胡曉琴，韓 春（長(zhǎng)治學(xué)院化學(xué)系，山西長(zhǎng)治 046011）

·藥物分析與檢定·

HS-GC法同時(shí)測(cè)定尼莫地平緩釋片中乙醇和丙酮的殘留量Δ

胡曉琴＊，韓 春#（長(zhǎng)治學(xué)院化學(xué)系，山西長(zhǎng)治 046011）

目的：建立同時(shí)測(cè)定尼莫地平緩釋片中乙醇和丙酮?dú)埩袅康姆椒ā７椒ǎ翰捎庙斂諝庀嗌V法。色譜柱為以6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷（DB-624）為固定液的毛細(xì)管柱，程序升溫，進(jìn)樣口溫度為230℃，檢測(cè)器為氫火焰離子化檢測(cè)器，檢測(cè)器溫度為250℃，載氣為氮?dú)猓魉贋?.0 ml/min，分流比為5∶1，頂空加熱溫度為90℃，平衡時(shí)間為20 min，頂空進(jìn)樣量為1.0 ml。結(jié)果：乙醇、丙酮檢測(cè)質(zhì)量濃度線性范圍分別為1.25～500.0 μg/ml（r＝0.999 9）、0.50～202.0 μg/ml（r＝0.999 2）；定量限分別為5.01、2.02 μg/ml，檢測(cè)限分別為1.67、0.67 μg/ml；精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗(yàn)的RSD＜3.0%；加樣回收率分別為96.81%～102.00%（RSD＝1.89%，n＝9）、96.64%～102.31%（RSD＝1.82%，n＝9）。結(jié)論：該方法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確，可用于同時(shí)測(cè)定尼莫地平緩釋片中乙醇和丙酮的殘留量。

頂空氣相色譜法；尼莫地平；乙醇；丙酮；有機(jī)溶劑；殘留量

尼莫地平（Nimodipine，NMP）是第二代雙氫吡啶類鈣離子阻滯藥，臨床上主要用于缺血性腦血管病、阿爾茨海默病、蛛網(wǎng)膜下腔出血等疾病的治療[1-3]，也是近年來治療高血壓的首選藥物之一[4]。尼莫地平緩釋片較其他普通劑型具有生物穩(wěn)定性高、作用時(shí)間長(zhǎng)、不良反應(yīng)少等特點(diǎn)，近幾年在臨床上應(yīng)用廣泛[5]。由于其制備過程中用到了有機(jī)溶劑乙醇和丙酮[6]，可能會(huì)出現(xiàn)有機(jī)溶劑超標(biāo)，長(zhǎng)期使用會(huì)對(duì)人體造成嚴(yán)重危害[7]。該藥收載于國(guó)家新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)WS-（X-068）-2004Z，但該標(biāo)準(zhǔn)未對(duì)有機(jī)溶劑殘留量作要求。因此，筆者根據(jù)2015年版《中國(guó)藥典》（四部）通則0861殘留溶劑測(cè)定法中對(duì)殘留溶劑的質(zhì)量控制要求（乙醇和丙酮的溶劑殘留限量應(yīng)＜0.5%）[8]，首次建立了采用頂空氣相色譜法（HS-GC）同時(shí)測(cè)定尼莫地平緩釋片中乙醇、丙酮?dú)埩袅康姆椒ǎ云跒楦玫乜刂圃撝苿┑馁|(zhì)量提供參考。

1 材料

1.1 儀器

7890A型氣相色譜儀，包括氫火焰離子化檢測(cè)器（FID）、7694E頂空自動(dòng)進(jìn)樣裝置、7890A色譜工作站（美國(guó)Agilent公司）；MS204TS型萬分之一電子天平（瑞士Mettler-Toledo公司）；KQ-100DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司，功率：100 W，頻率：40 kHz）。

