏牙齒或小牙齒；羽狀脈約4對?；▋尚?，聚傘花序與葉對生或生于小枝頂端，長3～5 cm，總花梗長1～3 cm；花綠色，基部有小苞片；花萼盤狀；花瓣5；雄蕊5；與花瓣對生；花盤厚；子房與花瓣合生，有花柱。漿果近球形，直徑約7 mm，幼時綠色，后變紅色[9]，詳見圖1。

2.2 性狀鑒別

藥材皺縮彎曲。莖扁圓柱形，節(jié)膨大，光滑無毛，具細(xì)縱棱線；灰綠色或黃綠色；質(zhì)脆，易折斷，斷面黃白色。卷須二叉狀分枝，與葉對生；奇數(shù)羽狀復(fù)葉，皺縮，易碎。小葉展開呈卵形或卵狀矩圓形，邊緣具疏鋸齒，頂生小葉有柄，側(cè)生小葉無柄或有短柄；上表面灰褐色，下表面黃綠色；薄紙質(zhì)。氣微，味微甘，詳見圖2。

圖1 藤茶原植物圖Fig 1 Diagram of original plants of A.grossedentata

圖2 藤茶藥材圖Fig 2 Diagram of medicinal herb of A.grossedentata

2.3 顯微鑒別

將藤茶對照藥材各部位分別取樣，直徑1～5 mm，按石蠟切片法進(jìn)行切片（其余各批次藥材僅做滑走切片觀察），經(jīng)雙重染色法制成永久片。將共有的顯微特征進(jìn)行歸納描述，各部位特征為如下。

2.3.1 莖橫切面特征 多角形。表皮細(xì)胞1列，類方形或類圓形。皮層較窄，薄壁細(xì)胞3～12列，排列較疏松。外韌型維管束20～30個，環(huán)狀排列，外側(cè)具有中柱鞘纖維束；韌皮狹窄，薄壁細(xì)胞中可見棕色塊，分泌細(xì)胞常存在于韌皮射線處；木質(zhì)部較寬，次生木質(zhì)部有時未木化。髓部寬廣，薄壁細(xì)胞較大，可見淀粉粒。薄壁細(xì)胞中可見草酸鈣簇晶、針晶，方晶偶見，詳見圖3。

2.3.2 葉橫切面特征 葉上表皮主脈有明顯凸起，上、下表皮細(xì)胞1列扁平狀或長方形，排列緊密，可見氣孔，中脈處表皮細(xì)胞可見單細(xì)胞非腺毛。柵欄細(xì)胞1列，長方形；海綿細(xì)胞類圓形，排列疏松，常形成空隙，草酸鈣針晶多見于葉肉；維管束多分裂成4束，外韌型，韌皮部薄壁細(xì)胞含有較多的棕色塊。可見棕色塊、草酸鈣簇晶、草酸鈣針晶，詳見圖4。

2.3.3 葉表面片 上表皮細(xì)胞呈不規(guī)則形，排列緊密，垂周壁微彎曲。下表皮細(xì)胞垂周壁彎曲；氣孔為不等式氣孔軸式，詳見圖5。

圖3 藤茶莖橫切面圖Fig 3 Rhizome cross-section micrograph ofA.grossedentata

圖4 藤茶葉橫切面圖Fig 4 Leaf cross-section micrograph of A.grossedentata

圖5 藤茶葉表面片圖A.上表皮；B.下表皮Fig 5 Leaf surface micrograph of A.grossedentataA.upper epidermis；B.lower epidermis

2.3.4 粉末鑒別 粉末呈黃綠色。各種草酸鈣結(jié)晶常見，針晶成束或散在，長50～90 μm，有時存在于黏液細(xì)胞中；簇晶、方晶較多，直徑14～28 μm。棕色塊易見，呈方形或類方形，直徑35～80 μm。圓形或橢圓形分泌細(xì)胞偶見，直徑28～34 μm。可見單細(xì)胞非腺毛，直徑26～34 μm。導(dǎo)管為梯紋或螺紋導(dǎo)管。纖維壁平直或彎曲，可見孔溝。淀粉粒多為單粒，詳見圖6。

