翁順太 姚 堯 鄭忠東 鄭立鋒 吳潤生 陳先進(jìn) 詹先強(qiáng)*

（1.福建省人獸共患病研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室福建省疾病預(yù)防控制中心，福州350001；2.福州大北農(nóng)生物技術(shù)有限公司，福州350014）

剖腹凈化建立清潔級獺兔核心群關(guān)鍵技術(shù)探討

翁順太1姚 堯2鄭忠東1鄭立鋒1吳潤生2陳先進(jìn)2詹先強(qiáng)2*

（1.福建省人獸共患病研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室福建省疾病預(yù)防控制中心，福州350001；2.福州大北農(nóng)生物技術(shù)有限公司，福州350014）

為研究獺兔在生物醫(yī)藥領(lǐng)域中的作用，對非等級獺兔進(jìn)行實(shí)驗(yàn)動(dòng)物化研究，成功建立了清潔級獺兔核心種群。采用剖腹凈化技術(shù)取得清潔級仔兔，以SPF級日本大耳白母兔作為代乳母兔哺育至離乳。對10只經(jīng)產(chǎn)非等級母獺兔進(jìn)行剖腹取得48只仔獺兔；離乳時(shí)成活36只，成活率為75%（其中2只由于預(yù)產(chǎn)期判斷失誤，剖腹取出的13只仔兔無法自主哺乳全部死亡，故不予統(tǒng)計(jì)）。經(jīng)過質(zhì)量檢測，符合清潔級實(shí)驗(yàn)兔國家標(biāo)準(zhǔn)。本方法用于建立清潔級獺兔核心群是可行的，但關(guān)系培育成功與否的幾個(gè)關(guān)鍵問題應(yīng)值得注意。

剖腹凈化清潔級獺兔核心群建立關(guān)鍵技術(shù)

動(dòng)物種質(zhì)資源綜合開發(fā)和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物化一直是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)科發(fā)展的重點(diǎn)內(nèi)容之一。多年來，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技工作者相繼開展了許多種類的野生動(dòng)物或經(jīng)濟(jì)動(dòng)物的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物化研究工作，為肝炎、心血管病、血吸蟲病、異種器官移植等研究提供了廣泛而又豐富的實(shí)驗(yàn)材料。

為探索獺兔在生物醫(yī)藥領(lǐng)域中的特殊用途，本實(shí)驗(yàn)室成功地將其進(jìn)行實(shí)驗(yàn)動(dòng)物化，積累了一些寶貴經(jīng)驗(yàn)。現(xiàn)將建立清潔級獺兔核心群過程中積累的幾個(gè)關(guān)鍵技術(shù)問題予以探討。

1 代乳母兔與獺兔的選擇及準(zhǔn)備

1）代乳母兔的選擇關(guān)系到動(dòng)物母性的好壞（即能否主動(dòng)、安靜地予以哺乳）、泌乳能力和哺育仔兔數(shù)量。應(yīng)選擇繁殖能力強(qiáng)、乳頭4對以上、外陰端正、第二或第三胎的經(jīng)產(chǎn)種母兔；母性好，無食仔、咬仔等惡癖；注意堅(jiān)決不能采用第一胎的母兔。由于溝通不準(zhǔn)確，本實(shí)驗(yàn)室引進(jìn)的是第一胎孕兔且有的只有3對乳頭，結(jié)果有2只在代乳過程中出現(xiàn)泌乳不足、帶仔能力差的現(xiàn)象，剖腹取出的48只仔兔中被咬死、踩死，因營養(yǎng)不足而死亡的累計(jì)達(dá)12只之多，離乳成活率僅為75%，這與代乳母兔的性能關(guān)系密切。

2）母獺兔的選擇關(guān)系到產(chǎn)仔數(shù)、仔兔個(gè)體發(fā)育強(qiáng)壯與否。最好應(yīng)選擇經(jīng)產(chǎn)、繁殖能力強(qiáng)、乳頭4對以上且無流產(chǎn)、無產(chǎn)死胎經(jīng)歷的母獺兔。與之交配的公獺兔應(yīng)健康、體質(zhì)健壯、各部位發(fā)育勻稱、肌肉豐滿、臀部發(fā)達(dá)、腰部肥壯、體重3.8 kg（7.5月齡）以上、性欲旺盛、生殖器官發(fā)育良好、睪丸大而對稱。還應(yīng)注意母兔之間、公兔之間彼此均無血緣關(guān)系，利于育成后擴(kuò)大繁殖時(shí)能最大限度避免近親交配。本試驗(yàn)有統(tǒng)計(jì)意義的8只母獺兔中，產(chǎn)仔數(shù)在5只（含5只）以下的就有3只，可見獺兔的選擇不可輕視。