1.2 藥品與試劑

尼莫地平緩釋片（山西振東制藥股份有限公司，批號(hào)：20150801、20150802、20150803、20150903，規(guī)格：60 mg/片）；乙醇對(duì)照品（批號(hào)：20150911，純度≥99.8%）、丙酮對(duì)照品（批號(hào)：20140611，純度≥99.7%）均購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；N，N-二甲基甲酰胺（DMF）為色譜純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：以6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷（DB-624）為固定液的毛細(xì)管柱（30 m×0.32 mm，1.4 μm）；程序升溫：初始溫度40℃，保持2 min，以10℃/min升溫至60℃，再以30℃/min升溫至230℃，保持2 min；進(jìn)樣口溫度：230℃；檢測(cè)器：FID；檢測(cè)器溫度：250℃；載氣：氮?dú)猓涣魉伲?.0 ml/min；分流比：5∶1；頂空加熱溫度：90℃；平衡時(shí)間：20 min；頂空進(jìn)樣量：1.0 ml。

2.2 溶液的制備

2.2.1 混合對(duì)照品溶液 精密稱取乙醇對(duì)照品50.1 mg、丙酮對(duì)照品50.6 mg，置于同一100 ml量瓶中，加DMF溶解并定容，搖勻，作為混合對(duì)照品貯備液。精密量取上述混合對(duì)照品貯備液5.0 ml，置于50 ml量瓶中，加DMF定容，搖勻，經(jīng)0.22 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液1.0 ml，置于頂空瓶中，密封，作為混合對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液 取樣品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約含尼莫地平300 mg），置于10 ml量瓶中，加DMF溶解并定容，超聲處理10 min，經(jīng)0.22 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液1.0 ml，置于頂空瓶中，密封，作為供試品溶液。

2.2.3 空白對(duì)照溶液 精密量取DMF 1.0 ml，置于頂空瓶中，密封，作為空白對(duì)照溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

精密量取“2.2”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液、供試品溶液和空白對(duì)照溶液各適量，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜，詳見圖1。由圖1可知，在該色譜條件下，乙醇和丙酮均能達(dá)到基線分離，分離度均＞2.0；理論板數(shù)以乙醇峰計(jì)為12 567，乙醇、丙酮的保留時(shí)間分別為3.926、4.375 min。結(jié)果表明，其他成分對(duì)測(cè)定無干擾。

圖1 氣相色譜圖A.混合對(duì)照品；B.供試品；C.空白對(duì)照；1.乙醇；2.丙酮Fig 1 GC chromatogramsA.mixed reference substance；B.test sample；C.blank control；1.ethanol；2.acetone

2.4 線性關(guān)系考察

精密稱取乙醇對(duì)照品25.0 mg、丙酮對(duì)照品10.1 mg，置于同一10 ml量瓶中，加DMF溶解并定容，搖勻，制成乙醇和丙酮質(zhì)量濃度分別為2.50、1.01 mg/ml的線性溶液。精密量取上述線性溶液0.005、0.01、0.1、0.2、0.6、1.0、1.5、2.0 ml，分別置于10 ml量瓶中，加DMF定容，搖勻，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。以待測(cè)成分質(zhì)量濃度（x，μg/ml）為橫坐標(biāo)、峰面積（y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得乙醇回歸方程為y＝1 312.4x－23.98（r＝0.999 9），丙酮回歸方程為y＝2 883.7x－4.503（r＝0.999 2）。結(jié)果表明，乙醇、丙酮檢測(cè)質(zhì)量濃度線性范圍分別為1.25～500.0、0.50～202.0 μg/ml。

2.5 定量限與檢測(cè)限考察

取“2.2.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液適量，等倍逐步稀釋，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，記錄峰面積。當(dāng)信噪比為10∶1時(shí)，得乙醇、丙酮的定量限分別為5.01、2.02 μg/ml；當(dāng)信噪比為3∶1時(shí)，得乙醇、丙酮的檢測(cè)限分別為1.67、0.67 μg/ml。

2.6 精密度試驗(yàn)