2.4 薄層色譜（TLC）鑒別

取本品粉末1 g，加甲醇15 ml，搖勻，冷浸12 h，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。另取二氫楊梅素對照品，加甲醇制成二氫楊梅素質(zhì)量濃度為5 mg/ml的對照品溶液。再取對照藥材粉末1 g，按供試品溶液制備方法制成對照藥材溶液。按TLC法[2015年版《中國藥典》（四部）][10]試驗，吸取上述3種溶液各2 μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-氯仿-甲酸（4∶5∶1，V/V/V）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%三氯化鐵乙醇溶液，置日光燈下檢視。結(jié)果，供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點，詳見圖7。

圖6 藤茶粉末圖Fig 6 Powder micrograph of A.grossedentata

圖7 藤茶的薄層色譜圖1.對照品；2.TC-1；3.TC-2；4.TC-3；5.對照藥材；6.TC-5；7.TC-6；8.TC-7；9.TC-8；10.TC-9；11.TC-10；12.TC-11Fig 7 TLC chromatograms ofA.grossedentata samples1.reference substance；2.TC-1；3.TC-2；4.TC-3；5.control medicinal herb；6.TC-5；7.TC-6；8.TC-7；9.TC-8；10.TC-9；11.TC-10；12.TC-11

3 討論

壯藥是在壯醫(yī)理論和經(jīng)驗指導(dǎo)下用于疾病防治和衛(wèi)生保健的藥用物質(zhì)及其制劑，具有鮮明的民族性、傳統(tǒng)性和地域性特點，是祖國傳統(tǒng)醫(yī)藥的重要組成部分。隨著國家對民族醫(yī)藥的重視程度不斷增強(qiáng)，特別是《廣西壯族自治區(qū)壯藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》（一、二卷）正式頒布施行，結(jié)束了幾千年來壯藥無法制定技術(shù)依據(jù)及壯醫(yī)“有醫(yī)無藥”的歷史。然而，壯藥的發(fā)掘、整理和開發(fā)才剛剛起步，許多工作尚未完善，壯藥研究任重道遠(yuǎn)。

生藥學(xué)是應(yīng)用植（動）物學(xué)、植物化學(xué)、藥物分析學(xué)及本草學(xué)等學(xué)科理論知識和現(xiàn)代技術(shù)來研究生藥基源鑒定、活性成分、藥理作用、品質(zhì)評價及資源利用等問題的學(xué)科[11]。生藥學(xué)通過對中藥的大力研究，有了長遠(yuǎn)的發(fā)展，逐漸與中藥鑒定學(xué)結(jié)合在一起，對于準(zhǔn)確識別、鑒定中藥基源的種類，調(diào)查、考證中藥的資源起到了極大地推進(jìn)作用[12]。

本試驗結(jié)果表明，壯藥藤茶藥材性狀特征為莖扁圓柱形，節(jié)膨大，具細(xì)縱棱線；卷須二叉狀分枝，與葉對生；葉多皺縮，易碎，小葉邊緣具疏鋸齒，頂生小葉有柄，上表面灰褐色，下表面黃綠色；薄紙質(zhì)。氣微，味微甘。顯微鑒別特征為莖橫切面呈多角形，外韌型維管束20～30個，環(huán)狀排列，中柱鞘纖維明顯，韌皮薄壁細(xì)胞中可見棕色塊，分泌細(xì)胞常存在于韌皮射處；薄壁細(xì)胞中可見草酸鈣簇晶、針晶，方晶偶見。粉末中同時出現(xiàn)各種草酸鈣結(jié)晶（針晶、簇晶及方晶）、棕色塊和單細(xì)胞非腺毛。TLC鑒別以二氫楊梅素為對照品，用乙酸乙酯-氯仿-甲酸（4∶5∶1，V/V/V）為展開劑，噴以10%三氯化鐵乙醇溶液顯色，分離、鑒別效果良好。以上特征明顯，專屬性強(qiáng)，可作為藤茶鑒別的參考依據(jù)。

綜上所述，本研究所建方法可用于壯藥藤茶的生藥學(xué)鑒別。

[1] 清·劉善述.草木便方[M].重慶：重慶出版社，1988：181.