2 獺兔臨產(chǎn)期的判斷

臨產(chǎn)期判斷正確與否是關(guān)系仔兔成活率與個(gè)體強(qiáng)壯的關(guān)鍵因素。剖腹產(chǎn)手術(shù)應(yīng)在自然分娩前數(shù)小時(shí)完成，這是提高仔獺兔成活率非常重要的時(shí)間點(diǎn)。太早剖腹，仔兔先天不足、體質(zhì)弱，成活率低；過遲剖腹，仔兔則進(jìn)入產(chǎn)道自然分娩，受污染幾率增加。因此，做好臨產(chǎn)期的判斷尤為關(guān)鍵。應(yīng)綜合觸診（摸胎）、推算、觀察等方法進(jìn)行判斷。摸胎以腹部膨脹、外陰開口潮紅、觸及胎仔頭部與軀干大小一致為臨產(chǎn)依據(jù)。推算以交配時(shí)間30 d為宜，準(zhǔn)確記錄交配時(shí)間很重要。配種的最佳時(shí)間是在發(fā)情盛期，過早或過晚配種，受孕效果均不理想。為提高母兔受孕率，最好能采用兩次配種法，即在第一次交配后8～12 h，用同一公兔進(jìn)行第二次配種。本試驗(yàn)所利用的10只非等級孕獺兔不是自己選配的，預(yù)產(chǎn)時(shí)間被誤導(dǎo)，導(dǎo)致其中2只預(yù)產(chǎn)期判斷失誤，剖腹取出的13只仔兔平均體重才35 g，不能自主吃乳，2 d后全部死亡。觀察則以母兔活動(dòng)減少、突然食欲下降、呈現(xiàn)不安、拉毛做窩等行為為臨產(chǎn)前兆[1]。

3 剖腹產(chǎn)技術(shù)應(yīng)熟練

1）從切除子宮到胎兒自主呼吸應(yīng)在2 min內(nèi)完成，越快越好。要求操作者具備嫻熟的操作技能，這就需要術(shù)前應(yīng)多練手，掌握基本要領(lǐng)，實(shí)戰(zhàn)時(shí)方能從容應(yīng)對。

2）先用鹽酸氯胺酮肌肉注射進(jìn)行麻醉，劑量為30 mg/kg，身體變軟即取仰臥位保定于解剖臺上。在

進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)時(shí)，曾參考教科書介紹的22～44 mg/kg劑量范圍，嘗試采用25 mg/kg作為麻醉劑量，結(jié)果在手術(shù)時(shí)動(dòng)物出現(xiàn)掙扎、慘叫，這可能與麻醉當(dāng)天沒有禁食有關(guān)。在正式試驗(yàn)前，根據(jù)預(yù)產(chǎn)期判斷及摸胎等，對預(yù)產(chǎn)母兔提前12 h禁食，麻醉劑量提高至30 mg/kg，3 min即達(dá)到麻醉效果。

3）取出胎兒后，由助手迅速用紗布輕柔地擦去口鼻黏液，促其自主呼吸，擦干并按摩全身直到紅潤，最后剪斷臍帶，放入32℃保溫箱中。

4 如何不被識別非親生

如何不讓代哺乳母兔識別出仔獺兔非親生是仔獺兔成活的關(guān)鍵。一旦識別出來非親生，會(huì)出現(xiàn)拒絕哺乳或咬仔現(xiàn)象。因此，在剖腹時(shí)，給仔獺兔處理完畢，還應(yīng)在仔獺兔身上（包括仔兔的趾甲內(nèi)）均勻地涂抹上代哺乳母兔的尿液，可以有效干擾哺乳母兔的嗅覺而不能識別出非親生。本試驗(yàn)在剛開始階段，由于經(jīng)驗(yàn)不足，處理得不夠細(xì)導(dǎo)致仔兔被咬死、踩死、餓死的現(xiàn)象較多。識別不出是非親生，才能保證仔獺兔早吃、吃足初乳。初乳中含有豐富的母源抗體，是提高仔兔抗病力和成活率的關(guān)鍵營養(yǎng)因素。

5 控制好環(huán)境條件

控制好內(nèi)環(huán)境指標(biāo)特別是做好保溫工作、減少噪聲污染、保持良好的通風(fēng)換氣、維持空氣干燥，對保證仔兔的成活率至關(guān)重要。

1）由于初生仔兔體溫調(diào)節(jié)系統(tǒng)尚未發(fā)育，體溫調(diào)節(jié)能力不穩(wěn)定，至10日齡才具有體溫調(diào)節(jié)能力，故在15日齡前應(yīng)特別注意對仔兔的保溫，確保窩內(nèi)溫度不低于32℃[2]。即使在剖腹階段，也應(yīng)注意胎兒保暖以防受涼，可用柔軟溫暖舒適的厚紗布鋪墊。15日齡后每天降低1℃直至25℃。屏障環(huán)境對兔類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的溫度要求是18～22℃，一般實(shí)際運(yùn)轉(zhuǎn)過程中設(shè)定值和控制值也在該范圍。因此，應(yīng)使用保溫?zé)艋虬谉霟舻缺毓ぞ撸拍軡M足仔兔對環(huán)境溫度的要求。