精密量取“2.2.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液適量，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，記錄峰面積。結(jié)果，乙醇、丙酮峰面積的RSD分別為1.78%、1.83%（n＝6），表明儀器精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液（批號(hào)：20150801）適量，分別于室溫下放置0、1、2、4、6、8 h時(shí)按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果，乙醇、丙酮峰面積的RSD分別為2.48%、1.88%（n＝6），表明供試品溶液在室溫下8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批樣品（批號(hào)：20150801）適量，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果，乙醇、丙酮峰面積的RSD分別為1.91%、2.99%（n＝6），表明本方法重復(fù)性良好。

2.9 加樣回收率試驗(yàn)

取樣品（批號(hào)：20150903）適量，研細(xì)，精密稱取1.45 g（約含尼莫地平300 mg），共9份，分別置于10 ml量瓶中，再分別加入低、中、高質(zhì)量濃度的乙醇、丙酮對(duì)照品，每組3份，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見表1。

2.10 樣品中殘留溶劑的測(cè)定

取4批樣品適量，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算乙醇、丙酮的殘留量，結(jié)果見表2。

3 討論

3.1 溶劑的選擇

為保證待測(cè)樣品中的乙醇、丙酮完全釋放，必須選擇適合的溶劑來完全溶解待測(cè)樣品。筆者分別參考了水、二甲基亞砜（DMSO）和DMF[8]，結(jié)果尼莫地平不溶于水，不能保證乙醇、丙酮的有效溶出；但其在DMSO和DMF中均能溶解，經(jīng)試驗(yàn)驗(yàn)證，當(dāng)DMF作為溶劑時(shí)，乙醇、丙酮的分離度良好、峰形對(duì)稱、靈敏度高。故本試驗(yàn)選擇DMF為溶劑。

3.2 色譜柱的選擇

為了使待測(cè)殘留溶劑獲得較好的分離度，筆者分別考察了非極性色譜柱Rtx?-1（50 m×0.53 mm，10 μm）、弱極性色譜柱HP-5（30 m×0.32 mm，0.50 μm）、中等極性色譜柱以DB-624為固定液的毛細(xì)管柱（30 m×0.32 mm，1.4 μm）和極性色譜柱Rtx?-wax（20 m×0.18 mm，0.4 μm）對(duì)樣品的處理。結(jié)果，采用Rtx?-1、HP-5時(shí)，乙醇、丙酮保留時(shí)間較長(zhǎng)；采用Rtx?-wax時(shí)，分離度較差；以DB-624為固定液的毛細(xì)管柱時(shí)，保留時(shí)間短、分離度好、峰形對(duì)稱。故選擇以DB-624為固定液的毛細(xì)管柱為本試驗(yàn)的色譜柱。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）Tab 1 Results of recovery tests（n＝9）

表2 樣品中殘留溶劑測(cè)定結(jié)果（n＝3，%）Tab 2 Determination results of residual solvents in samples（n＝3，%）

3.3 樣品處理的優(yōu)化

目前，殘留溶劑的檢查，只強(qiáng)調(diào)原料藥中有機(jī)溶劑的殘留情況，而對(duì)制劑過程中使用的有機(jī)溶劑沒有引起足夠的重視[9]，尤其是在脂質(zhì)體[10-11]、緩（控）釋[12-13]、微丸包衣[14-15]等過程中使用的有機(jī)溶劑。本試驗(yàn)對(duì)樣品的處理采用將藥片研細(xì)，并進(jìn)行超聲處理，保證了藥片充分溶于溶劑中，使得最終測(cè)量結(jié)果能夠真實(shí)反映藥物制劑中的有機(jī)溶劑殘留量。

綜上所述，本方法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確，可用于同時(shí)測(cè)定尼莫地平緩釋片中乙醇和丙酮的殘留量。

[1] 鄒普漢，林碧紅.尼莫地平治療腦出血后缺血性腦損傷的療效分析[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2012，18（31）：16.

[2] 劉學(xué)文，田步先，蔡愛民，等.尼莫地平2種給藥途徑治療蛛網(wǎng)膜下腔出血后腦血管痙攣的療效觀察[J].中國(guó)藥房，2010，21（16）：1 490.

[3] 徐雄波，潘育方，黃志軍，等.鼻腔給藥尼莫地平納米乳的制備及腦組織靶向性初步評(píng)價(jià)[J].中國(guó)藥學(xué)雜志，2012，47（8）：594.