[2] 廣西壯族自治區(qū)革命委員會衛(wèi)生局.廣西本草選編：上冊[M].南寧：廣西人民出版社，1974：662、872.

[3] 劉濤，張曉敏，鄭紅艷，等.藤茶提取物中二氫楊梅素的化學(xué)純化方法研究[J].中國海洋大學(xué)學(xué)報：自然科學(xué)版，2014，44（1）：71.

[4] 高倩倩.藤茶總黃酮和二氫楊梅素含藥血清對肝癌Hep-G2細(xì)胞增殖及凋亡的影響[J].中國中藥雜志，2011，36（4）：501.

[5] 歐賢紅，呂林艷.藤茶提取物抗慢性肝纖維化作用[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2011，17（3）：132.

[6] 閻莉.藤茶雙氫楊梅樹皮素抗鴨乙肝病毒的實驗研究[J].中國中藥雜志，2009，34（7）：908.

[7] 王丹，郁建平，劉灝，等.藤茶二氫楊梅素抗氧化活性研究[J].山地農(nóng)業(yè)生物學(xué)報，2013，32（3）：243.

[8] 盧忠英，方可，陳仕學(xué).藤茶中二氫楊梅素的藥理作用研究進(jìn)展[J].廣州化工，2015，43（7）：16.

[9] 中國科學(xué)院《中國植物志》編委會.中國植物志：第48卷[M].北京：科學(xué)出版社，1982：53.

[10] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：四部[S].2015年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：57.

[11] 蔡少青.生藥學(xué)[M].6版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2011：1.

[12] 許保海，翟勝利.對傳統(tǒng)中藥學(xué)與生藥學(xué)的比較探討[J].中國藥房，2009，20（20）：1 121.

Study on the Pharmacognosy Identification of Zhuang MedicineAmpelopsis grossedentata

ZENG Xiangyan，YAN Pinghua，WANG Miao，CAI Yi（College of Pharmacy，Guangxi University of Chinese Medicine，Nanning 530001，China）

OBJECTIVE：To establish a method for the pharmacognosy identification of Zhuang medicine Ampelopsis grossedentata.METHODS：Original plant，medicinal properties and microscopic identification features were observed；TLC was adopted for the qualitative identification of it.RESULTS：The branch，leat and flower of original plant showed significant identification features，as well as the stem，tassel，leat and the stem cross-section，leaf cross-section，leaf surface and powder of medicinal materials；TLC spots were clear and well separated.CONCLUSIONS：The study can be used for the identification of Zhuang medicineA.grossedentata.

Ampelopsis grossedentata；Original plant identification；Morphological identification；Microscopic identification；TLC；Pharmacognosy

R917

A

1001-0408（2016）33-4716-03

2015-12-18

2016-03-13）

（編輯：張 靜）

廣西壯族自治區(qū)科學(xué)技術(shù)廳重點實驗室項目（No.桂科基字〔2014〕32號）；廣西“2011協(xié)同創(chuàng)新中心”項目（No.桂教科研〔2013〕20號）；廣西重點學(xué)科項目（No.桂教科研〔2013〕16號）；《廣西壯藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（第三卷）》質(zhì)量評價與標(biāo)準(zhǔn)研究項目（No.MZY2013001）

＊碩士研究生。研究方向：中藥及民族藥品種鑒別及開發(fā)利用。E-mail：1471090976@qq.com

#通信作者：教授。研究方向：中藥及民族藥品種鑒別及開發(fā)利用。E-mail：Caiyi118@163.com

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2016.33.36