2）動(dòng)物特別是幼齡動(dòng)物對噪聲非常敏感，動(dòng)物本身音域較寬，長時(shí)間的噪聲污染會(huì)產(chǎn)生聽源性痙攣而引起變態(tài)反應(yīng)。因此，應(yīng)注意機(jī)械設(shè)備所產(chǎn)生的噪聲尤其是轟鳴聲對動(dòng)物的影響。

3）為了保持屏障系統(tǒng)較高的潔凈度水平及微生物等級，往往每天都要利用消毒劑對實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行消毒滅菌。如果持續(xù)使用較高濃度消毒劑，會(huì)刺激幼齡動(dòng)物的呼吸道黏膜，重者死亡。因此，保持良好的通風(fēng)換氣非常重要，房間換氣次數(shù)最好控制在20次/h以上。

4）空氣中相對濕度對動(dòng)物機(jī)體熱調(diào)節(jié)關(guān)系密切。高濕度條件下，微生物、寄生蟲易于繁殖，引發(fā)某些傳染性疾病。特別是幼齡家兔對高濕度具有較強(qiáng)敏感性，極易引發(fā)仔兔疥癬、球蟲病等疾病。因此，維持穩(wěn)定的相對濕度水平（60%以下）是必要的。

6 自然哺乳與人工哺乳的比較選擇

哺乳順利與否直接影響仔兔的營養(yǎng)水平，影響仔兔的成活率以及個(gè)體的強(qiáng)壯。采用何種方式哺乳，仁者見仁、智者見智。如果條件允許（除非某物種是第一次進(jìn)行實(shí)驗(yàn)動(dòng)物化研究），筆者傾向于采用自然哺乳方式。只要能接受仔兔，母兔的天性能讓仔兔得到充分的營養(yǎng)。反觀人工哺乳，很多因素都會(huì)影響哺乳效果，例如，人工乳的配方是否達(dá)到營養(yǎng)需求、流速控制是否適合仔兔的正常吞咽速度（特別是流速過快，乳汁會(huì)嗆入呼吸道引起死亡）、人工乳溫度控制（溫度過高造成口腔或咽喉黏膜灼傷影響哺乳而消瘦死亡；特別應(yīng)注意哺乳后期乳汁溫度下降，溫度過低容易引起腹瀉而死亡）、哺乳量的把控（量太少，滿足不了營養(yǎng)需求；量過大則增加胃腸壓力，引發(fā)胃腸功能紊亂）等，同時(shí)人工管理難度較大。

7 注意營養(yǎng)補(bǔ)充

仔兔達(dá)20日齡后，應(yīng)適當(dāng)補(bǔ)充全價(jià)飼料，減輕對母乳的依賴，同時(shí)也是斷乳后對飼料的適應(yīng)過程。由于仔兔消化能力有限，可將飼料在乳粉溶液中浸泡予以輕微軟化再投喂；25日齡至35日齡，可適當(dāng)補(bǔ)充乳粉或經(jīng)高壓過的黃豆。35日齡離乳時(shí)仔兔增重效果明顯，平均體重達(dá)650 g/只。

應(yīng)充分保證代乳母兔的營養(yǎng)水平，提高泌乳量。適當(dāng)提高日糧中的粗蛋白含量，最好使用繁殖飼料。如果使用基礎(chǔ)生長飼料，日糧中可添加經(jīng)高壓過的黃豆，每天添加量為50粒/只。本試驗(yàn)剛開始時(shí)有2只代乳母兔泌乳能力差，經(jīng)添加黃豆2 d后，泌乳能力慢慢增加，仔兔發(fā)育恢復(fù)正常。

8 減少對仔兔的侵?jǐn)_

減少對仔兔的侵?jǐn)_是保證仔兔健康成長的重要因素之一。因哺乳、換窩、稱重等需要反復(fù)接觸或抓取仔兔是不可避免的，但應(yīng)盡量減少次數(shù)，尤其是哺乳方面。為減少因哺乳原因?qū)ψ型迷斐傻那謹(jǐn)_，建議籠器具生產(chǎn)廠家研發(fā)出新型產(chǎn)品，使繁殖籠與產(chǎn)箱對接相連，既充分發(fā)揮母兔的母性又能保證仔兔早吃、吃足初乳，保證營養(yǎng)、促進(jìn)生長，也能解放人工。

[1]方喜業(yè).醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社,1995：230.

[2]婁成民.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量管理標(biāo)準(zhǔn)與檢驗(yàn)檢測技術(shù)實(shí)用手冊[M].貴陽：貴陽科技出版社,2003：26.

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1003-4331（2016）06-0044-02

福建省引導(dǎo)性項(xiàng)目(No.2015Y0048)資助。

翁順太，主任技師，E-mail：wengshuntai@163.com。

*通信作者：詹先強(qiáng)，獸醫(yī)師，E-mail：zxq9952049@163.com。