[4] 李向平，王煥.2002－2004年我院抗高血壓藥物應(yīng)用分析[J].中國(guó)新藥雜志，2006，15（7）：563.

[5] 毛麗超.尼莫地平緩釋片研究[D].長(zhǎng)春：吉林大學(xué)，2013：17.

[6] 李菲，曹娟，張娜，等.尼莫地平緩釋片的制備及體外釋藥特性[J].中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2010，30（15）：1 291.

[7] 相莉，張宇佳，陳少華，等.氣相頂空色譜法測(cè)定尼莫地平脂質(zhì)體中有機(jī)溶劑殘留[J].中國(guó)藥師，2014，17（2）：227.

[8] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：四部[S].2015年版.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015：105-109.

[9] 時(shí)濤，陳振德.頂空氣相色譜法測(cè)定制劑包衣中乙醇和二氯甲烷殘留量[J].西北藥學(xué)雜志，2009，24（4）：251.

[10] 向俊霖，張莉，王曉輝，等.尼莫地平脂質(zhì)體的制備及體外透皮研究[J].中國(guó)藥房，2009，20（1）：36.

[11] 劉曉謙，王錦玉，仝燕，等.脂質(zhì)體制備技術(shù)及其研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥學(xué)雜志，2011，46（14）：1 084.

[12] 魏鳳環(huán)，田景振，王懷忠.緩釋控釋技術(shù)[J].山東中醫(yī)雜志，2000，19（9）：554.

[13] 吳旖.百部總生物堿的化學(xué)成分研究及其緩釋片的研制[D].廣州：暨南大學(xué)，2015：3.

[14] 王智軍，李紅英，唐星.尼莫地平速釋微丸及緩釋微丸的制備[J].沈陽藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，24（2）：74.

[15] 林楊，李娟.包衣技術(shù)在微丸制備中的應(yīng)用[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2015，11（15）：63.

Residual Determination of Ethanol andAcetone in Nimodipine Sustained-release Tablet by HS-GC

HU Xiaoqin，HAN Chun（Dept.of Chemistry，Changzhi College，Shanxi Changzhi 046011，China）

OBJECTIVE：To establish a method for the residual determination of ethanol and acetone in Nimodipine sustained-release tablet.METHODS：Headspace GC was on the column of capillary column with fixative solution of 6%cyanopropyl phenyl-94%dimethyl polysiloxane（DB-624）by temperature programming，injector temperature was 230℃，detector was a flame ionization detector，detector temperature was 250℃，carrier gas was nitrogen gas，flow rate was 2.0 ml/min，split ratio was 5∶1，equilibrium temperature was 90℃，equilibrium time was 20 min，and volume of sample was 1.0 ml.RESULTS：The linear range was 1.25-500.0 μg/ml for ethanol（r＝0.999 9）and 0.50-202.0 μg/ml for acetone（r＝0.999 2）；limits of quantitative were 5.01，2.02 μg/ml，limits of detection were 1.67，0.67 μg/ml，respectively；RSDs of precision，stability and reproducibility tests were lower than 3.0%；recoveries were 96.81%-102.00%（RSD＝1.89%，n＝9），96.64%-102.31%（RSD＝1.82%，n＝9），respectively. CONCLUSIONS：The method is simple，rapid，accurate，and can be used for simultaneous residual determination of ethanol and acetone in Nimodipine sustained-release tablet.

HS-GC；Nimodipine；Ethanol；Acetone；Organic solvent；Residue

R917

A

1001-0408（2016）33-4686-03

2016-01-08

2016-08-31）

（編輯：劉 柳）

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（No.21402012）；國(guó)家自然科學(xué)項(xiàng)目子項(xiàng)目（No.GJZXM201605）

＊助教，碩士。研究方向：藥物分析。電話：0355-2178113。E-mail：244174693@qq.com

#通信作者：副教授，博士。研究方向：藥物合成與分析。電話：0355-2178113。E-mail：coldspringfibre@126.com

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2016.33.26